Идентификация опухолевых АГ
•Элюирование пептида с поверхности олухолевой клетки. Специфичные пептиды (связанные с МНС), растворяют в подкисленной среде.
•Разделяют с помощью ВЭЖХ.
•Отдельные пелтидные фракции инкубируют с ТАР-дефицитными клетками (не происходит связывания молекул МНС с пептидами).
•Не несущие пептида молекулы МНС разрушаются.
•Добавление пептидов стабилизирует молекулы МНС и происходит лрезентация пептидов.
•Презентирующая клетка узнается и уничтожается опухоль-специфичным клоном Т-клеток.
•Характеристика пептидов проводится масс спектрометрией.
Специфичность противоопухолевого иммунитета
Специфичность Тц-клеток
копухолевому актигенному пептиду
•Тц-клетки мышей, иммунизированных опухолевыми клетками tum-- клона, in vitro уничтожают опухолевые клетки, покрытые пептидом — продуктом tum- -гена, но не клетки, покрытые гомологичным пептидом из родительской опухоли.
•Два этих пептида различаются одним аминокислотным остатком.
Экспрессия САLLА
внормальных клетках и лимфомах
1.Антиген CALLA (common acute lymphoblastic leukemia-assotiated antigen) обычно экспрессируется только на В-клетках- предшественниках (лимфобластах); по численности их менее 1% среди нормальных клеток костного мозга.
2.Экспрессия CALLA значительно возрастает при наиболее распространенной форме детского лейкоза.
Опухоли
человека
*
CD4+
CD8+
•Иммунологическая реакция при раке молочной железы. Срез опухоли, окруженной плотным инфильтратом из мононуклеарных клеток. Воспалительный процесс указывает, что опухолевые клетки распознаются клетками иммунной системы, замедляют рост опухоли или уничтожают опухолевые клетки.
•Т-клетки СD4+ и СD8+ в раковой опухоли молочной железы выявлены с помощью иммунологического метода окрашивания на щелочную фосфатазу (розовый цвет) с использованием моноклональных антител. Видны окружающие опухоль клетки CD4 (вверху) и в меньшем количестве CD8 (внизу), лимфоциты внутри опухоли.
Смешанная культура лимфоцитов
и опухолевых клеток (СКЛОК)
• Лимфоциты, выделенные из
крови, из дренирующих область опухоли лимфоузлов или непосредственно из опухолевой ткани, культивировали совместно с аутологичными опухолевыми клетками, инактивированными рентгеновским облучением или обработкой митомицином С.
• После этого определяли
способность лимфоцитов к пролиферации (по включению 3H-тимидина).
• Разработан тест для
определения способности лимфоцитов лизировать клетки- мишени, основанный на высвобождении изотопа.
Презентация опухолевого антигена клеткам иммунной системы
1.Непосредственная презентация антигена в отсутствие ко-стимулирующих молекул, приводящая к анергии.
2.Непосредственная презентация антигена на клетках опухоли, которые экспрессируют ко-стимулирующие молекулы, приводит к активации Тц- клеток.
3.Непосредственная презентация на опухолевых клетках и опосредованная презентация специализированными АПК, приводящая к активации и Тц-, и Тх-клеток.
Противоопухолевый иммунитет
Распознавание и иммунный цитолиз
опухолевых клеток
Распознавание и иммунный цитолиз опухолевых клеток
•Механизмы индукции и реализации иммунного ответа на опухолевые АГ аналогичны механизмам реакции на АГ гистосовместимости при отторжении трансплантата.
•Этапы 1- 4 соответствуют индукции ответа CD8+ CTL и СD4+ Th1-клеток, этапы 5-6 - эффекторной реакции, сводящейся к индукции апоптоза и гибели опухолевых клеток.