Титрация комплемента в бактериологической системе

Компоненты: 1) Заведомо положительные бруцеллёзные сывоотки (давшие 4 и 2 креста), консервированные 0.5% карболовым физиологическим раствором (на 9,0 сыворотки 1,0 раствора).

2) нормальные сыворотки крупного рогатого скота или овец. Бруцеллёзные и нормальные сыворотки наливают в пробирки по 0,05+0,45 физиологического раствора или делают разведение их 1 :10, и разливают в пробирки по 0,5. Бруцеллёзные и нормальные сыворотки в разведённом виде 1:10 инактивируются. Дозы комплемента из основного разведения 1 :20 берут на два интервала ниже против титра его в гемолитической системе, т. е. если тигр комплемента в гемолитической системе 0,25, то и титрация комплемента в бактериологической системе производится в дозах—0.19; 0,22; 0,25; 0,28 и т. д.

Каждое разведение комплемента ставится с контролем без антигена. Во все пробирки до недостающей 0,5 дозы комплемента добавляют физиологический раствор.

После разливки по пробиркам нормальных и бруцеллезных сывороток, бруцеллёзного антигена в титре и комплемента в соответствующих дозах—пробирки ставят на 20 минут в водяную баню при 37—38°С. Затем в них добавляют по 0,5 гемолизина в рабочем титре и по 0,5 см³ 2,5 °/о взвеси эритроцитов барана. Продолжительность реакции гемолитической системы в водяной бане—20 минут.

Схема титрации комплемента в бактериологической системе

Комплемент в разведении 1:20	0,19	0,22	0,25	0,28	0,31	0.34	0,37	0,40	0,43	0,46	0,49
Недостающее количество физиологического раствора
	0,31	0,28	0.25	0,22	0,19	0,16	0,13	0,1	0,07	3,04	0,01
Антиген в удвоенном его титре ......
	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5
Нормальная сыворотка 1 : 10 ........	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5
Эрнтпоциты барана 1:40 ........	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0.5
Гемолитическая сыворотка в рабочем титре . .	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5

Водяная баня 20 минут при 37—38° С.

Титр комплемента—минимальное количество его, потребное для полного гемолиза взвеси эритроцитов в пробирках с нормальными сыворотками, с антигеном и без антигена, при соответствующей задержке гемолиза в бруцеллёзной сыворотке с антигеном при 37.—38°С в течение 20 минут.

Титрация бруцеллёзного антигена

1. Для титрации бруцеллёзного антигена берут две бруцеллёзные сыворотки, содержащие различное количество комплементсвязывающих веществ (давшие 4 и 2 креста).

2. Одну нормальную сыворотку.

Бруцеллёзные и нормальную сыворотки предварительно инактивируют в разведении 1 :10.

Для титрации антигена бруцеллёзные сыворотки разводят следующим образом:

Разведение 1,0 сыворотки +9,0 физиологического раствора равно 1:10

» 0,4 » +9,60 » » » 1:25

» 0,20 » +9,80 » » » 1:50

» 0,13 » +9,87 » » » 1:75

» 0,1 » +9,9 » » » 1 : 100

Комплемент, гемолизин и эритроциты—в рабочих титрах. Температура водяной бани и время реакции обычные.

Схема реакции следующая:

Разведение антигена	1:10		1:50		1: 100		1:150		1:200		1 :300		1:400		1 :500
Антиген	0,5		0.5		0,5		0,5		0 5		0 5		0,5		0,5
Одно разведе-ние сыворотки .....	-		0,5		0,5		0,5		0,5		0,5		0,5		0,5
Комплемент .... Физиологичес-кий раствор .......	0,5 0,5		0,5 -		0,5 -		0,5 -		0,5 -		0,5 -		0,5 -		0,5 -
Водяная баня 20 минут при 37—38° С.
Гемолизин .....		0,5		0,5		0,5		0,5		0,5		0,5		0,5		0,5
Взвесь эритроцитов .		0,5		0.5		0,5		0,5		0 5		0 5		0,5		0,5

По этой схеме ставят и все остальные разведения сыворотки. Нормальную сыворотку берут в первом и втором разведенных. Контроль на антиген—пробирка с антигеном без сыворотки.