4. Соотношение полярных и неполярных групп на поверхности нативных молекул белков

На поверхности большинства внутриклеточных белков преобладают полярные радикалы, однако соотношение полярных и неполярных групп отлично для разных индивидуальных белков

5. Растворимость белков

Растворимость зависит от всех свойств белков: формы, молекулярной массы, величины заряда, соотношения полярных и неполярных функциональных групп на поверхности белка. Кроме этого, растворимость белка определяется составом растворителя, т.е. наличием в растворе других растворённых веществ.

 Гидратация -белки растворяются и набухают

получения индивидуальных белков - их очистка от других белков, находящихся в растворе, полученном из данной ткани.

Так как белки обладают конформационной лабильностью, при работе с белками следует избегать денатурирующих воздействий, поэтому выделение и очистка белков происходят при низких температурах.

На первых стадиях очистки белков целесообразно использовать методы, учитывающие какую-либо характерную особенность данного белка, например термостабильность или устойчивость в кислых растворах. Первыми методами очистки необходимо удалить из раствора основную массу балластных белков, которые значительно отличаются от выделяемого белка физико-химическими свойствами. Впоследствии применяют всё более тонкие методы очистки белка.( Очистка белков избирательной денатурацией, Высаливание, Гель-фильтрация, Ультрацентрифугирование, Электрофорез белков)

Биосинтез нуклеиновых кислот и белков.

22.Строение нуклеиновых кислот. Связи, формирующие структуру днк, рнк. Строение хроматина и рибосом.

Нуклеиновые кислоты - высокомолекулярные соединения со строго определённой линейной последовательностью мономерами кот являются нуклеотиды.

Каждый нуклеотид содержит:

1. гетероциклическое азотистое основание(пуриновые-А,Г; пиримидиновые-Ц,Т,У),

2. пентозу(рибозой, дезоксирибозой)

3. остаток фосфорной кислоты.

Пентозу + основанием за счет N-гликозидной связи, пентоза-фосфат-пентоза

днк

рнк

Молекула ДНК представляет собой спираль, образованную 2 полинуклеотидными цепями, закрученными относительно друг друга и вокруг общей оси.

1. Первичная структура цепей ДНК-это порядок дезоксирибонуклеозидмонофосфатов в полинуклеотидной цепи. Мононуклеотиды связываются между собой 3*5*-фосфодиэфирными связями.(на 5*-конце-фосфатная гр-па; на 3*-свободная ОН-гр-па)

2. полинуклеотидные цепи в 2х-цепочечной молекуле ДНК расположены антипараллельно. Цепи удерживаются относительно друг другуза счет водородных связей между комплементарными азот. основаниями А-Т Г=Ц.

3. каждая ДНК упакована в отдельную хромосому.Хроматин-сод 5 типов гистонов(белки небольшого размера с высоким сод-м положительно заряж. а-т):Н2А,Н2В,Н3,Н4,Н1. Суммарный положительный заряд позволяет им прочно связываться с ДНК. Фрагмент ДНК+комплекс гистонов=нуклеосомы. Гистоны Н1+ДНК в межнуклеосомных уч-х и защищают эти уч-ки от действия нуклеаз.

4. негистоновые белки-разные типы регуляторных белков,связ-хся со спецеф послед ДНК + ферменты,уч-е в матричных биосинтезах

Первичная структура РНК-это порядок чередования рибонуклеозидмонофосфатов в полинуклеотидной цепи. Мононуклеотиды связываются между собой 3*5*-фосфодиэфирными связями. Различают тРНК, рРНК,мРНК они имеют 1 полинуклеотидную цепь.

отдельные уч-ки цепей РНК обр-т спирализованные петли-шпильки-за счет водород. связей между комплемент. азот основаниями А-У, Г=Ц

23+24.Типы РНК.Биосинтез ДНК(репликация):стехиометрия

Реплика́ция ДНК — это процесс удвоения молекулы ДНК. ДНК-полимераза.

1.ДНК-топоизомеразы, находясь перед репликативной вилкой, разрезают молекулу ДНК для облегчения ее расплетания и раскручивания.

2. ДНК-хеликазы, следуя за топоизомеразами, раскручивают и расплетают молекулу ДНК.

3. ДНК-связывающие белки (ДСБ) связывают расплетенные нити ДНК и стабилизируют их, не допуская обратного "слипания" друг с другом.

4. ДНК-полимераза δ (греч.: δ – дельта), согласовано со скоростью движения репликативной вилки, осуществляет синтез ведущей цепидочерней ДНК в направлении 5'→3' на матрице материнской нити ДНК по направлению от ее 3'-конца к 5'-концу (скорость до 100 пар нуклеотидов в секунду).

5. Непосредственно сразу после расплетания и стабилизации другой нити материнской молекулы к ней присоединяется ДНК-полимераза α  (α- альфа ) и в направлении 5'→3' синтезирует праймер (РНК-затравку) – последовательность РНК на матрице ДНК длиной от 10 до 200 нуклеотидов. После этого фермент удаляется с нити ДНК.

Вместо ДНК-полимеразы α к 3'-концу праймера присоединяется ДНК-полимераза ε (ε - эпсилон).

6. ДНК-полимераза ε как бы продолжает удлинять праймер, но в качестве субстрата встраивает дезоксирибонуклеотиды (в количестве 150-200 нуклеотидов). В результате образуется цельная нить из двух частей – РНК (т.е. праймер) и ДНК. ДНК-полимераза ε работает до тех пор, пока не встретит праймер предыдущего фрагмента Оказаки (синтезированный чуть ранее). После этого данный фермент удаляется с цепи.

7. ДНК-полимераза β встает вместо ДНК-полимеразы ε, движется в том же направлении (5'→3') и удаляет рибонуклеотиды праймера, одновременно встраивая дезоксирибонуклеотиды на их место. Фермент работает до полного удаления праймера, т.е. пока на его пути не встанет дезоксирибонуклеотид (еще более ранее синтезированный ДНК-полимеразой ε). Связать результат свой работы и впереди стоящую ДНК фермент не в состоянии, поэтому он сходит с цепи.

В результате на матрице материнской нити "лежит" фрагмент дочерней ДНК. Он называется фрагмент Оказаки.

8. ДНК-лигаза производит сшивку двух соседних фрагментов Оказаки, т.е. 5'-конца отрезка, синтезированного ДНК-полимеразой ε, и 3'-конца цепи, встроенного ДНК-полимеразой β.