35 Мл буферного раствора.

С п е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е .

Холодильник.

Х о д и с с л е д о в а н и я . Высохшие на воз-

духе мазки фиксируют в 10 % растворе фор-

малина в абсолютном метаноле при температуре

О—5 °С в течение 30 с. На высохшие мазки наносят инкубационную среду после фильтрования и оставляют мазки при комнатной температуре на 8—10 мин. Ополаскивают в проточной воде в течение 10 с. Докрашивают метиловым зеленым в течение 15 мин или гематоксилином Майера 3—4 мин.

Метод азосочетания (модификация м. Г. Шу-

бича). П р и н ц и п см. метод азосочетания по

Кеплоу.

Р е а к т и в ы . I. 0,5 % раствор целлоидина

в смеси равных количеств абсолютного спирта

и эфира. Целлоидин можно готовить из кино-

и фотопленок по методике Меркулова: удалить

слой эмульсии после вымачивания в горячей во-

де или щелочи, выдержать 5—10 дней в трех

сменах хлороформа, промыть спиртом, высу-

шить, мелко нарезать и растворить в смеси

абсолютного спирта с эфиром. 2. 0,5 М раствор

тетрабората рН 9,18 [19,1 г тетрабората натрия

(бура) растворить и довести дистиллированной

водой до 1 л]. Раствор стойкий. 3. 0,1 % рас-

твор а-нафтилфосфата в растворе тетрабората

(готовят перед употреблением). 4. 0,2 % раствор

диазоля синего 0 в растворе тетрабората (гото-

вят перед употреблением и фильтруют в защи-

щенном от света месте). 5. Гематаль 8 Бейкера:

один объем 0,1 % гематеина, приготовленного

на 50 % водном растворе этиленгликоля, смеши-

вают с одним объемом 1,6 % водного раствора

сульфата алюминия. Вместо гематаля можно

использовать гематоксилин: 1 г краски раство-

ряют в 50 мл дистиллированной воды, доводят

до кипения, доливают 50 мл дистиллированной

воды, добавляют 0,02 г йодата натрия и 5 г

алюмокалиевых квасцов, встряхивают до раст-

ворения и охлаждают. 6. Инкубационная среда

(готовят перед употреблением); равные коли-

чества реактивов 3 и 4.

С п е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е . Хо-

лодильник.

Ход о п р е д е л е н и я . Мазки фиксируют

в 0,5 % растворе целлоидина в течение 3—5 с.

После фиксации целлоидин с обратной стороны

предметного стекла удаляют салфеткой, стекла

ставят в вертикальном положении на фильтро-

вальную бумагу и дают им высохнуть. Инкуби-

руют в инкубационной среде при комнатной

температуре в защищенном от света месте в те-

чение 30 мин. Промывают в проточной воде в течение 5—10 мин и ополаскивают в дистиллированной воде. Докрашивают ядра красителем (реактив 5). При использовании гематаля 8 мазки окрашивают 18—24 ч, затем ополаскивают в дистиллированной и проточной воде и высушивают. При использовании гематоксилина мазки окрашивают 30—60 мин, ополаскивают в тетраборатном буфере, разведенном водопроводной

водой, промывают водой и высушивают.

Н о р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы . У здоровых

людей большинство сегментоядерных нейтрофи-

лов являются фосфатазоотрицательными и толь-

ко в 20—30 % клеток выявлена слабая актив-

ность фермента ( + )• По данным М. Г. Шубича

и Б. С. Нагоева, активность фосфатазы для

здоровых обоего пола составляет 26±0,6 ед.,

или СЦК 0,26 + 0,006. Выявлено достоверное

различие между показателями энзиматической

активности у мужчин и женщин (соответственно

21 ±0,7 и 31 ±0,8 ед.).

К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е . Наиболь-

шее диагностическое значение имеет определе-

ние активности фермента при гемобластозах;

снижение активности характерно для хроничес-

кого миелолейкоза, повышение — рассматри-

вают как один из признаков эритремии. Повы-

шение активности наблюдается также при вос-

палительных процессах, интоксикациях, опухо-

лях, коллагенозах, циррозах печени. Показатель

может быть использован как дифференциально-

диагностический признак при лейкемоидных ре-

акциях (активность фермента повышена) и хро-

ническом миелолейкозе. Снижение активности

фермента часто сопутствует вирусному гепатиту,

инфекционному мононуклеозу и другим вирус-

ным инфекциям, лучевой болезни.

КИСЛАЯ ФОСФАТАЗА (К. Ф. 3.1.3.2). Об-

наруживают преимущественно в нейтрофилах

и лимфоцитах крови; локализацию связывают

мл 5 % водного раствора трилона Б, 10 мл

раствора бората натрия, 35 мл насыщенного

раствора бензидина и 2 мл раствора перекиси

водорода. 7. 0,5 % раствор метилового зеленого

на буферном растворе (рН 5,0) или 0,1 % вод-

ный раствор метиленового синего.

С п е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е .

Термостат.

Ход о п р е д е л е н и я . Свежеприготовлен-

ные мазки фиксируют в 60 % водном растворе

ацетона в течение 30 с. Промывают дистиллиро-

ванной водой. Инкубируют в инкубационной

среде в течение 1 ч в термостате при 37 °С.

Промывают дистиллированной водой. Докраши-

вают мазки метиловым зеленым или метиле-

новым синим в течение 10 мин. Можно исследо-

вать недокрашенные мазки.

Модифицированный метод [Шафран М. Г.

и соавт., 1979). П р и н ц и п см. Метод Грэ-

хема — Кнолля. Бензидин заменен О-дианизи-

дином.

Р е а к т и в ы . 1. 10% спиртовой раствор

формалина (1 мл 10 % формалина и 9 мл этило-

вого спирта). 2. Спиртовой раствор О-дианизи-

дина (можно использовать препарат Шосткин-

ского завода химреактивов; белые или желтова-

тые кристаллы препарата быстро окисляются на

воздухе, при изменении окраски он становится

непригодным). 24 мг О-дианизидина растворяют

в 5 мл метанола и доводят дистиллированной

водой до 9,9 мл. 3. 3 % раствор перекиси водоро

да. 4. Реакционная смесь: к спиртовому раст-

вору О-дианизидина прибавляют перед употреб-

лением 0,1 мл перекиси водорода. 5. 0,25 %

водный раствор азура А или другой ядерный

краситель.

С п е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е . Не

требуется.

Х о д о п р е д е л е н и я . Мазки

фиксируют спиртовым раствором формалина

в течение 10—15 с. Споласкивают проточной

водой. На мазки наносят реакционную смесь

на 2—3 мин при комнатной температуре. Спо-

ласкивают проточной водой. Докрашивают рас-

твором азура в течение 10—15 с. Споласкивают

проточной водой и высушивают.

Н о р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы . В крови

здоровых людей активность пероксидазы выяв-

ляется преимущественно в цитоплазме грануло-

цитов и в меньшей степени — моноцитов. Фер-

мент появляется в кровяных клетках на стадии

промиелоцитов и у ряда миелобластов (более

зрелых). Не содержат фермента недифференци-

рованные бласты, часть миелобластов и лимфо-

бласты; 3—16 % нейтрофилов окрашены резко

положительно (+ + +). 60—90 % — положи-

тельно (++) и остальные—слабоположитель-

но ( + ). СЦК нейтрофилов здоровых людей

равен 2,56 + 0,033. Эозинофилы характеризу-

ются резко положительной реакцией на перок-

сидазу.

К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е . Актив-

ность фермента в нейтрофилах снижена при

инфаркте миокарда, ревматизме, туберкулезе,

опухолях. У больных хроническим миелолейко-

зом, особенно в терминальной стадии, СЦК сни-

жается до 1,63 ±0,19 ед. В бластных клетках