Постановка реакции хеддльсона при бруцеллезе
Принцип методаоснован на использовании большого отмытого стекла фотопластины. концентрированной неразведённой сыворотки крови больного в нарастающих или уменьшающихся объёмах, дополняемой до определённого уровня физиологическим раствором, что приравнивается к разным разведениям, и окрашенного метиленовым синим диагностикума для лучшей видимости образующегося агглютината. Последнее очень важно при работе с диагностикумами из мелких бактерий (например, бруцелл). Ускорение реакции достигается смешиванием ингредиентов путём лёгкого покачивания стекла и помещения его в термостат при +37Сº. На одном стекле одновременно проводят анализ сывороток от нескольких больных. Результат получают через 2-5 минут в виде голубого агглютината разной активности в зависимости от разведений.
Приложение 5
СХЕМА ПОСТАНОВКИ ПЕРЕКРЁСТНОИ РЕАКЦИИ АГГЛЮТИНАЦИИ ПО КАСТЕЛЛАНИ
Принцип метода:
Перекрёстная РА направлена на извлечение групповых антител методом адсорбции и основана на правиле - специфический антиген (АГ) изымает из сыворотки все антитела — и специфические только для него, и групповые; неспецифический АГ — только групповые.
В данной реакции наряду со специфическим антигеном используют родственные гетерологические АГ. Например, у больного брюшным тифом (Т) сыворотка крови дала агглютинацию со специфическим диагностикумом Т и с групповым паратифа А.
Диагностикум с антигенами паратифа А
(ABEF)
1 этап
2 этап
Оценка РА: в данном примере: больной страдает брюшным тифом.
Приложение 6
Кровяно-капельная реакция минкевича (ра)
Принцип метода: основан на использовании для РА цельной крови без отделения кровяных клеток, но с их предварительным лизисом под влиянием дистиллированной воды.
На обезжиренное предметное стекло нанести каплю крови и каплю дистиллированной воды. В капле образовавшегося гемолизата эмульгировать каплю диагностикума. Покачивая стекло, учесть наступившую реакцию. Контролем служит физ. раствор с диагнустикумом.
При этом в опытной капле — на фоне красного гемолизата видны белые хлопья агглютината (сначала по периферии, затем — по всей капле). В контроле наблюдается общее помутнение.
Приложение 7
ПОСТАНОВКА РЕАКЦИИ НЕПРЯМОЙ (ПАССИВНОЙ) РЕАКЦИИ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ (РНГА ИЛИ РПГА)
ПринципРНГА основан на способности эритроцитов адсорбировать на своей поверхности микробные антигены. Сенсибилизированные таким образом эритроциты агглютинируются в присутствие гомологичной для антигена сыворотки с антителами. При этом реакция идёт между микробным антигеном и антителами, а эритроциты пассивно через них вовлекаются в этот процесс. Для постановки РНГА необходимы эритроциты, обработанные танином, на которых адсорбированы специфические антигены возбудителя. Антигенами в РНГА могут служить очищенные антигены соответствующих микробов, экстракты бактериальных взвесей, надосадочные жидкости формалиновых, спиртовых, гретых бактериальных вакцин, вирусов. Реакцию ставят в агглютинационных пробирках или в лунках иммунологического планшета.
СХЕМА ПОСТАНОВКИ РЕАКЦИИ
|
Ингредиенты
|
Разведение сыворотки
|
Контроли антигена
| ||||||||
|
1:10 |
1: 20 |
1: 40 |
1: 80 |
1: 160 |
1:320 |
1:640 |
1:2800 |
На спон-танную агглюти-нацию |
На специфич- нось реакции | |
|
Физ. раствор, в мл
|
0.5 |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
- |
- |
|
Испытуемая сыворотка в разведении 1:5 в мл, инактивированная 30мин при +56 C° |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
0.5 вылить
|
- |
- |
|
Эритроцитарный диагностикум, в мл |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
|
Контрольная положительная сыворотка |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
0.5 |
|
Контрольная отрицательн-ая сыворотка |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
0.5 |
- |
|
Результат (пример) |
++++ |
++++ |
++++ |
+++ |
++ |
+ |
- |
- |
++++ |
- |
Результаты реакции учитывают через 2 часа инкубации при + 37Сº и вторично — через 24 часа стояния при комнатной температуре. Их оценка зависит от характера осадка эритроцитов.
|
+ + + + |
Резко положительная реакция: эритроциты равномерно покрывают всю лунку планшета в виде разрыхлённого зонтика с неровными краями |
|
+ + + |
Положительная реакция: почти все эритроциты агглютинированы и покрывают дно, края неровные |
|
+ + |
Большинство эритроцитов не агглютинированы, осели на дно, изредка встречаются мелкие хлопья склеенных эритроцитов. Слабая РПГА |
|
- |
Скопление эритроцитов имеет вид маленького, довольно плотного диска (пуговка). |
Титром сыворотки считают последнее её разведение, которое вызывает склеивание эритроцитов при полном или почти полном просветлении надосадочной жидкости (2 плюса).
Приложение 8