- •Цитохимические исследования лейкоцитов
- •35 Мл буферного раствора.
- •Метод азосочетания (модификация м. Г. Шу-
- •130 Активность фермента высокая при остром миелобластном лейкозе, слабая — при остром монобластном и отсутствует — при остром лимфобластном лейкозе.
- •Кислая а-нафтилацетат-эстераза.
- •40 Мл буферного раствора (реактив № 2); встря-
- •Нафтол-as d-хлорацетат-эстера-
- •Пероксидаза (миелопероксида-
- •Фетальный гемоглобин. Метод Ветке.
- •37 °С в течение 30 мин цитратно-фосфатный
- •Эритроцитов (соэ).
- •Унифицированный микрометод Панченкова
- •1/4 (До метки 0,75).
Пероксидаза (миелопероксида-
ЗА) (К. Ф. 1.11.1.7). Фермент, локализующий-
ся преимущественно в специфической зернисто-
сти цитоплазмы гранулоцитов и являющийся
маркером клеток миелоидной природы. Миелопероксидаза разрушает токсическую перекись водорода, образующуюся внутриклеточно в процессе жизнедеятельности клеток.
Метод Грэхема — Кнолля. П р и н ц и п .
В присутствии пероксидазы бензидин окисляется перекисью водорода в коричневый оксибензидин.
Р е а к т и в ы . 1. 4% формалиново-спирто-
вой раствор (10 частей 40 % формалина и 90 ча-
стей 96 % спирта). 2. Реактив на пероксидазу:
бензидин (на кончике ножа) растворяют в 6 мл
96 % спирта, прибавляют 4 мл воды и 0,02 мл
3 % перекиси водорода. Реактив годен к упот-
реблению в течение 5—6 дней. 3. Краситель
Романовского — Гимзы.
С п е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е . Не
требуется.
Х о д о п р е д е л е н и я . Свежие мазки (1 —
2-дневной давности) фиксируют 4 % формали-
ново-спиртовым раствором в течение 30 с. Обмывают в проточной воде и высушивают. Заливают реактивом на пероксидазу на 5 мин. Тщательно промывают в проточной воде и высушивают. Докрашивают красителем Романовского — Гимзы. Пероксидаза выявляется в цитоплазме клеток в виде коричневых гранул.
Цитохимические исследования
эритроцитов
Цитохимические исследования отличаются
простотой, не требуют специального оборудова-
ния и дают ориентировочное представление о ко
личестве исследуемого вещества. Исследования
эритроцитов проводят с целью выявления раз-
личных внутриклеточных включений, наличия
разных форм гемоглобина, ферментных нару-
шений.
Сидероциты и сидеробласты — это эритро-
циты и эритробласты (нормобласты), содержа-
щие в цитоплазме негемоглобиновое железо в
виде гемосидерина и ферритина.
П р и н ц и п . Окраска с помощью реакции
на берлинскую лазурь и образование внутри-
клеточных гранул синего цвета.
Р е а к т и в ы . 1. 2% раствор железисто-
синеродистого калия. 2. 0,1 н. раствор НС1
(8,2 мл концентрированной НС1 и дистиллиро-
ванной воды до 1 л). 3. 0,1 % раствор сафрани-
на. 4. Метиловый спирт.
С п е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е .
Микроскоп.
Х о д о п р е д е л е н и я . Фиксируют мазки
в метиловом спирте 10—20 мин и высушивают
на воздухе. Помещают в смесь равных частей
растворов 1 и 2 при температуре 50—56 °С
на 15—20 мин. Промывают в проточной воде
10—15 мин и ополаскивают дистиллированной
водой. Докрашивают раствором сафранина 3—
5 с.
Н о р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы . В перифе-
рической крови число сидероцитов не превы-
шает 1,1 % и составляет в среднем 0,6 + 0,04%,
в костном мозге их несколько больше—0,9 +
+ 0,09% (в среднем 0,2—2,1%), количество
сидеробластов (ядерных эритроцитов с железо-
содержащими гранулами) в костном мозге
23,7 + 2,4 %.
К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е . Снижение
сидероцитов и сидеробластов характерно для
железодефицитных анемий. Повышение железо-
содержащих клеток наблюдается при гемолити-
ческих анемиях, гипопластических анемиях, по-
сле операции спленэктомии.
Л и т е р а т у р а . Цитологические аспекты
заболеваний системы крови/Под ред. Э. И. Те-
рентьевой, Г. И. Козинца.— М.: Медицина,
1978, с. 162.