Приложение № 1. Устный индивидуальный опрос. Система контрольных вопросов.

1. Потенциометрия. Характеристика метода, применение в лабораторной практике.

2. Фотометрия. Характеристика метода, применение в лабораторной практике.

3. Флюориметрия, сущность метода, значение в лабораторной практике.

4. Иммунохимия, сущность метода, значение в лабораторной практике.

5. Иммуноферментный анализ.

6. Метод «сухой химии», характеристика и применение в лабораторной практике.

7. Методы на уровне целостного организма:

а) энергетический баланс;

б) баланс веществ.

Сущность методом, значение в лабораторной практике.

Приложение № 2. Рассказ. Изложение нового материала.

Методы сбора и хранения материала оказывают существенное влияние на результаты исследования. В тоже время методы забора материала зависят от цели исследования. Выбираемый метод должен максимально защитить изучаемый показатель от изменений.

Анализ начинается с соответствующей подготовки пациента. Исследования проводят натощак (голодание 12 часов перед взятием пробы крови) на фоне физического и психического покоя. Особо об этом следует предупреждать пациента при взятии крови для исследований содержания глюкозы, липидов, КЩС и т.д.

Лекарственные препараты, которые использует пациент оказывают значительное влияние на конечные результаты анализа (гормоны, мочегонные средства, антибиотики, салициловая кислота и т.п.).

Существуют два основных способа взятия крови: взятие капиллярной крови из пальца (или, реже, из мочки уха) и венозной крови – из локтевой вены. Первый способ используют для оценки в большей мере изменений в артериальной крови (капиллярная кровь – это смешанная артериовенозная кровь), а также в случае серийных исследований (сахарные нагрузки). В остальных случаях пользуются венозной кровью.

Техника взятия крови из вены включает несколько обязательных требований:

а) стаз в вене должен быть кратковременным;

б) нельзя брать кровь во время или непосредственно после внутривенных капельных вливаний;

в) игла должна быть химически чистой и сухой;

г) кровь нужно собирать из иглы осторожно, не подвергая сильному встряхиванию пробирки;

д) пробирка должна быть сухой или содержать необходимый антикоагулянт. Она должна быть вымыта способом, как того требует метод исследования.

Все пробы должны быть строго промаркированы соответственно направлению на исследование и как можно быстрее доставлены в лабораторию в специальных контейнерах для транспортировки биологического материала.

А. ПОЛУЧЕНИЕ СЫВОРОТКИ.

Сыворотка крови – это плазма, лишенная белка фибриногена, который в процессе свертывания крови превращается в сгусток (фибрин) и выпадает в осадок.

Сыворотка более чистый препарат для исследования, поскольку не содержит антикоагулянтов, оказывающих побочное влияние на результаты (тормозят активность ферментов, являются комплексообразователями, содержат большие количества натрия, калия и аммиака). Нельзя использовать сыворотку для исследования компонентов, уровень которых быстро уравнивается между форменными элементами и жидкой частью крови или которые подвергаются быстрому обмену в клетках. Например, при определении содержания калия или неорганического фосфора, количество которого быстро увеличивается после гидролиза АТФ в эритроцитах.

Кровь из вены берут в строго стерильных условиях сухой иглой, сухим шприцом и в сухие пробирки. Для получения сыворотки антикоагулянт не добавляют. Доставленные в лабораторию пробирки закрывают ватной пробкой и помещают на 10-15 минут в термостат для прогревания при температуре 37ºС. Затем осторожно проводят проволокой или стерильной палочкой по внутренней стенке пробирки, чтобы ускорить получение сыворотки. Удерживая сгусток стеклянной палочкой, сыворотку сливают в центрифужную пробирку и центрифугируют.

Пробирку с кровью допускается выдерживать при комнатной температуре (20-26ºС) в течение 1 – 1,5 часа после взятия, сгусток отделяют от стенки пробирки пластиковой палочкой.

Если сыворотку требуется получить немедленно, то кровь центрифугируют 15 минут при 1500 об/мин на клинической центрифуге типа ОПН-3(800д) сразу же после её взятия. Полученную сыворотку переносят в центрифужную пробирку и вновь подвергают центрифугированию в течение 10 минут. Затем разливают в несколько пробирок для выполнения отдельных исследований.

Считается, что объем выделяемой сыворотки составляет 1/3 взятого объема крови (при некоторых патологических состояниях сыворотки получается намного меньше). Сыворотку желательно использовать для лабораторного исследования в день взятия крови. Если же исследование откладывается до следующего дня, пробирку с сывороткой закрывают пробкой и помещают в домашний рефрижератор, в котором хранят при температуре 4ºС.

Б. ПОЛУЧЕНИЕ ПЛАЗМЫ.

Для получения плазмы кровь собирают в пробирку, содержащую антикоагулянт (раствор ЭДТА – этилендиаминтетрауксусная кислота, 0,1% гепарина, соли лимонной, щавелевой кислот).

Цельную кровь нельзя долго хранить ни при комнатной температуре, ни в холодильнике (0 – 4ºС). Торможение метаболических процессов при низкой температуре приводит к постепенному уравниванию биологических градиентов между плазмой и эритроцитами и последующему гемолизу. Гемолиз может наступить в условиях:

а) венозного застоя;

б) энергетической аспирации крови шприцом;

в) при попадании воды из иглы;

г) после сильного встряхивания;

д) при длительном хранении цельной крови;

е) под действием высокой или низкой температуры.

Гемолиз оказывает значительное влияние на определение многих компонентов в крови, увеличивая результаты их исследования в плазме.

На результаты исследования существенное влияние оказывают условия хранения материала. Желательно проводить исследования сразу же после забора материала. Если выполнение анализа задерживается либо пробы отправляют в отдаленную лабораторию, то сыворотку или плазму хранят в холодильном контейнере, холодильнике или замораживают при −20ºС. Замороженные пробы могут храниться в течение 3 месяцев.

Исследуемый материал, как правило, сохраняют до окончания выполнения всех анализов, что позволяет в случае необходимости повторить определение.

В пробирки, предназначенные для взятия и хранения крови, предварительно вносят 3,8% раствор лимоннокислого или 0,1 М раствор щавелевокислого натрия 1 мл и набирают 9 мл крови – это отношение 1:10.

В зависимости от режима центрифугирования можно получить плазму богатую тромбоцитами – при 1000-1500 об/мин в течение 5-10 минут, и бедную тромбоцитами – при 3000-4000 об/мин в течение 10 минут.

Для некоторых исследований необходимы особые условия забора и хранения материала. Например, для исследования показателей КЩС и газов крови исключается требование «поработать рукой» перед забором крови из вены. Углекислый газ быстро диффундирует в окружающую атмосферу из-за значительной разности в парциальных давлениях. Кровь следует быстро охладить, не допуская контакта с воздухом. Желательно анализ проводить сразу после взятия крови.

Некоторые биохимические показатели исследуют в моче. Исследование мочи позволяет судить о характере и выраженности патологического процесса в почках, мочевыделительной системе, а также судить о состоянии других органов. Сбор мочи для исследования необходимо проводить в чистую сухую посуду, после тщательного туалета промежности и наружных половых органов. Первые несколько миллилитров мочи сливают в унитаз. Исследованию подлежит первая утренняя порция мочи, которая исключает влияние стресса, питания, раздражающих факторов. Исследование мочи проводят не позднее 1 – 1,5 часа после её выделения.

Если нужно исследовать суточную мочу, то сбор проводят следующим образом: в день сбора мочи утреннюю порцию мочи отбрасывают, а последующие порции собирают в чистую посуду и хранят в холодильнике, к собранной моче добавляют утреннюю порцию следующего дня, тщательно перемешивают.

При хранении мочи в ней могут быть бактерии, поэтому, если нет возможностей хранить на холоду, то применяют способы консервации мочи:

1. быстрое замораживание мочи при температуре −20ºС. После оттаивания такая моча пригодна для проведения большинства биохимических исследований.

2. Добавление к суточному объему мочи 5 мл 10% раствора тимола, или раствора соляной кислоты 50 мл концентрации 10 моль/л на суточное количество мочи.

Применяют и другие консерванты: жидкость Мюллера (10 г Nа₂SО₄ + 25 г К₂Сr₂О₇) на 100 мл мочи; хлороформную воду (5 – 7,5 мл хлороформа на 1 л воды) из расчета 20-30 мл на 1 л мочи.

Биологический материал необходимо рассматривать как потенциальный источник инфекции, особая осторожность требуется при работе с пробами «повышенного риска», полученными от пациента с гепатитом В, С или носителей ВИЧ.

В биохимической лаборатории обязательно проводят профилактику СПИДа. С этой целью:

1. одежда лаборанта – передник, нарукавники, перчатки, маска, халат, колпак;

2. соблюдение санитарно-гигиенического режима;

3. использование для забора крови только стерильного инструмента;

4. иметь «АнтиСпидовскую укладку», содержащую:

а) 3 навески по 0,05 г КМnО₄;

б) 3 навески по 30 г хлорамина;

в) 2 стеклянные литровые банки;

г) 2 пары резиновых перчаток (напальчники);

д) 1 пачка лейкопластыря;

е) ножницы;

ж) 50 мл 70% спирта;

з) 3 марлевых маски;

и) мешок пластиковый для сбора загрязненной одежды;

к) 2 флакона 5% йода;

л) альбуцид 20-30%;

м) перекись водорода 3%.

Приложение № 3.

Инструкция по выполнению практической работы № 6 по теме

«Введение. Техника сбора и хранения материала для исследований. Мероприятия профилактики СПИДа в лаборатории».

Цели занятия:

1. Освоить технику приготовления сыворотки и плазмы крови.

2. Научиться готовить необходимые компоненты для аптечки «АнтиСпид».

3. Изучить правила хранения биологического материала.

Исходный уровень знаний и умений.

Учащийся должен знать:

1. Как подготовить пациента к анализу.

2. Технику приготовления сыворотки и плазмы крови.

3. Правила сбора и хранения мочи для биохимического исследования.

4. Правила хранения сыворотки и плазмы крови.

Учащийся должен уметь:

1. Приготовить навески дезсредств для аптечки.

2. Собрать аптечку «АнтиСпид».

3. Центрифугировать.

4. Пипетировать.