- •Основы оптики
- •Преломление.
- •Ограничения пучков лучей
- •Хроматическая аберрация.
- •Фокусировочный механизм: грубая и точная фокусировка
- •Узел крепления и перемещения конденсора
- •Узел крепления объективов
- •1.3. Оптика микроскопа
- •Исправленные в спектральном диапазоне:
- •Исправление полевых аберраций
- •100 % Глицерин — 1,4739
- •Конструктивные особенности объективов
- •Р ис. 43. Принцип освещения по Келеру (пояснения в тексте)
- •Типы световых микроскопов
- •2 . Стереомикроскоп по схеме Аббе
- •Микроскопы-игрушки
- •Школьные или учебные микроскопы
- •Студенческие или рутинные микроскопы
- •Рабочие микроскопы
Исправление полевых аберраций
Планобъективами называют такие объективы, в которых исправлены кривизна поверхности изображения, астигматизм и кома, что обеспечивает резкое изображение по всему полю наблюдения.
В сочетании с исправлением в спектральном диапазоне различают план-ахроматамы и планапохроматамы.
Планобъективы увеличивают поле исследования за счет резкого видения объекта по всему полю. Обычно применяются при фотографировании, причем наиболее эффективно применение планапохроматов. Такие объективы содержат в оптической схеме до 13 линз.
При исправлении полевых аберраций не на все поле, а на 4/5 поля объективы относятся к полупланобъективам. Они гораздо дешевле планобъективов (количество линз в оптической схеме полупланобъектива доходит до 10, но обычно их 6), и в настоящее время рабочие модели современных зарубежных микроскопов комплектуются полупланобъективам типа «ACHROSTIGMAT», а отечественные - типа «СТИГМАХРОМАТ», это так называемые «улучшенные ахроматы».
Контактные объективы
В контактных объективах исправлен астигматизм. При работе объективы приводятся в соприкосновение с исследуемым объектом. В результате контакта поверхность объектива принимает форму первой поверхности фронтальной линзы, что обеспечивает плоскостность изображения. Освещение объекта осуществляется через объектив.
Исправление вторичного спектра (хроматическая разность увеличения - ХРУ)
Объективы без хроматической разности увеличения появились в 80-е годы.
До 60-х годов нашего столетия объективы одного комплекта имели величину хроматической разности увеличения от 0% до 2%, что требовало применения как простых окуляров Гюйгенса (ХРУ соответствует 0%), так и компенсационных окуляров (ХРУ 1-2 %). Для получения хорошего качества изображения требовалось включение в комплект микроскопа сдвоенного комплекта окуляров.
Бурное развитие микроэлектроники в 80-е годы потребовало создания комплектов объективов и простых окуляров без ХРУ для микроскопов отраженного света, а затем и для микроскопов проходящего света. Такие комплекты были созданы практически всеми фирмами и получили название «объективы, свободные от хроматической разности увеличения».
В настоящее время осуществляется постепенный переход к объективам свободным от хроматизма увеличения в микроскопах нового поколения.
Рабочее расстояние и числовая апертура – еще два важных параметра, характеризующий объектив.
Рабочим расстоянием называется расстояние от верхней поверхности покровного стекла до оправы первой линзы объектива в положении, когда в микроскоп четко видно изображение объекта (т.е. глубина резкости).
Апертура – действующее отверстие, определяемое размерами линз или диафрагмами. У объектива таковым является размер фронтальной (первой) линзы. Именно размер фронтальной линзы объектива определяет величину апертурного пучка – светового конуса, попавшего в объектив после прохождения через объект, а максимальный плоский угол этого пучка, стягиваемый линзой в центр поля объекта или изображения двумя противоположенными крайними лучами носит название угловой апертуры. Безразмерная величина, соответствующая условию A=ne·sin, где ne – показатель преломления среды между объективом и объектом, а α – ½ полного угла, попадающего в объектив света, и есть числовая апертура (Numerical aperture - NA).
Если пространство между линзой и объектом заполнено воздухом (nвоздуха=1), т.е. система сухая (без иммерсии), то NA не превышает 0,95. Если между объективом и препаратом находится иммерсионное масло, за счет чего система, через которую проходит свет, становится гомогенной, то может быть использован значительно более широкий пучок света. В современных объективах максимальная числовая апертура составляет 1,25-1,3.
С уществует связь между апертурой и рабочим расстоянием. Чем больше числовая апертура объектива, тем меньше рабочее расстояние. На рис. 35 показана зависимость рабочего расстояния и апертуры объектива. А – объектив с малой числовой апертурой, В – с большой. От величины числовой апертуры объектива и длины волны света, которым освещается препарат, зависит разрешающая способность микроскопа. Чем больше числовая апертура, тем больше разрешение микроскопа, на рис. 36 продемонстрированы микрофотографии одного и того же участка тест-объекта.
Апертура 1,3 |
Апертура 1,0 |
Апертура 0,77 |
Апертура 0,6 |
Апертура 0,45 |
Апертура 0,35 |
Рис. 36. Разрешающая способность объективов разной числовой апертуры
Показатель числовой апертуры выносится на маркировку объектива.
Помимо степени исправления аберраций выделяют также несколько типов объективов и по свойствам иммерсии [immersio - погружение]:
сухие системы (без иммерсии) - между препаратом и фронтальной линзой объектива находится воздух;
и иммерсионные системы - между препаратом и фронтальной линзой объектива находится иммерсионная жидкость (см. рис. 37).
Иммерсионные жидкости необходимы для увеличения числовой апертуры и соответственно повышения разрешающей способности иммерсионных объективов, специально рассчитанных для работы с этими жидкостями и, соотв етствующим образом, маркированными. Иммерсионные жидкости, помещенные между объективом и препаратом, имеют более высокий показатель преломления, чем воздух. Поэтому, отклоненные мельчайшими деталями объекта лучи света, не рассеиваются, выходя из препарата, а попадают в объектив, что приводит к повышению разрешающей способности. Показатель преломления иммерсии, которая применяется в микроскопе, близок к показателю преломления стекла фронтального компонента объектива:
кедровое масло — 1,515