Имунологические реакции адсорбционно-агглютинирующего типа
|
Реакции, происходящие в присутствие антител |
Антитела, взаимодействующие с антигенами |
Неспецифические компоненты реакций |
|
Агглютинация развёрнутая, классическая |
Агглютинины
|
Физиологический раствор
|
|
Агглютинация ускоренная: - по Ноблю - по Хеддльсону - кровяно- капельная - по Кастеллани - по Минкевичу |
Агглютинины (концентрированные) -//- -//- -//- -//- |
-//- антиген концентрированный -//- -//- -//- цельная кровь, дист. вода |
|
3. Иммунофлюоресценции - прямая (РИФ) - непрямая (РНИФ) |
Агглютинины, меченые ФИТЦ
|
Флюорохром — изотиоционат флюоресцеина — ФИТЦ
|
|
4. Реакция иммобилизации трепонем (РИТ) |
Агглютинины |
Микроскоп, стёкла (предметные, покровные) |
Приложение 2
СХЕМА ПОСТАНОВКИ РАЗВЁРНУТОЙ РЕАКЦИИ АГГЛЮТИНАЦИИ С
СЫВОРОТКОЙ БОЛЬНОГО ПО ВИДАЛЮ (РАЙТУ)
|
Ингредиенты
|
Содержимое пробирок |
Контроль | ||||
|
Сыворотки |
Антигена | |||||
|
Физиологический раствор 0,85 % хлорида натрия, мл |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
- |
0,5 |
|
Сыворотка в разведении 1:50 мл |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 (1:50) |
-- |
|
Разведения |
1: 100 |
1: 200 |
1: 400 |
1: 800 |
- |
|
|
Диагностикум, 1-2 млрд. микробных тел в 1 мл. |
2к |
2к |
2к |
2к |
- |
2к |
|
В термостат при +37С° на 2 часа, затем на 18-20 часов при комнатной температуре | ||||||
Учёт результатов реакции агглютинации по интенсивности образования агглютината (обозначается крестами).
ИНТЕНСИВНОСТЬ ОБРАЗОВАНИЯ АГГЛЮТИНАТА
|
+ + + + |
Полная агглютинация: очень большой осадок, полное просветление жидкости. Результат положительный |
|
+ + + |
Неполная агглютинация: осадок такой же, надосадочная жидкость над осадком слегка мутновата. Результат положительный |
|
+ + |
Слабая агглютинация: осадок небольшой, жидкость непрозрачная. Результат слабоположительный |
|
+ |
Следы агглютинации: осадок маленький, надосадочная жидкость непрозрачная. Сомнительный результат реакции |
|
- |
Отрицательная реакция: осадка нет, взвесь равномерно мутная. |
Приложение 2а
Ориентировочная ра на стекле (серотипирование бактерий)
Последовательность постановки:
- На предметное стекло нанести по 1 капле (0,05 мл) известных иммунных диагностических сывороток, разведённых физиологическим раствором 1:5 — 1:10, рядом отступив 1,5 см — каплю физ. раствора (контроль).
- Добавить к каждой капле пипеткой равный объём взвеси 24 часовой бульонной испытуемой культуры или петлю агаровой культуры.
- Слегка покачивая стекло, наблюдать за течением реакции.
- Феномен агглютинации проявляется через 5-10 минут появлением взвешенных хлопьев вначале по краям, затем — по всей капле опыта и просветлением и жидкой части. В контроле (контроль спонтанной агглютинации) антигена — жидкость мутная, гомогенная, хлопьев нет.
Приложение 3
СХЕМА ПОСТРОЕНИЯ РЕАКЦИИ НОБЛЯ
Метод Нобля основан на использовании концентрированных ингредиентов (микробной взвеси, сыворотки больного) и применении механического фактора, ускоряющего агглютинацию (энергичное встряхивание пробирок), что позволяют получить результаты через 2-5 минут.
|
Ингредиенты |
Номер опыта |
Контроль | |||||
|
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
Сыворотки |
Антигена | |
|
Физ. раствор, мл |
0,8 |
0,8 |
0,8 |
0,8 |
0,8 |
0,9 |
0,9 |
|
Сыворотка больного в разведении 1:5, мл |
0 |
0 |
0 |
0 |
0
дез. р-р |
0,1 |
- |
|
Разведение сыворотки |
1: 10 |
1: 20 |
1: 40 |
1: 80 |
1: 160 |
|
|
|
Диагностикум (взвесь известных микробов 3-6 млрд.мт/мл) |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
- |
0,1 |
|
Встряхивать 3-5 минут, дать постоять | |||||||
,1
,1
,1
,1
,1При оценке результатов реакции используют поправочный коэффициент 10, который отражает разницу между адсорбционными процессами в концентрированных растворах антител и в растворах обычной концентрации. Таким образом, разведение 1:20 по Ноблю соответствует 1:200 при обычной постановке развёрнутой РА.
Приложение 4