- •4.7. Осаждение белков фенолами
- •4.8. Осаждение белков алкалоидными реактивами
- •4.9. Осаждение белков органическими растворителями
- •1. Цель работы
- •2. Задание
- •3. Теоретическая часть
- •Краткая характеристика нуклеиновых кислот клеток высших организмов
- •2.4. Определение сиаловых кислот в сыворотке крови методом Гесса.
- •4.4. Определение сиаловых кислот в сыворотке крови методом Гесса
- •2.1. Гидролиз казеина и определение в гидролизате фосфорной кислоты
- •4.1. Гидролиз казеина и определение в гидролизате фосфорной кислоты
- •1. Цель работы
- •2. Задание
- •2.1. Определение прочности связи между белковым и липидным компонентами липопротеидов ткани печени по качественной пробе л. Делямуре
- •2.2. Сделать выводы и оформить отчет.
- •3. Теоретическая часть
- •4.1. Определение прочности связи между белковым и липидным компонентами липопротеидов ткани печени по качественной пробе л. Делямуре
1. Цель работы
Изучить состав и строение липопротеидов.
2. Задание
2.1. Определение прочности связи между белковым и липидным компонентами липопротеидов ткани печени по качественной пробе л. Делямуре
2.2. Сделать выводы и оформить отчет.
3. Теоретическая часть
Липопротеиды - это сложные комплексные соединения, в состав которых, кроме белка, входит липидный компонент. Липидами называются органические вещества, существенно различающиеся по химической природе и выполняемым функциям, но обладающие сходными признаками, а именно нерастворимостью в воде и растворимостью в неполярных растворителях, таких как хлороформ, эфир или бензол.
Липид-белковые комплексы условно делятся на липопротеиды, растворимые в воде, и структурные протеолипиды, являющиеся жирорастворимыми. Биологическая роль этих комплексов огромна. Липофильные протеолипиды являются основой биологических мембран и определяют их свойства и функции, а, следовательно, отвечают за селективные и защитные механизмы, проведение нервного импульса; входя в состав переносчиков дыхательной цепи, активизируют процессы переноса электронов и протонов и т.д. Гидрофильные липопротеиды выполняют в основном транспортную функцию и участвуют в переносе гидрофобных липидов, жирорастворимых витаминов и гормонов к различным органам и тканям.
4. ПОРЯДОК ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ
4.1. Определение прочности связи между белковым и липидным компонентами липопротеидов ткани печени по качественной пробе л. Делямуре
Прочность связи между белками и липидами в липопротеидных комплексах исследуют методом экстракции липидов серным эфиром с последующей окраской их суданом III.
Ход работы
4.1.1. Экстрагирование липопротеидов из ткани. 1 г печени растирают в ступке, прибавляют 5 мл физиологического раствора, снова тщательно растирают и оставляют стоять 30 мин, периодически перемешивая пробу. Жидкость с осадка сливают в колбочку, а остаток ткани снова растирают с 5 мл физиологического раствора. Жидкость сливают в ту же колбу, раствор фильтруют или центрифугируют. Надосадочную жидкость сливают в мерный цилиндр и физиологическим раствором доводят объем до 50 мл.
4.1.2. Экстрагирование липидов серным эфиром из липопротеидного комплекса. В контрольную пробирку отмеривают 0,9 мл надосадочной жидкости из цилиндра (или сыворотки крови) и 0,1 мл физиологического раствора, в опытную пробу - 0,9 мл надосадочной жидкости из цилиндра (или сыворотки крови) и 0,1 мл 0,05% раствора тиолового яда (йодацетата). В обе пробирки приливают по 2-3 капли спиртового раствора судана-III. Пробирки встряхивают, затем добавляют по 1 мл серного эфира, снова встряхивают и оставляют стоять до расслоения жидкостей. В контрольной пробе липопротеидный комплекс не разрушается, поэтому судан-III окрашивает нижний водный слой. В опытной пробе тиоловый яд разрушает связь между белковым и липидным компонентами липопротеида, серный эфир экстрагирует липидный компонент, поэтому судан-III окрашивает верхний эфирный слой.
Результаты работы заносят в таблицу 9:
Результаты опыта Таблица 9.
Проба |
Количество надосадочной жидкости, мл |
Тиоловый яд, мл |
Физиологический раствор, мл |
Серный эфир, мл |
Результат |
1 |
0,9 |
- |
0,1 |
1,0 |
|
2 |
0,9 |
0,1 |
- |
1,0 |
|
5. СОДЕРЖАНИЕ ОТЧЕТА
Отчет составляется с указанием цели, задания, экспериментальные данные и выводы.
6. ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОПРОВЕРКИ
6.1. Что такое липопротеиды и из каких компонентов они состоят?
6.2. Как можно подразделить липид-белковые комплексы? Какова их биологическая роль?
6.3. Какими белками представлен белковый компонент в сывороточных липопротеидах?
6.4. Каков состав простетических групп липопротеидов?
6.5. Как связаны белковый компонент и простетическая группа в липопротеидах?
6.6. В чем сходство и различия a- и b-липопротеидов, хиломикронов и пре-b-липопротеидов?
6.7. Какие классы сывороточных липопротеинов рассматриваются как атерогенные и антиатерогенные факторы?
6.8. В чем заключается метод определения прочности связи между белковым и липидным компонентами липопротеидов по качественной пробе Л.Делямуре?
6.9. На чем основан метод электрофоретического разделения сывороточных липопротеидов?
6.10. Каково клиническое значение определения a- и b-липопротеидов в сыворотке крови?
6.11. При каких патологических состояниях увеличивается доля b-липопротеидов?
6.12. Что такое гиперлипопротеинемия? Какие типы гиперлипопротеидемий Вам известны?