2. Указания к занятию. Методические рекомендации:

   1. Внимательно прочтите инструкцию.

   2. Приготовьте необходимое оборудование и реактивы для исследования.

   3. Соблюдайте меры предосторожности при работе с биологическим материалом.

   4. Соблюдайте меры предосторожности при работе с гемокоагулометром.

   5. По окончании работы проведите дезинфекцию использованного биологического материала и посуды.

3. Практическая часть.

3.1. Лабораторная работа № 1: «Количественное определение фибриногена по Клауссу на гемокоагулометре CGL 2110».

ПРИНЦИП: Определение содержания фибриногена основано на измерении времени свёртывания разведенной плазмы избытком тромбина. В этом случае время свёртывания зависит только от концентрации фибриногена в плазме. Концентрацию фибриногена определяют по калибровочной прямой, используя плазму с известным содержанием фибриногена.

Оборудование и реагенты:

1. Набор для определения содержания фибриногена в плазме крови.

2. Дозатор, градуированные пипетки.

3. Штатив с пробирками, водяная баня, гемокоагулометр.

4. Дезинфицирующий раствор – 0,5% раствор Полидеза.

А. Приготовление реактивов.

Опыт 1. Приготовление рабочего буферного раствора.

Выполнение опыта:

Буфер имидазоловый концентрированный (5 мл) перелить в мерную колбу вместимостью 100 мл, долить до метки дистиллированной водой (разведение в 20 раз) и тщательно перемешать. Рабочий буферный раствор хранить при температуре +2-8°C не более 1 месяца.

Опыт 2. Приготовление тромбина для определения фибриногена.

Выполнение опыта.

Лиофильно высушенный тромбин человека с активностью около 50 МЕ (мл). Внести во флакон 2 мл дистиллированной воды и растворить содержимое при осторожном покачивании. Реагент готов к проведению анализа через 20 мин. после разведения.

Опыт 3. Приготовление раствора плазмы-калибратора.

Выполнение опыта.

Во флакон с плазмой-калибратором внести 1 мл дистиллированной воды и растворить при осторожном покачивании. Раствор готов к проведению анализа через 20 мин. после разведения.

Б. Построение и использование калибровочного графика.

Приготовить следующие разведения плазмы-калибратора:

	1	2	3	4
Содержание фибриногена в плазме-калибраторе, мл	2А*	А	0,5А	0,25А
Рабочий буферный раствор, мл	0,8	0,5	0,5	0,5
Раствор плазмы калибратора, мл	0,2	-	-	-

*А – содержание фибриногена в плазме-калибраторе, указанное в паспорте на набор.

Перемешать и перенести в пробирки (из первой во вторую, из второй в третью, из третьей в четвёртую) каждый раз по 0,5 мл полученного раствора. Значение содержания фибриногена в г/л отложить на оси X. На оси Y отложить значение времени свёртывания каждого разведённого образца плазмы-калибратора в секундах. Через полученные точки провести калибровочный график, который должен представлять собой прямую линию. Линейность в диапазоне концентраций фибриногена – от 0,6 до 5 г/л.

В. Проведение анализа.