- •Введение
- •Методы прижизненной диагностики гельминтозов
- •I. Гельминтоскопия
- •Макроскопическое исследование
- •2. Микроскопическое исследование:
- •II. Гельминтоовоскопия
- •1. Метод нативного мазка.
- •2. Метод последовательного промывания (метод осаждения).
- •3. Флотационные методы
- •Метод Щербовича.
- •4. Методика диагностики описторхоза плотоядных( метод Котельникова)
- •5. Метод седиментации с последовательным промыванием.
- •6. Метод седиментации с целлофановыми пленками (по г.А. Котельниковому и в.М. Хренову).
- •7. Метод соскоба с перианальных складок.
- •III. Количественные гельминтоовоскопические исследования.
- •1. Метод Столла.
- •2. Метод Акбаева.
- •IV. Гельминтоларвоскопия
- •1. Метод Бермана и Орлова.
- •2. Метод Вайда.
- •3. Метод культивирования личинок.
- •V. Культивирование яиц некоторых гельминтов и принудительное получение личинок для учебных целей
- •1. Получение онкосфер мониезий.
- •2. Культивирование яиц фасциол и получение мирацидиев.
- •3. Культивирование яиц параскарид лошадей и получение личинок
- •ViСпециальные диагностические исследования
- •1. Исследование мочи.
- •2. Исследование молока для выявления личинок нематод.
- •VII. Методы гельминтоларвоскопии тканей
- •VIII. Иммунобиологическая диагностика
- •IX. Диагностическая дегельминтизация
- •Рекомендуемая литература
- •Содержание
1. Метод нативного мазка.
Наиболее прост, но наименее эффективен. Он заключается в том, что берут 2-3 кусочка фекалий (с горошину), помещают на предметное стекло, разбавляют 2-3 каплями воды или смеси глицерина с водой (1:1). Затем грубые частички удаляют, а осадок исследуют под микроскопом. Глицерин просветляет препарат, что облегчает исследование и предохраняет препарат от быстрого высыхания. От одного животного одновременно рекомендуют готовить 2-3 препарата. Недостаток этого метода в том, что при слабой инвазии он дает большой процент отрицательных результатов. Данным методом можно исследовать фекалии на стронгилидоз, аскаридоз, фасциолез, трихоцефалез и другие.
2. Метод последовательного промывания (метод осаждения).
Небольшую порцию фекалии (5-10 гр.) смешивают с 10%-ым количеством воды. Смесь фильтруют через металлическое сито или марлю, отстаивают в течение 10 минут (в среднем), после чего слой жидкости сливают, а к осадку добавляют свежую порцию воды и снова дают отстояться 6-8 минут. И так делают до тех пор, пока верхний слой не станет прозрачным. Затем жидкость сливают, а осадок микроскопируют на наличие яиц. Данным методом диагностируют фасциолез и другие трематодозы.
3. Флотационные методы
Эти методы основаны на принципе флотации: всплытие вследствие низкой плотности яиц и личинок гельминтов на поверхность исследуемой взвеси при обработке пробы растворами различных солей. Для вылавливания всплывших яиц используют петлю из мягкой проволоки с диаметром кольца 2-10 мм. При меньшем диаметре затрудняется сбрасывание капли на предметное стекло, а при большем - пленка в кольце разрывается. Целесообразно брать с поверхности от 3 до 6 капель в зависимости от величины покровного стекла. Если же поставлена цель - обнаружить яйца, то исследуют поверхностный слой капель без покровного стекла.
В настоящее время для флотации предложено большое количество насыщенных растворов солей: хлорид натрия (поваренная соль) плотностью 1,18-1,20 (400г на 1л воды), нитрат аммония (гранулированная или химически чистая аммиачная селитра) плотностью 1,3 (1500г на 1л воды), нитрат свинца (азотнокислый свинец) плотностью 1,5 (6550 г на 1 л воды), нитрат натрия (натриевая селитра) плотностью 1,38-1,4 (100 г на 1 л воды), тиосульфат натрия плотностью 1,4 (1750 г на 1 л воды), хлорид цинка плотностью 1,82 (2000 г на 1 л горячей воды), сульфат магния (английская соль) плотностью 1,26-1,28 (920 г на 1 л воды).
Наилучшей флотационной способностью обладают растворы при t 20-22˚ С.
Методами флотации следует пользоваться для диагностике нематодозов и аноплоцефалезов. При наличие соответствующих солевых растворов с высокой плотностью можно диагностировать и трематодозы.
Метод Фюллеборна.
5-8 грамм (можно 10-20 г) фекалий в стаканчик или фарфоровую ступку и заливают небольшим количеством насыщенного раствора поваренной соли. После тщательного растворения фекалий в смесь доливают 150-200 мл. раствора и процеживают через сито в сухой и чистый стакан размешивая стеклянной палочкой. Взвесь отстаивают 10-15 мин. Затем с поверхности отстоявшейся жидкости с помощью металлической петли снимают пленку, переносят ее на предметное стекло для микроскопирования.
Метод Фюллеборна рекомендуют применять главным образом для обнаружения яиц круглых гельминтов (аскарид, стронгилид, трихоцефалят и других) и частично для ленточных червей (тений, аноплоцефалид).
Метод Дарлинга.
Этот метод сочетает процедуры осаждения и флотации. Фекалии смешивают с водой до полужидкой консистенции и центрифугируют 3-5 мин., вследствие чего яйца гельминтов осаждаются на дно. Верхний слой жидкости сливают, а к осадку добавляют жидкость Дарлинга (глицерин, смешанный в равных частях с насыщенным раствором поваренной соли). И уже после этого яйца паразитических червей из осадка всплывают на поверхность. Металлической петлей пленку снимают на предметное стекло, накрывают покровным и исследуют. Применяют при диагностике кишечных нематодозов.