- •Біотехнологія у ветеринарній медицині
- •1. Вступ. Визначення терміну «Біотехнологія». Чому ми вивчаємо цю дисципліну, що дають отримані знання лікарю ветеринарної медицини?
- •Задачі вивчення дисципліни :
- •2. Зв'язок з іншими дисциплінами
- •3. Етапи становлення біотехнології
- •3.Третій період - біотехнічний 1933-1972рр.
- •4. Основні розділи біотехнології Біотехнологія як наука поділяється на напрямки:
- •Завдання біотехнології.
- •Біотехнологія у ветеринарній медицині
- •1. Біологічні системи біотехнології
- •1. Система генетичного та фізіологічного управління
- •5. Методи, що застосовуються у біотехнології
- •6. Сировинна база біотехнології
- •7. Продукти біотехнологічного процесу:
- •1. Основи селекції штамів мікроорганізмів
- •2. Будова молекули днк
- •1. Відтворюватися з високою точністю
- •2. Кодувати синтез білкових молекул
- •Лекція №3. Частина 2. Генетична інженерія. Трансляція. Регуляція транскрипції
- •Автор: новіцька о.В., кандидат ветеринарних наук
- •1. Трансляція
- •Лекція № 4. Генетична інженерія. Технології рекомбінантних днк
- •Автор: новіцька о.В., кандидат ветеринарних наук анотація
- •Приблизна схема отримання рекомбінантних днк:
- •Ферменти, які використовують у генній інженерії.
- •Іі. Вектори
- •Вимоги до векторів:
- •Як працює клонуючий вектор?
- •Трансформація та відбір.
- •1. Наявність декількох сайтів для клонування
- •2. Можливість простої ідентифікації клітин з рекомбінантними днк
- •Клонуюча система на основі бактеріофагу
- •Косміди
1. Відтворюватися з високою точністю
2. Кодувати синтез білкових молекул
Запропонована модель молекули ДНК відповідає цим вимогам.
1. Реплікація- процес самовідтворення нуклеїнових кислот, які забезпечують точне відтворення генетичної інформації.
Реплікація ДНК – біосинтез дочірніх ланцюгів ДНК на матриці, що забезпечує точне відтворення генетичної інформації.
Згідно моделі Уотсона-Крика, кожний ланцюг ДНК є матрицею при синтезі нового комплементарного ланцюга. Таким чином підтвердилося припущення про те, що реплікація ДНК напівконсервативна; при такому способі реплікації один з ланцюгів кожної дочірньої молекули ДНК синтезується заново, а другий ланцюг походить від батьківської молекули.
Кожна мономерна одиниця, яка приєднується до ланцюга що росте, знаходиться у формі дезоксирибонуклеозид-5′-трифосфата (фосфатна група, пов’язана з 5-вуглецевим атомом дезоксирибози позначається α, до неї приєднується β- фосфат та γ-фосфат). По ходу реплікації β- фосфат та γ-фосфат відщепляються у вигляді пірофосфату, а α-фосфатная група зв’язується з 3′-ОН групою останнього нуклеотиду ланцюга що росте.
У складному процесі реплікації ДНК беруть участь багато білків, що виконують ферментативну функцію. Основну роль відіграє ДНК-полімераза, яка послідовно приєднує нові ланки до полінуклеотидного ланцюга, що росте за принципом компліментарності та каталізує утворення фосфодиефірних зв’язків.
!!!Для здійснення біосинтетичної функції поряд із ДНК-полімеразою у середовищі повинні бути: повний набір дезоксирибонуклеозид-5 ′ -фосфатів ( dАТФ, dГТФ, dТТФ, d ЦТФ), іони магнію, затравний ланцюг з вільним 3-ОН-кінцем (роль затравки виконує попередній ланцюг ДНК чи РНК), матричний ланцюг.
Елонгація ланцюга йде в напрямку 5′→3′. Протягом однієї секунди молекула ДНК-полімерази подовжує ланцюг на 10 нуклеотидних залишків.
У механізмах реплікації і репарації ДНК бере участь ще один фермент – ДНК –лігаза, що каталізує утворення фосфодиефірного зв’язку за наявності вільної ОН-групи у 3′-кінці ланцюга ДНК і фосфатної групи у 5′-кінці цього ланцюга у каркасі двоспіральної ДНК. Завдяки цій реакції усуваються одноланцюгові розриви.
Місце реплікації ДНК має чітку локалізацію і називається – реплікатором – ділянка ДНК (унікальна послідовність нуклеотидів) з якої розпочинається процес її реплікації.
Ділянка в якій одночасно відбуваються розплетення і реплікація ДНК, називається реплікаційною вилкою.Від неї одночасно в двох протилежних напрямках здійснюється біосинтез дочірніх ланцюгів ДНК.
повернутися до змісту
КОДУВАННЯ СИНТЕЗУ БІЛКОВИХ МОЛЕКУЛ
Основною структурною одиницею білків є амінокислоти, які мають подібну хімічну будову. До центрального атому вуглецю С приєднується атом водню Н, аміногрупа (NH + 3 ), карбоксильна група СОО- та R -група (боковий ланцюг) .
Існує 20 бокових ланцюгів і відповідно 20 амінокислот.
Амінокислоти з’єднуються між собою пептидними зв’язками та утворюють поліпептидний ланцюг. Пептидний зв'язок утворюється між карбоксильною групою однієї амінокислоти та аміногрупою іншої.
Довжина білкових молекул варіює від 40-1000 амінокислотних залишків.
Багато білків складаються з двох та більше поліпептидних ланцюгів (субодиниць).
Для переводу генетичної інформації з мови нуклеотидів на мову амінокислот важливу роль відіграють РНК.
Існують три основних типа РНК:
1. Інформаційна – мРНК (3-5% від сумарної РНК)
2. Рибосомна – рРНК (90% від сумарної РНК активнофункціонуючої клітини)
3. Транспортна – тРНК (4% від сумарної РНК)
РНК синтезуються на певних ділянках ДНК як на матрицях.
Синтез РНК на ДНК-матрице називається транскрипцією .
У прокаріотів транскрипція РНК відбувається за допомогою однієї РНК-полімерази.
У еукаріотів мРНК, рРНК та тРНК транскрибуються різними РНК-полімеразами.
Транскрипція подібна до реплікації. Матриця для синтезу РНК – певна ділянка ланцюга ДНК. РНК-полімераза копіює цю ділянку, послідовно з’єднуючи рибонуклеотиди за допомогою 3′-5′- фосфодиефірних зв’язків дотримуючись комплементарності.
Синтезована молекула РНК від’єднується від ДНК і подвійна спіраль відновлюється.
Існують послідовності які сигналізують (вказують ) де починається транскрипція (ініціюється ) , а дезакінчується (термінується ).
Сигнал ініціації розташовується перед кодуючою послідовністю (тобто передує гену, якій транскрибують) і називається 5 ′-фланкуюча послідовність.
Сигнал термінації розташовується після кодуючої послідовності і називається 3′- фланкуюча послідовність.
Більшість послідовностей ДНК, які транскрибуються, складають так звані структурні гени, на яких синтезуються мРНК. Кінцевим продуктом структурного гену є білок.
У прокаріот структурний ген це безперервна ділянка молекули ДНК. Транскрипція починається зі зв’язування РНК-полімерази з промотором.
Промотор-специфічна ділянка ДНК, яка виконує регуляторну функцію в результаті приєднання РНК-полімерази, що ініціює транскрипцію РНК.
Потім поступово копіюється увесь структурний ген (кодуюча ділянка) від першого нуклеотиду до останнього і утворюється мРНК.
У еукаріот більшість структурних генів складається з дискретних кодуючих ділянок (екзонів), які розділені некодуючими ділянками (інтронами). Після транскрипції інтрони з первинного транскрипту вирізаються (процессинг), а екзони зшиваються (сплайсинг) з утворенням функціональної мРНК.
Як правило довжина екзонів складає від 150до 200нуклеотидів, а довжина інтронів від 40-10000 нуклеотидів.
Інколи сплайсинг мРНК може проходити за альтернативним шляхом. Наприклад, в однієї тканини функціональна мРНК може утворюватися в результаті сполучення всіх екзонів первинного транскрипту, а у іншої якійсь екзон буде вирізаний разом з фланкуючими інтронами і тоді утворюється інша функціональна мРНК. Завдяки альтернативному сплайсингу у різних тканинах можуть утворюватися різні продукти одного того ж структурного гену.
Процесинг - сукупність ферментативних реакцій, що каталізують перетворення первинних продуктів транскрипції і трансляції у функціонально повноцінні молекули.
Сплайсинг – посттрансляційний ферментативний процес видалення з первинного РНК-транскрипту інтронів і наступне з'єднання екзонів.
повернутися до змісту