МЕТОДИЧЕСКАЯ РАЗРАБОТКА № 2

ТЕМА: Микроскопический метод исследования, его диагностические возможности. Тинкториальные свойства бактерий. Сложные методы окрашивания. Постоянные и временные структурные элементы, их выявление.

МОТИВАЦИОННАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА: Микроскопический метод исследования - один из первых и наиболее часто используемых прямых способов обнаружения возбудителя в материале от больного. Зная морфологию (форму, величину, взаимное расположение особей), особенности восприятия красителей (тинкториальные свойства) и структуру бактерий можно:

- поставить диагноз, установить этиологию болезни;

- наличие и характер инфекционного заболевания;

- составить представление о возбудителе в исследуемом материале;

- изучить детали строения бактериальной клетки.

Это позволяет приобрести:

- умение выбирать оптимальный способ окраски, приготовить и оценить микропрепарат, что необходимо врачу любой специальности;

- навыки чёткого воспроизведения сложных методов окраски (Грама, Циля-Нильсена и другие) полезны для любого врача и необходимы для специалистов, занимающихся изучением туберкулёза и других инфекционных заболеваний.

УЧЕБНАЯ ЦЕЛЬ:

Научиться:

- сложным способам окраски бактерий, их дифференциации

- выявлению структурных элементов, в том числе защитных

- функциональной оценке подвижности бактерий

ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ ПОДГОТОВКИ И ВВОДНОГО КОНТРОЛЯ ЗНАНИЙ

1. Микроскопия как основной и вспомогательный метод исследования в диагностике.

2. Сложные дифференциальные методы окраски, их виды, назначение.

3. Метод Грама, как главный метод в дифференциации бактерий, его сущность, техника, оценка.

4. Метод Циль - Нильсена — способ окраски кислотоустойчивых бактерий.

5. Структура бактериальной клетки:

- назначение оболочки, её строение, выявление по Пешкову;

- назначение нуклеоида и его выявление по Фельгену;

- выявление зёрен волютина методом Нейссера, Леффлера, их назначение.

6. Временные структурные элементы бактериальной клетки (капсулы, споры). Методы Ожешко, Бурри – Гинса.

7. Люминесцентная микроскопия - прямая.

8. Подвижность бактерий, их органы движения, способы выявления разными методами:

а) окраска жгутиков по Морозову и Леффлеру, сущность, техника.

б) выявление функциональными методами:

- метод раздавленной капли;

- метод висячей капли;

- метод по Шукевичу;

- метод посева в столбиках полужидкого МПА.

Методические указания по выполнению практической работы с полным регламентом протокола занятия и его оформлением

№	Название учебного элемента (задания)	Методическое решение	Регламент протокола
1.	Вводный контроль исходных знаний	Домашнее задание с коррекцией на занятии	Записать в протокол сложные вопросы
2.	Тинкториальные свойства бактерий, их химическая основа: - окраска по Граму в модификации Синева; - окраска по Циль - Нильсену. Модификация_Хузе	Приготовить препараты, окрасить. Приложение 1 Приложение 2	Записать в протокол. Микроскопировать, зарисовать
3.	Структура бактерий: Постоянные элементы: - оболочка (выявление по Пешкову); - нуклеоид (выявление по Фельгену); - зёрна волютина, окраска по Нейсеру и Леффлеру. Временные структуры: - капсулы (выявление по Бури, Бури- Гинсу); - споры (окраска по Ожешко)	Приложение 3 Приложение 4 Приложение 5 Приложение 6 Приложение 7	Зарисовать Зарисовать
4.	Подвижность бактерий. Жгутики, их виды, расположение - окраска по Морозову, Леффлеру - функциональные методы висячей и раздавленной капель - метод посева по Шукевичу и в полужидкий МПА по Пешкову	Изучить по атласу Приложение 8 Выполнить (Приложение 9) Приложение 10	Зарисовать Зарисовать Зарисовать Зарисовать
5.	Тестовый контроль усвоения темы	Приложение 11	Зарисовать.

Приложение 1

ИЗУЧЕНИЕ ТИНКТОРИАЛЬНЫХ СВОЙСТВ БАКТЕРИЙ ПО МЕТОДУ ГРАМА

1. Записать последовательность манипуляций при окраске по Граму

Р е а к т и в ы:

- Карболовый раствор генцианового фиолетового или кристаллического фиолетового (1 г красителя, 10 мл спирта 96 %, 2 г кристаллической карболовой кислоты, 100 мл дистиллированной воды либо 10 мл 4 % спиртового раствора красителя и 100 мл 2 % карболовой кислоты).

- Раствор Люголя (в модификации Грама): 2 г йодида калия. 10 мл дистиллированной воды. 1 г кристаллического йода. Смесь настаивается сутки, после чего добавляют 300 мл дистиллированной воды.

М е т о д и к а о к р а с к и:

- Фиксированный препарат окрашивают 30 сек — 1 мин. карболовым раствором генцианового фиолетового.

- Краситель сливают.

- Не смывая краситель, наливают на препарат раствор Люголя на 1 мин.

- Сливают раствор Люголя.

- Прополаскивают в 96 % спирте 30 сек - 1 мин. (до отхождения красителя).

- Промывают водой.

- Дополнительно окрашивают разведённым фуксином 30 сек - 1 мин. После окраски препарат тщательно промывают и высушивают.