МЕТОДИЧЕСКАЯ РАЗРАБОТКА №З
ТЕМА: Микроскопический метод исследования. Морфология, структура и методы выявления прочих микроорганизмов - спирохет, риккетсий, грибов, простейших, микоплазм, хламидий
МОТИВАЦИОННАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА: Микроскопический метод при многих инфекционных и инвазионных заболеваниях является решающим для суждения о возбудителе и этиологии заболевания. Поэтому знание морфологии этих микроорганизмов, их структурных особенностей и методов выявления необходимы для врача любой специальности. Это важно и потому, что некоторые из них осложняют ряд других более тяжёлых заболеваний в частности ВИЧ.
УЧЕБНАЯ ЦЕЛЬ: Познакомиться с морфологией основных форм микроорганизмов, научиться распознавать их в препаратах, дифференцировать представителей прокариотов (бактерий, в частности — спирохет, микоплазм, хламидий, риккетсий) и эукариотов (грибов, простейших).
ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ ПОДГОТОВКИ И ВВОДНОГО КОНТРО-
ЛЯ ЗНАНИЙ
1. Особенности морфологии и структуры представителей спирохет – трепонем, боррелий, лептоспир:
- методы выявления спирохет (нативные, окрашенные препараты, способы окраски)
- размеры спирохет в вегетативной и цистной стадии.
2. Морфология и структурные особенности микоплазм, их зависимость от среды обитания, тинкториальные свойства, размеры, методы выявления.
З. Морфология, структура и стадии развития хламидий
- фазы существования, локализация
- тинкториальные свойства, размеры
- методы выявления.
4. Морфология и структура риккетсий
- морфологическая классификация по Здродовскому П.Ф.
- ультраструктура риккетсий
- локализация риккетсий в организме
- тинкториальные свойства, размеры
- способы выявления.
5. Морфология грибов
- структура клетки гриба (гифы, мицелий репродуктивный, вегетативный)
- споры — как органеллы размножения - эндоспоры и экзоспоры (аски), таллоспоры,
бластоспоры, хламидоспоры, артроспоры
- методы обнаружения грибов.
6. Простейшие
- классификация, морфология, структурные особенности
- способы паразитирования в кишечнике (балантидии, лямблии, амёбы), в крови
(трипаносомы, плазмодии малярии) и прочие формы
- морфология и структура лейшманий, их выявление
- морфология и структура токсоплазм, их индикация
- морфология и структура трихомонад, их выявление
- методы микроскопического анализа и диагностики протозоозов.
7. Структурные особенности микроорганизмов, причисленных к эукариотам, прокариотам (общие представления).
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ВЫПОЛНЕНИЮ ПРАКТИЧЕСКОЙ РАБОТЫ С ПОЛНЫМ РЕГЛАМЕНТОМ ПРОТОКОЛА ЗАНЯТИЯ И ЕГО ОФОРМЛЕНИЕМ
|
№ п/п |
Название учебного элемента |
Методическое решение
|
Регламент протокола
|
|
1. |
Морфология и структура спирохет, методы изучения |
Приложение 1,2. Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии. Под ред. Воробьева А.А., Быкова А.С. М., 2003. С.78-82, 85-92, 141-181. Атлас по микробиологии и вирусологии Н.С. Мотавкиной, В.Д. Артёмкина. М., 1976. С. 114-151 |
Описать окраски, ультраструктуру, зарисовать |
|
2. |
Морфология микоплазм
|
Приложение 1,2. Атлас по микробиологии и вирусологии Н.С. Мотавкиной, В.Д. Артёмкина. М., 1976. С.152-169 |
Описать окраски, ультраструктуру, зарисовать |
|
3. |
Морфология риккетсий, методы их выявления |
Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии. Под ред. Воробьева А.А., Быкова А.С. - М., 2003. С.78-82, 85-92, 141-181. |
Описать окраски, ультраструктуру, зарисовать |
|
4. |
Морфология грибов
|
Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии. Под ред. Воробьева А.А., Быкова А.С. - М., 2003. С.78-82, 85-92, 141-181. Атлас по микробиологии и вирусологии Н.С. Мотавкиной, В.Д. Артёмкина.- М., 1976. С. 263-31О |
Описать окраски ультраструктуру, зарисовать |
|
5. |
Классификация простейших по морфологии:
а) малярийный плазмодий б) токсоплазмы в) лейшмании г) трипаносомы д) лямблии е) балантидии ж) амёба кишечная з) трихомонады |
Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии. Под ред. Воробьева А.А., Быкова А.С. - М., 2003. С.78-82, 85-92, 141-181. Атлас по микробиологии и вирусологии Н.С. Мотавкиной, В.Д. Артёмкина. С.254-256 С .248-249 С.247-248 С.248-249 С.252-253 С.256-257 С.243-246 С.249-251 |
Составить классификацию с названиями представителей различных видов (самоподготовка дома). Зарисовать схемы развития, структуру (самоподготовка дома). Микроскопия готовых препаратов с их зарисовкой на занятии |
|
6. |
Тестовый контроль усвоения темы |
Приложение 3, таблица 1
|
Записать в протокол вопросы и ответы, заполнить таблицу. |
Приложение 1
Методы выявления спирохет и лептоспир
1. Метод изучения спирохет и лептоспир в нативном препарате.
Для исследования живых спирохет и лептоспир используется метод тёмного поля и прямая люминесцентная микроскопия.
Препараты для них готовят одинаково с небольшими различиями
- берут 1 каплю биосубстрата (кровь, вода, соскоб из язвы и пр.), наносят на стекло
- осторожно закрепляют покровным стеклом и устанавливают на столик темнопольного, либо люминесцентного микроскопа
- микроскопируют с иммерсионной системой.
Особенности методов
Микроскопия в тёмном поле
1. Конденсор Аббе в обычном световом микроскопе заменяют на специальный тёмнопольный. При его отсутствии модернизируют обычный. Для этого:
- из чёрной фотографической бумаги вырезают круг размером с 50 копеечную монету;
- наклеивают на середину верхней линзы конденсора строго посередине с круговым зазором для света;
- фиксируют конденсор в микроскопе.
2. Перед микроскопией на конденсор наносят каплю дистиллированной воды для предотвращения рассеивания света, но можно не наносить.
3. На покровное стекло препарата наносят каплю иммерсионного масла и микроскопируют.
4. При работе с большим объектом в биоматериале можно вместо ОИ-90 использовать один из сухих объективов (*7, * 10, *20, *40), а масло заменить дистиллированной водой.
При микроскопии на тёмном фоне видны серебристые движущиеся спирохеты.
Люминесцентная прямая микроскопия.
Особенности:
- При приготовлении препарата к биоматериалу для прижизненной окраски добавляют флюорохром акридин оранжевый в рабочем разведении 1:1000 и только после этого накрывают покровным стеклом. Микроскопируют в люминесцентном микроскопе МЛ-1 или МЛ-2 с набором пропускающих и запирающих фильтров для УФ-лучей.
- Вместо обычного иммерсионного масла используют нелюминисцирующее иммерсионное или его заменители (репелленты - дибутилфталат, диметилфталат). Микроскопируют в затемнённом помещении.
При микроскопии жизнеспособные клетки двигаются, имеют чаще зелёное свечение, нежизнеспособные и умирающие оранжевые и обездвижены. Оба метода особенно удобны при обнаружении лептоспир, которые невозможно окрасить.
Приложение 2
Окраска спирохет в чистом виде и в биоматериале
1. Серебрение по Морозову.
2. Окраска по Романовскому-Гимзе
- препарат фиксируют химическим фиксатором
- окрашивают раствором красителя краски Гимзе (2 капли — азур-эозин с метиленовой синью на 1 мл щелочной дистиллированной воды) 20 минут
- промывают водой, высушивают
- микроскопируют с иммерсией. Ядерные элементы имеют красно-фиолетовый цвет, цитоплазма - голубая или слабо-розовая. Примечание: если краситель спиртовой, то мазок не фиксируется
3. Окраска по Граму.
4. Обработка по Бурри.
Приложение 3
Вопросы для тестового контроля усвоения темы
1. Возбудители спирохетозов выявляют на препаратах по а) Ожешко б) Граму в) методом темного поля
2. Какие структурных элементов нет у спирохет? а) первичных анатомических завитков б) вторичных функциональных завитков в) осевой эластической нити д) фибрилы е) спор ж) цист
3. Чем микоплазмы отличаются от других видов бактерий: а) имеют ядро б) не имеют цитоплазматической мембраны в) не имеют клеточной стенки г) имеют нуклеоид
4. Какие из бактерий имеют две формы существования — стадию «ЭТ» - элементарного тельца вне клетки и стадию «РТ» - ретикулярного тельца внутри клетки? а) спирохеты б) хламидии в) микоплазмы г) простейшие
5. Какие из перечисленных микроорганизмов могут образовывать в организме больного цисты: а) риккетсии б) спирохеты в) микоплазмы
6. Назовите форму риккетсий: а) шаровидная б) палочковидная в) нитевидная г) полиморфная д) бациллярная
7. Риккетсии окрашивают по:
а) Здродовскому
б) Нейссеру
г) Ожешко
8. Риккетсии окрашиваются в цвет:
а) красный
б) желтый
в) зеленый
9. По своим биологическим свойствам простейшие относятся к:
а) эукариотам
б) прокариотам
10. По своим биологическим свойствам грибы относятся к:
а) эукариотам
б) прокариотам
11. По своим биологическим свойствам спирохеты относятся к:
а) эукариотам
б) прокариотам
12. Трофозоиды простейших окрашивают:
а) раствором Люголя б) по Романовскому — Гимзе
13. Цисты простейших окрашивают: а) раствором Люголя б) по Романовскому — Гимзе
14. Кому из грибов принадлежат мицелий и гифы: а) дрожжи и дрожжеподобные б) лучистые в) нитчатые г) все вышеперечисленные
15. Кому из грибов свойственно почкование и зерна волютина: а) дрожжи и дрожжеподобные б) лучистые в) нитчатые
16. Кому из грибов принадлежат друзы: а) дрожжи и дрожжеподобные б) гифальные
17. Чем являются для грибов аски (эндоспоры): а) органами размножения б) органеллами защиты в) органом дыхания г) органом сохранения вида
18. Чем являются для бактерий споры: а) органами размножения б) органеллами защиты в) органом дыхания г) органом сохранения вида
РЕКОМЕНДУЕМАЯ ЛИТЕРАТУРА
Основная:
1. Лекция по теме.
2. Методическая разработка по теме.
3. Борисов Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. С-Пб., 2005. С. 41-45.
4. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. Под ред. Воробьева А.А. М., 2006. С. 30-50.
5. Мотавкина Н.С., Артёмкин В.Д. Атлас по микробиологии и вирусологии. М. 1976. С. 7- 12.
6. Кашкин П.Н. Медицинская микробиология. М., 1999. С. 529-531.
Дополнительная:
-
Медицинская микробиология. Под редакцией В.И. Покровского, О.К. Поздеева. М., 1999.
2. Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии. Под ред. Воробьева А.А., Быкова А.С. М., 2003. С.78-82, 85-92, 141-181.
Таблица 1