Str pneumoniae.
1. Микроскопия мазков по Граму. Гр(+) диплококки.
2. Бактериологический метод. Первичный посев материала больного на кровяной агар (зона гемолиза) и на сывороточные среды с 0,1% глюкозы для получения колоний. На сывороточном агаре появляются мелкие прозрачные колонии, напоминающие капельки росы. Колонии свежевыделенных культур диплококка на кровяном агаре мелкие, круглые, прозрачные, окруженные зоной ɑ-гемолиза (зеленая зона), в полужидком агаре — хлопьевидный рост, в желатине — рост по уколу без разжижения.
Пересев колоний на скошенный агар, идентификация чистой культуры. Мазок по Граму, по культуральным свойствам, Б/х активность, чувствительность к антибиотикам.
Биохимические свойства.
Ферментируют с образованием кислоты глюкозу, лактозу, сахарозу, маннит; не ферментируют арабинозу и дульцит; не образуют пигмента и индола.
3. Серологический метод диагностики. РПГА.
4. Экспресс-диагностика. ПЦР, ИФА, Иммунофлуоресценция.
Staph. aureus. Пневмония слева.
Haemophilus influenzae.
1. Микроскопия мазка.
Мелкая (0,3-0,5 × 0,2-0,3 мкм) неподвижная коккобацилла, располагается одиночно, попарно и скоплениями, образует капсулу.
2. Бактериологический метод. Образует маленькие, непрозрачные плоские колонии на средах, содержащих кровь (кровяной агар, шоколадный агар, среда Левенталя), не растёт на простых питательных средах, не содержащих кровь, для жизнедеятельности необходимы факторы X (гемин) и V (НАД, зависимость от факторов является систематическим признаком.
Лучшая среда для первого посева – Шоколадный агар. Образуют S и R колонии. Гладкие колонии S- типа образуются H. influenzae типа В,
образующих капсулу.
КА
Перепосев производится на сывороточном агаре для получения чистой культуры. Идентификация по культуральным свойствам ( прозрачные мелкие колонии), по морфологии и по феномену «набухания капсулы».
Подтверждением диагноза служит выделение гемофильной палочки (гной, мокрота, цереброспинальная жидкость, материал, взятый со слизистых оболочек).
3. ПЦР, ИФА, Иммунофлуоресценция.
Можно обнаружить капсульный антиген гемофильной палочки с помощью реакции встречного иммуноэлектрофореза или иммуноферментного метода. Выявление ДНК гемофильной палочки (Haemophilus influenzae) в плазме крови методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).
4. Серология. Определение антител к гемофильной палочке в сыворотке является ретроспективным методом диагностики заболевания, так как необходимо исследовать сыворотку в первую неделю заболевания и через 10-14 суток. Диагностическим считается нарастание титра антител через 10- 14 суток не менее чем в 4 раза при исследовании парных сывороток.
Mycoplasma pneumoniae.
Диагностика инфекций, вызванных Mycoplasma pneumoniae, вызывает
затруднения вследствие сложной природы возбудителя, высокой серопозитивности населения и возможности транзиторного асимптомного носительства микроорганизма.
1. Серологический метод. Специфические антитела класса IgM определяются уже через 4 дня после появления первых симптомов заболевания, IgG антитела несколькими днями позже. Обычно наблюдают непрерывное повышение титра IgM и особенно IgG класса. Выявление антител класса IgG важно для подтверждения диагноза. Их титр увеличивается в 3-4 раза к 10-му или, во всяком случае, к 21 дню с момента появления симптомов заболевания.
Достоверные результаты получают при исследовании “парных” сывороток крови больного, взятой в первые дни болезни и через разные промежутки времени от начала заболевания. В этом случае удается наблюдать динамику нарастания антител.
! Однако, интерпретация результатов серологического исследования требует определенной осторожности, так как вследствие активации поликлональных В-клеток могут появиться “неспецифические антитела”; другие возбудители инфекционных заболеваний, включая цитомегаловирус, вирусы Эпштейн-Барра и кори, могут вызывать развитие сходных эффектов, что затрудняет оценку результатов исследования.
2. Экспресс-диагностика. ПЦР.
Выявление антигенов Mycoplasma pneumoniae в материале методом прямой иммунофлюоресценции.
Полученный мазок с материалом от больного обрабатывают поликлональными антителами к цитоплазматической мембране Mycoplasma pneumoniae, меченных ФИТЦ. При просмотре препарата в люминисцентном микроскопе в результате произошедшей реакции антиген- антитело определяется зеленая флюоресценция микоплазм. Положительная оценка результатов исследования предполагает выявление в препарате не менее 10 ярко-зеленых гранул, четко выявляющихся на красноватом фоне препарата. При получении меньшего количества светящихся гранул в препарате и отсутствие в препарате эпителиальных клеток исследование рекомендуется повторить. Если количество эпителиальных клеток в препарате достаточно, а количество светящихся гранул менее 10, выдается отрицательный результат.