Нафтол-as d-хлорацетат-эстера-

ЗА. Метод Молони с соавт. П р и н ц и п и обо-

р у д о в а н и е такие же, как для определения

а-нафтилацетат-эстеразы.

Р е а к т и в ы . 1. 10% раствор формалина

в метаноле (сохраняют в холодильнике). 2. Бу-

ферный раствор Михаэлиса (рН 7,4). 3. Наф-

тол-АS-D-хлорацетат. 4. Ацетон х. ч. 5. Грана-

товый прочный GBC или синий прочный ВВ.

6. Ядерный краситель. 7. Инкубационная среда:

10 мг нафтол-АS-D-хлорацетата, растворенного

в 0,5 мл ацетона, 10 мл буферного раствора

(реактив № 2), разведенного пополам дистил-

лированной водой (добавляют по каплям), 10 мг

с лизосомами цитоплазмы клеток. Кислая фос-

фатаза является гидролитическим ферментом

с оптимумом действия рН 5,2. Для цитохими-

ческого исследования чаще используют методы

азосочетания.

Метод азосочетания Берстона (модификация

Ю. Ф. Руденса, И. М. Буйкиса). П р и н ц и п см.

Метод азосочетания по Кеплоу.

Реактивы. 1. 0,1 М раствор цитратного буфе-

ра (рН 5,2). 2. 0,05 М раствор хлорида магния.

3. Нафтол-АS-Фосфат (можно использовать

нафтол-АS-ТR-фосфат или нафтол-АS-В1-фос-

фат. 4. Диметилформамид. 5. Диазоль синий

2С или прочный синий ВВ. 6. Краситель Рома-

новского — Гимзы. 7. Изотонический раствор

хлорида натрия. 8. Инкубационная среда: 10 мг

нафтол-АS-Фосфата, растворенного в 5 мл диме

тилформамида; 15 мл 0,1 М цитратного буфера

рН 5,2, 45 мл дистиллированной воды, 5 мл

раствора хлорида магния, 50 мг диазоля синего.

Готовят перед употреблением и используют по-

сле фильтрования.

С п е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е . Тер-

мостат.

Ход и с с л е д о в а н и я . Нефиксирован-

ные мазки инкубируют в инкубационной среде

при 37 °С в течение 2 ч. Промывают изотони-

ческим раствором хлорида натрия. Докрашива-

ют красителем Романовского — Гимзы. Промы-

вают в проточной воде. Активность фермента

выявляется в виде синей окраски.

Н о р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы . В сегмен-

тоядерных нейтрофилах активность фермента

равна 38,6±2,82 ед., или СЦК 0,386 + 0,028, в

лимфоцитах —26,9±1,94 ед., или СЦК 0,268±

±0,019. У детей активность кислой фосфатазы

в нейтрофилах выше, чем у взрослых.

К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е . Повыше-

ние активности наблюдается в нейтрофилах при

воспалительных процессах, при туберкулезе, ин-

фаркте миокарда, острых хирургических заболе-

ваниях, злокачественных опухолях. При этом

следует учитывать, что высокие цифры актив-

ности фермента могут быть результатом повы-

шения активности щелочной фосфатазы в ней-

трофилах, так как активность последней может

выявляться и в кислой среде. Поскольку при

всех указанных выше заболеваниях наблюда-

ется повышение активности и щелочной фосфа-

тазы, а при цитохимическом методе исследова-

ния обоих ферментов используют единый суб-

страт, при получении высокой активности кис-

лой фосфатазы М. Г. Шубич и И. В. Нестерова

предлагают проводить повторное исследование

после ингибирования щелочной фосфатазы с по-

мощью ЭДТА.

Повышение активности кислой фосфатазы

в лимфоцитах отмечается при иммунизации,

различных аллергических заболеваниях.

В властных клетках при острых лейкозах

характер распределения продукта реакции раз-

личен в зависимости от формы лейкоза. При

острых лимфобластных формах активность вы-

является в гранулярной форме, при миелоб-

ластных — в диффузной форме.