9.7. Хранение эмбрионов

После оценки на жизнеспособность эмбрионы дважды промывают в фосфатном буфере Дюльбекко с добавлением ан­тибиотиков, засасывают в минипайету вместе с небольшим ко­личеством среды. Для пересадки используют в первые 2-4 ч по­сле извлечения из половых путей донора.

- 174 -

При разработке способа кратковременного хранения эм­брионов вне организма был использован метод культивирования тканей и клеток. Эмбрионы хранят в атмосфере, обогащенной углекислым газом, при постоянной температуре (37°С). В таких условиях они остаются жизнеспособными 24-48 ч. Имеются со­общения о том, что снижение температуры до 10°С позволяет продлить их жизнеспособность до 5-6 суток.

На протяжении 3-4 суток эмбрионы можно хранить в яй-цепроводах крольчихи, выживаемость составляет в среднем 73%.

На сегодня используют два способа глубокого заморажи­вания эмбрионов: в программируемом режиме (ступенчатое ох­лаждение) и одномоментный (витрификация). Замораживают быстрым методом в минипайетах емкостью 0,25 мл.

9.8. Пересадка эмбрионов

До середины 70-х годов применяли исключительно хирур­гический метод пересадки эмбрионов. Доступ к матке обеспе­чивался лапаротомией по белой линии живота или в области подвздоха под общим наркозом. Рог матки, прилегающий к яич­нику с функционирующим желтым телом, подтягивали к разре­зу, делали прокол стенки концом капиллярной трубки в не­скольких сантиметрах от места соединения с яйцепроводом. При этом стремились избежать повреждения сосудов и кровоте­чения. Эмбрион с небольшим количеством физиологической среды вводили в верхушку рога. После хирургической транс­плантации приживаемость была довольно высокая – до 72%.

При нехирургическом методе пересадки животному дела­ют низкую сакральную анестезию, вводят маточный релаксант.

Нехирургическую пересадку эмбрионов проводят с помо­щью модифицированного катетера Кассу, предназначенного для искусственного осеменения.

Эмбрион засасывают шприцем в стерильную пайету в та­кой последовательности: среда, пузырек воздуха, среда с эм­брионом, пузырек воздуха, среда, пластиковая пробка.

Замороженные эмбрионы непосредственно перед исполь­зованием оттаивают быстрым методом, погружая в воду, нагре-- 175 -

тую до 37°С. Пайету, пробирку или ампулу быстро извлекают из канистры криобиологического сосуда, погружают в воду на 10-12 с. Оттаянные эмбрионы переносят из пробирки или ампу­лы на часовое стекло для морфологической оценки.

Подготовленный катетер Кассу вводят во влагалище, за­тем под контролем руки, находящейся в прямой кишке, продви­гают через цервикальный канал до середины рога на стороне яичника с желтым телом. Убедившись в правильности располо­жения прибора, медленно выталкивают содержимое пайеты в просвет рога матки.

Реципиентов после пересадки эмбрионов обеспечивают полноценным кормлением, ежедневно предоставляют активный моцион. Через 50-60 дней после пересадки проводят ректальное исследование на стельность.

При нехирургическом методе пересадки приживаемость эмбрионов составляет 40-50%.

Контрольные вопросы

3. В чем состоит метод трансплантации эмбрионов?

4. В какой стадии развития можно трансплантировать эмбрио­на?

5. В чем заключаются отбор и подготовка доноров?

6. В чем состоят отбор и подготовка реципиентов?

7. Какие инструменты используют для получения и пересадки зародышей коров?

8. Какими методами получают зародышей от коров-доноров?

9. Как оценивают качество зародышей?

10. Какие разработаны методы хранения эмбрионов?

11. В чем состоит техника пересадки зародыша реципиенту?

- 176 -