- •1. Предмет и задачи медицинской микробиологии.
- •2. История развития микробиологии.
- •3. Основные принципы классификации микробов и их таксономия:
- •4. Свойства эукариотов и прокариотов.
- •5. Морфологические свойства бактерий.
- •6. Структура бактериальной клетки.
- •Схима строения оболочек бактерий
- •8. Капсула. Химическое строение, функции и метод выделения.
- •9. Споры. Спорогенез. Методы выявления спор.
- •10. Жгутики. Строение, функции, и способы окраски. Методы изучения подвижности бактерий. Пили.
- •11. Методы микроскопии: световая, темпнопольная, фазово-контрастная, электронная. Техника микрокопирования с иммерсионным объективом:
- •12. Особенности химического строения бактерий.
- •13. Механизмы питания бактерий. Поступление и выделение веществ и клетки.
- •14. Ферменты бактерий. Классификация ферментов.
- •15. Практическое использование ферментативной активности бактерий.
- •16. Методы определения ферментативной активности бактерий.
- •17. Внутривидовая идентификация бактерий.
- •18. Питательные среды, их классификацию. Требования к пс.
- •По составу:
- •По назначению питательные среды могут быть
- •Среды для анаэробов:
- •19. Стерилизация, аппаратура, контроль стерилизации.
- •Дезинфекция предметов медицинского назначения
- •Методы стерилизации и применяемая для этого аппаратура.
- •20. Дыхание бактерий
- •21. Рост и размножение бактерий. Кривая роста.
- •Размножение бактерий.
- •22. Культивирование и методы выделения чистой культуры аэробов и анаэробов.
- •Аэробы.
- •Анаэробы.
- •Выделение чистых культур.
- •Другие способы выделения чистых культур.
- •23. Культуральным свойства бактерий.
- •Характеристика колоний.
- •Некультивируемые формы бактерий.
- •27. Понятие о бактериофагах.
- •28. Вирулентные и умеренные фаги.
- •29. Основные стадии взаимодействия фага с бактерией.
- •30. Трансдукция и фазовая конверсия.
- •31. Лизогения.
- •32. Использование фагов.
- •33. Особенности организации генетического материала у микроорганизмов.
Выделение чистых культур.
Чистая культура (ЧК) – популяция м/о одного вида, выделенная на жидкой или плотной питательной среде в большом количестве.
Цели выделения.
Диагностика инфекций.
Выделение чистых культур – основа бактериологического метода, основан на выделение чистой культуры и ее идентификации (определении вида).
Получение биопрепаратов
Изучение биологических свойств бактерий
Санитарно-гигиеническое исследование
Этапы выделения чистой культуры аэробов.
Изучение смеси – мазок окраска по Грамму.
Разобщение бактериальных клеток в смеси и получение колоний:
По Дригальскому – штрихами по поверхности агара (петлей с материалом делают штриховые движения по пластинчатому агару, к последних штрихах выросту единичные колонии).
Метод серийных разведений Пастера в физ растворе.
Метод серийных разведений Коха в расплавленном агаре.
Проверка частоты колоний (мазок → окраска по Граму → микрокопирование).
Пересев колоний на скошенный агар для накопления чистой культуры.
Идентификация микроорганизма по:
Морфологическим свойствам
Тинкториальным свойствам
Культуральным свойствам
Ферментативным свойствам
Патогенным свойствам
Антигенными свойствам
Чувствительность к антибиотикам…
Выделение чистой культуры анаэробов:
Накопление анаэробов: смесь засевают на среду Китт-Тароцци и прогревают при t 80 0С 10 мин, спорообразующие анаэробы споры сохраняются, а прочие вегетативные формы м/о погибают. Затем питательная среда культивируется, споры прорастают, и анаэробы размножаются и накапливаются и накапливаются.
Получение колоний:
по Цейслеру – колонии анаэробов получают на поверхности агара в анаэростате
по Вейнбергу – колонии получают в трубках Вейон-Веньяла.
Проверка частоты (мазок → окраска по Граму → микрокопирование) – все анаэробы Гр(+).
Пересев Колоний на среду Китт-Тароцци и накопление чистой культуры анаэробов.
Идентификация, определение вида анаэроба.
Другие способы выделения чистых культур.
Можно использовать оптимальные температуры (зависит от термофильности бактерии).
Выделение спор при прогревании смеси 10 минут при t 80 0C
Использование феномена роения – распространение за территорию посева (посев делают в центре, а по мере роста бактерии обрастаю, поверхность агара, край колонии будет ЧК).
Метод Шукевича – выделение чистой культуры м/о обладающих ползучим ростом – на дно пробирки со скощенным агаром засевают материал, по мере деления бактерии ползут верх по агару, образую ЧК (Proteus vulgaris).
Фильтруемость бактерий – способность проходить через фильтры с определенной величиной спор.
Обработка смеси УФ-лучами, ультразвуком, антисыворотками, получение ЧК – устойчивы к этим факторам.
При электрофорезе смеси у анода или катода будут скапливать организмы с определенным зарядом.
Использование микроманипулятора (под микроскопом берут одну клетку и получают ЧК – клон на элективных питательных сред – потомство одной микробной клетки.
В питательные среды добавляют желчь, соли тиурита, NaCl, антибиотики, и выделяют ЧК устойчивых м/о к этим факторам.
Можно использовать дифференциально-диагностические среды.
Можно использовать биологический метод - внутрибрюшинно заражают смесью бактерий белых мышей и за счет тропизма, бактерии накапливаются в определенном органе.