МЕТОДИЧЕСКАЯ РАЗРАБОТКА № 6
ТЕМА: Микробиологический метод исследования. Физиология микроорганизмов. Дыхание и его обеспечение в лабораторных условиях. Выделение чистой культуры аэробов и анаэробов.
МОТИВАЦИОННАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ТЕМЫ: Обнаружение возбудителя в материале от больного, в объектах внешней среды, пищевых продуктах – один из прямых и доказательных методов диагностики. Дыхание микробов имеет свои особенности, подходы к выделению микробов аэробов и анаэробов различны. Особенно трудна работа с анаэробами, являющимися возбудителями таких тяжелых заболеваний, как газовая гангрена, столбняк, ботулизм. Поэтому врачи любой специальности должны знать, что:
-
наиболее опасны раны, загрязненные землей и инфицированные консервы;
-
необходимо оберегать от загрязнения бациллами микробов-анаэробов шовный и перевязочный материал, хирургический инструментарий, качественно стерилизовать их;
-
при строительстве детских игровых сооружений, открытых спортивных необходим микробиологический контроль почвы - определение степени ее обсемененности бациллами-анаэробами;
-
бытовая, даже мелкая, травма у детей и взрослых, наличие раневых поверхностей, загрязненных почвой, фекальными массами - повод для:
- срочных профилактических (иногда лечебных) мероприятий,
- поисков микробов-анаэробов, выделения их чистой культуры и идентификации микробов вида.
УЧЕБНАЯ ЦЕЛЬ:
Общая:
-
подготовить студентов к самостоятельному выделению чистой культуры возбудителя предполагаемой аэробной или анаэробной инфекции, ознакомить с общими и специфическими лечебно-профилактическими мероприятиями.
Конкретная:
-
научить методам выделения чистой культуры аэробов и анаэробов (на модели почвы).
ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОПОДГОТОВКИ И ВВОДНОГО КОНТРОЛЯ ЗНАНИЙ
-
Органеллы, дыхание у микробов.
-
Сущность аэробного дыхания и его обеспечение.
-
Сущность анаэробного дыхания и особенности его определения.
-
Способы создания анаэробных условий: физические, химические, биологические.
-
Размножение и рост бактерий (особенности биосинтеза у микробов, динамика и фазы их размножения).
-
Этапы выделения чистой культуры анаэробов и особенности изучения их биологических характеристик.
-
Общность и различия схем выделения культур анаэробов и аэробов.
-
Особенности способов определения углеводолитической и протеолитической активности у микробов-анаэробов.
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ВЫЛПОНЕНИЮ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ СТУДЕНТОВ ПО ТЕМЕ С ПОЛНЫМ РЕГЛАМЕНТОМ ПРОТОКОЛА
№ п/п |
Наименование учебного элемента |
Методическое решение |
Регламент протокола |
1. |
Контроль исходного уровня знаний с коррекцией |
Перечень вопросов для подготовки. Рекомендуемая литература |
|
2. |
Составить схему выделения чистой культуры аэробов и анаэробов с учетом их особенностей |
Приложение 1 |
Зарисовать в протокол |
3. |
Ознакомиться с методами культивирования анаэробов: -физическими -химическими -биологическими |
Приложение 2 Приложение 3 Приложение 4 |
Зарисовать |
4. |
Подготовить мазок из взвеси почвы, окрасить по Граму, зарисовать
|
|
Зарисовать в протоколе в цвете |
5. |
Ознакомиться с особенностями определения протеолитической активности аэробов и анаэробов |
Приложение 5 |
Внести в протокол |
6. |
Ознакомиться с особенностями роста анаэробов при разных способах их культивирования |
Рекомендуемая литература |
|
7. |
Тестовый контроль усвоения темы |
Приложение 6 |
Сложное записать |
Приложение 1
СХЕМА ВЫДЕЛЕНИЯ И ИДЕНТИФИКАЦИИ ЧИСТОЙ КУЛЬТУРЫ АЭРОБНЫХ БАКТЕРИЙ
Ι этап. Накопление или рассев микробного материала.
ΙΙ этап. Получение изолированной колонии.
ΙΙΙ этап. Накопление (получение) чистой культуры.
ΙΥ этап. Идентификация микробного вида.
Параметры идентификации микробного вида:
- морфология и тинкториальные свойства
- культуральные свойства
- антигенная характеристика
-биохимическая характеристика
- факторы патогенности
- фаготипирование - чувствительность к антибиотикам
Υ. Заключительный этап: на основе учета результатов, изучения морфологии, структуры, тинкториальных, культуральных, биохимических, серологических свойств, чувствительности к антибиотикам и бактериофагии дают полное заключение.
СХЕМА ВЫДЕЛЕНИЯ ЧИСТОЙ КУЛЬТУРЫ АНАЭРОБОВ
I этап. Накопление инфекционного материала.
II этап. Получение изолированной колонии.
III этап. Накопление чистой культуры.
IV этап. Идентификация микробного вида.
V этап. Заключение.
Приложение 2
ФИЗИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ АНАЭРОБОВ
Полужидкая среда столбиком под слоем вазелинового масла с резиновой пробкой, посев уколом.
-
Редукцией среды – удаление кислорода с кипячением и с последующим нанесением слоя вазелинового масла.
-
Микроанаэростат Аристовского.
-
Трубки Вейон – Виньяла с запаянными или парафинированными концами.
-
Эксикатор с горящей свечой.
-
Метод Перетца с заливкой инфицированной расплавленной среды между спичками на дне чашки под предметное стекло. Чашка герметически закрывается, под пластилином или парафином.
Приложение 3
ХИМИЧЕСКИЙ МЕТОД КУЛЬТИВИРОВАНИЯ АНАЭРОБОВ
-
Эксикатор, на котором помещается один из поглотителей кислорода, например пирогалол. Крышка плотно притерта.
-
Пробирка Бюхнера с шаровидным расширением и шейкой внизу, куда также помещается поглотитель О2, а над шейкой устанавливается косячок с посевом. Пробка резиновая.
Приложение 4
БИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД КУЛЬТИВИРОВАНИЯ АНАЭРОБОВ (м-д Фортнера)
Метод основан на одновременном посеве в чашку со средой, разделенной по диаметру канавкой, испытуемого материала или чистой выделенной культуры анаэробов и какого-либо штамма-аэроба – жадного потребителя кислорода (Bac. Prodigiosum, Sarcina lutea – из воздуха).
Чашку с посевом герметически закрывается с помощью утрамбованной ваты, пластилина или парафина и становиться для инкубации в термостат.
Вначале в связи с присутствием в чашке О2 бурно растут анаэробы.
Приложение 5
БИОХИМИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГАЗООБРАЗНЫХ ВЕЩЕСТВ ПРИ ОЦЕНКЕ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ
Метод Сальковского для определения индола
Бульонную культуру микроорганизмов нагревают с 4 мл 10% серной кислоты, затем с 0,5 – 2 мл, 0,05 раствора азотисто-натриевой соли. Реактивы приливают по стенке пробирок.
Появление красно-фиолетового кольца указывает на наличие индола.
Определение индола по методу Эрлиха
Культуру выращивают на МПА, после чего делают густой посев в пробирки жидкой средой с казеином, нагретой до 30-35С0.
Пробирки инкубируют 2 часа в термостате, а затем добавляют сначала 5 мл раствора №1, а затем 5 мл раствора №2. Через 5 минут, при наличие индола, появляется красное окрашивание среды.
Раствор №1: парадиметиламинобензальгид – 1г
Этиловый спирт (95о) - 95мл
Соляная кислота (удельный вес 1,19) -20мл
Раствор №2: насыщенный раствор K2Cr2O2.
Определение сероводорода по методу Хоменко
К расплавленному МПА добавляют уксусно-кислый свинец, охлаждают до 45Со, добавляют яичный белок в количестве 2%, тщательно смешивают со средой, разливают по пробиркам и стерилизуют текучим паром (3 дня по 30мин).
Посевы делают уколом. При наличии способности образовывать H2S среда по линии укола чернеет.
Приложение 6
ТЕСТОВЫЙ КОНТРОЛЬ УСВОЕНИЯ ТЕМЫ
Выбрать правильные ответы.
-
Назвать назначение дыхания у микробов:
а) конструктивный, пластический обмен
б) энергетический обмен
в) обе функции
г) ни одна из функций
-
Какие органеллы и субстраты участвуют в дыхании бактерий:
а) клеточная стенка, оболочка
б) цитоплазматическая мембрана
в) ферменты
г) все перечисленное
-
На какие группы делятся бактерии по потребности в молекулярном кислороде?
а) факультативные анаэробы
б) облигатные аэробы
в) микроаэрофильные
г) строгие анаэробы
д) аэротолерантные бактерии
д) все перечисленное
-
Какие ферменты дифференцируют аэробы от анаэробов?
а) оксидазы
б) дегидрогеназы
в) пероксидаза
г) каталаза
-
Какие ферменты участвует в в процессе дыхания у анаэробов?
а) оксидазы
б) дегидрогеназы
в) пероксидаза
г) каталаза
-
В чем суть аэробного дыхания?
а) в реакциях окисления конечным акцептором электронов служит молекулярный кислород
б) в реакциях окисления терминальным акцептором электронов служат соединения, содержащие связанный кислород
в) все перечисленные механизмы
-
В чем суть анаэробного дыхания?
а) в реакциях окисления конечным акцептором электронов служит молекулярный кислород
б) в реакциях окисления терминальным акцептором электронов служат соединения, содержащие связанный кислород
в) все перечисленные механизмы.
РЕКОМЕНДУЕМАЯ ЛИТЕРАТУРА:
Основная:
1.Лекция по теме.
2.Методическая разработка по теме.
3. Борисов Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. М., 2006.
4.Биргер М.О. – справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. М., 1982. С. 93-96.
Дополнительная:
-
Методическое пособие по микробиологии с вирусологией и иммунологией. Свердловск, 1978 (получить на кафедре).
-
Медицинская микробиология. Под ред. Королюка А.М., Сбойчакова В.Б. С-Пб, 2002. С.21-57.
-
Меджидов М.М. Справочник по микробиологическим питательным средам. М., 2003. С. 97.
4. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. С-Пб, 2002.
5. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. Под ред. Воробьева А.А. М., 2006.
6. Поздеев О.И. Медицинская микробиология. Под ред. Покровского В.И. М., 2006.