- •Введение
- •Методы прижизненной диагностики гельминтозов
- •I. Гельминтоскопия
- •Макроскопическое исследование
- •2. Микроскопическое исследование:
- •II. Гельминтоовоскопия
- •1. Метод нативного мазка.
- •2. Метод последовательного промывания (метод осаждения).
- •3. Флотационные методы
- •Метод Щербовича.
- •4. Методика диагностики описторхоза плотоядных( метод Котельникова)
- •5. Метод седиментации с последовательным промыванием.
- •6. Метод седиментации с целлофановыми пленками (по г.А. Котельниковому и в.М. Хренову).
- •7. Метод соскоба с перианальных складок.
- •III. Количественные гельминтоовоскопические исследования.
- •1. Метод Столла.
- •2. Метод Акбаева.
- •IV. Гельминтоларвоскопия
- •1. Метод Бермана и Орлова.
- •2. Метод Вайда.
- •3. Метод культивирования личинок.
- •V. Культивирование яиц некоторых гельминтов и принудительное получение личинок для учебных целей
- •1. Получение онкосфер мониезий.
- •2. Культивирование яиц фасциол и получение мирацидиев.
- •3. Культивирование яиц параскарид лошадей и получение личинок
- •ViСпециальные диагностические исследования
- •1. Исследование мочи.
- •2. Исследование молока для выявления личинок нематод.
- •VII. Методы гельминтоларвоскопии тканей
- •VIII. Иммунобиологическая диагностика
- •IX. Диагностическая дегельминтизация
- •Рекомендуемая литература
- •Содержание
2. Метод Вайда.
На предметное или часовое стекло кладут несколько шариков свежевыделенных фекалий овец, коз и добавляют небольшое количество воды температурой около 40о. Если шарики помещают на предметное стекло, то достаточно несколько капель воды. Через 40 мин. шарики удаляют, оставшуюся жидкость на стекле исследуют под микроскопом на наличие личинок нематод. Методика эффективна при условии, если фекалии плотные. Применяют для диагностики диктеокаулеза, мюллериоза, протостронгилеза, цистокаулеза овец и коз.
3. Метод культивирования личинок.
В желудочно-кишечном тракте жвачных и лошадей паразитируют гельминты большого количества родов и видов из подотряда Strongylita. Яйцо этих гельминтов по своим размерам и строению идентичны, поэтому гельминтоовоскопическими методами можно поставить лишь групповой диагноз на стронгилятозы. Дифференциально диагностируют стронгилят по инвазионным личинкам, которые имеют характерные для каждого рода и даже вида морфологические особенности и размеры.
Для культивирования личинок берут небольшое количество свежих фекалий, помещают в стакан или банку. Посуду с пробами фекалий закрывают марлей или стеклом, ставят в теплое место или в термостат при t 25-27о С на семь дне или на 10-12 дней при комнатной температуре. За этот период фекалии периодически увлажняют водой. После культивирования фекалий исследуют по методу Бермана.
V. Культивирование яиц некоторых гельминтов и принудительное получение личинок для учебных целей
1. Получение онкосфер мониезий.
Инвазионные яйца M. expansа треугольной, M. benedeni четырехугольной формы. Они интенсивно-серого цвета. При обычном просмотре (под микроскопом) свежих яиц онкосферы не всегда обнаруживаются. Если же яйца, полученные при разрушении зрелых члеников цестод, хранятся в жидкости Барбагалло, то они значительно просветляются и онкосферы просматриваются лучше. Однако для получения подвижных онкосфер с сохранившимися эмбриональными крючками необходимо иметь свежие и зрелые членики. Членики мониезий в чашке Петри можно сохранять в сменяемой воде при t 5-6о С в течении 15-20 суток.
Для получения онкосфер следует, кусочки зрелого членика поместить в 2-3 капли теплого физ. раствора и разрушить их с помощью препаровальных игл. Затем остатки членика удаляют, а яйца накрывают покровным стеклом. После осмотра яиц при помощи игл слегка сдавливают покровное стекло. Вне скорлупы яйца светло-серые и округлой формы, онкосферы хорошо заметны, у них активно меняется конфигурация, и сокращаются эмбриональные крючья.
2. Культивирование яиц фасциол и получение мирацидиев.
Половозрелых фасциол кладут между двумя предметными стеклами и слегка сдавливают. Для культивирования яиц хорошо отмытую фасциолу помещают в чашку Петри с дехлорированной водой и при помощи препаровальных игл разрушают матку. Гельминта удаляют, и взвесь яиц отмывают 2-3 раза. Яйца хорошо видны даже невооруженным глазом, а под МБС-1 они напоминают гусиные яйца, но слегка серо-желтого цвета.
Яйца фасциол удобно культивировать в чашках Петри из расчета 150-200 штук в 40 мл воды при t 18-24о С или в термостате при t 26-28о С. Чашки накрывают неплотно и помещают в конверт из черной фотографической бумаги для защиты от света. Через 12-14 суток обычно формируются продолговатые мирацидии, которые контролируются путем взятия пипеткой порции яиц и микроскопией на предметном стекле. Мирацидии при дневном свете активизируются и освобождаются из яйца. Хорошо заметны даже под лупой МБС-1 (в отраженном свете), под которой можно проследить их движение.