Кислая а-нафтилацетат-эстераза.

Фермент локализуется главным образом в лизо-

сомах цитоплазмы клеток и участвует в гидро-

лизе алифатических эфиров.

Метод Кулленкампфа и соавт. П р и н ц и п .

Из соединения а-нафтилацетата при кислом рН

под влиянием фермента образуется свободный

нафтол, дающий цветное окрашивание с фук-

сином.

Р е а к т и в ы . 1. 2,5% раствор глутараль-

дегида (рН 7,2). 2. 4 % раствор солянокислого

фуксина. 3. 4 % раствор нитрата натрия. 4. 0,7 М

фосфатный буфер (рН 5,0). 5. сх-Нафтилацетат.

6. 2 % раствор метилового зеленого. 7. Инкуба-

ционная среда: 2 мл реактива № 2, 2 мл реакти-

ва № 3, 40 мл реактива № 4. 10 мг а-нафтила-

цетата, растворенного в 0,4 мл ацетона. Инку-

бационная среда должна иметь рН 5,8 и гото-

виться перед употреблением.

С п е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е . 1.

Холодильник. 2. Весы. 3. Эксикатор.

Ход о п р е д е л е н и я . Высушенные на

воздухе мазки фиксируют в глутаральдегиде

(реактив № 1) при температуре 4 °С в течение

10 мин (нефиксированные мазки можно хранить

в холодильнике 1—2 мес). Промывают дистил-

лированной водой. Инкубируют в инкубацион-

ной среде в течение 1'/2—6 ч. Промывают дис-

тиллированной водой. Докрашивают метиловым

зеленым.

Н о р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы . В цито-

плазме лимфоцитов активность фермента выяв-

ляется в виде темно-красных гранул, в нейтро-

филах и моноцитах — в виде диффузной окрас-

ки. СЦК лимфоцитов равен 0,57 + 0,04. Актив-

ность фермента увеличивается при увеличении

времени инкубации. Так, при инкубации в тече-

ние 1'/2 ч активность фермента выявлена в

49,83±2,75 % лимфоцитов, при удлинении сро-

ка инкубации до 6 ч эстеразоположительными

становятся 79,7± 1,52% лимфоцитов. Исполь-

зование в качестве фиксатора формалина дает

более стабильные результаты.

К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е . Снижение

активности фермента в лимфоцитах характерно

для хронического лимфолейкоза (В-клеточного

варианта); при Т-клеточных пролиферациях ак-

тивность неспецифической кислой эстеразы в

лимфоцитах повышена.

НАФТОЛ-AS АЦЕТАТ-ЭСТЕРАЗА. Метод

Леффлера. П р и н ц и п и о б о р у д о в а н и е

такие же, как для определения а-нафтилаце-

тат-эстеразы.

Р е а к т и в ы . 1. Формалин промышленного

производства (40 %). 2. 0,1 М фосфатный буфер

(рН 6,8—7,0). 3. Ацетон х. ч. 4. Нафтол-AS-

ацетат (можно использовать нафтол-АS-D-аце-

тат). 5. Прочный синий ВВ. 6. Ядерный краси-

тель. 7. Инкубационная среда: 4 мг нафтол-

AS-ацетата, растворенного в 0,4 мл ацетона,

40 Мл буферного раствора (реактив № 2); встря-

хивают и добавляют 80 мг прочного синего ВВ,

встряхивают и фильтруют.

Х о д о п р е д е л е н и я . Высушенные на

воздухе (в течение 1—3 ч) мазки фиксируют

в парах формалина несколько минут. Помеща-

ют в инкубационную среду на 60 мин при ком-

натной температуре. Промывают в проточной

воде. Докрашивают ядерным красителем.

Н о р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы . Так же, как

и а-нафтил-эстераза, фермент локализуется

главным образом в моноцитах крови. По сравне-

нию с активностью а-нафтилацетат-эстеразы

активность нафтол-АS-ацетат-эстеразы в сег-

ментоядерных нейтрофилах несколько выше, а в

лимфоцитах — слабее. В клетках костного моз-

га фермент обнаружен в мегакариоцитах, рети-

кулярных и плазматических клетках, а также

незрелых гранулоцитах.

К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е . Значитель-

ная активность фермента характерна для бласт-

ных клеток при остром монобластном (гистио-

монобластном) лейкозе, при остром промиело-

цитарном лейкозе; при других формах острых

лейкозов активность фермента в бластных клет-

ках не выявляется.