II этап

Среда Клигера (Олькеницкого)

По Граму Подвижность (Н₂S, мочевина, глюкоза, лактоза)

Бактериоскопия - + - -

(грамотрицательные палочки)

Основные тесты:

_______________________________________________________________

Биохимическая активность:

- H₂S + Глюкоза - Среда Симонса ± Орнитин

+ мочевина ± п/ж агар ± Ацетат + Среда Кларка

- лактоза ± Индол - Лизин - Сорбит

_______________________________ Скошенный агар

а) _____ _______________________

РА РА с О-анти Бактерио

сыворотками скопия

Чувствительность Синтез Определение

к антибиотикам бактериоцинов фаговара

Дополнительные тесты: (биохимические)

__________________________________________________________________

+ Маннит ± Адонит + Эскулин + Мальтоза

± Инозит ± Целлобиоза + Трегалоза - Дульцит

- Твин-80 ± Рамноза ± Цитрат Na с глюк. - Биовары

- Фенилаланин - Аргинин + β-галактозидаза

- Малонат ± Сахароза - Арабиноза

Примечание: скорость роста иерсиний замедлена, учет проводят ежесуточно в течение 2 – 4 дней.

Несмотря на то, что возбудитель псевдотуберкулеза неприхотлив к питательным средам, его далеко не всегда можно высеять. Это объясняется не только замедленным ростом этого микроба на питательной среде, а тем, что в исследуемом материале он находится в весьма незначительном количестве при огромном числе микробов из нормальной микрофлоры кишечника, которые его подавляют.

В 1963 году Peterson и Coon предложили использовать для накопления псевдотуберкулезного микроба фосфатно-буферный раствор с инкубацией посевов не при + 37^оС, а при температуре холодильника (+ 4^оС).

В 1969 году Г.Д. Серов создал специальную ДДС № 67 с ингредиентами 3 групп:

1. индикаторная (конго красный, мочевина);

2. ингибиторная (генциановый фиолетовый и желчь);

3. стимуляторы роста (питательный агар, глюкоза и молибденово-кислый аммоний).

На этой среде через 28 – 36 часов инкубации при + 37оС вырастают колонии псевдотуберкулезного микроба двух типов.

Гладкие – S – это мелкие круглые колонии со слегка выпуклым центром. В проходящем свете виден темно-красный центр с радиальной и конусовидной исчерченностью.

Колонии R – формы шероховатые, крупные (4,5 – 5 мм), более плоские, неправильной формы, с неровными краями, центр их пигментирован и слегка выпуклые, поверхность зернистая, края фестончатые. Колонии обоих типов имеют суховатую, матовую поверхность с перламутровым блеском, сдвигающиеся по поверхности агара при снятии петлей. При обильном росте колоний появляется аммиачный запах.

Преимущество этой среды - невозможность спутать колонии псевдотуберкулезного микроба с другими видами микробов.

Псевдотуберкулезный микроб можно выделить и на других средах:

обычном МПА, МПА с генциановым фиолетовым и кровью, Эндо, Левина и др. Но лучшей является ДДС № 67 Серова.

Приложение 10

Ускоренные методы диагностики чумы

1. Фагодиагностика – выделение фага из тканей больного человека, животных, блох.

2. Реакция иммунофлюоресценции (РИФ, РНИФ).

3. Реакция нейтрализации антител.

4. Реакция преципитации в стандартных агаровых пластинах.

5. Метод ускоренного роста возбудителей на средах обогащения.

6. Ускоренные биологические пробы с предварительным введением животным глюкокортикоидов или куриного желтка.

7. Иммуноферментный метод (ИФА) на антиген.

Приложение 11

Дифференциальные признаки бактерий рода Yersinia

Тест или субстрат	Yersinia enterocolitia	Yersinia pestis	Yersinia pseudotuberculosis
Образование индола	±	-	-
Реакция Фогеса-Проскауэра	±	-	-
Цитрат Симонса	-	-	-
Уреазная активность	+	-	+
Орнитин декарбоксилаза	+	-	-
Ферментация: мелибиозы	-	±	+
“ рафинозы	-	-	±
“ сорбита	+	-	-
“ cахарозы	-	-	+
“ рамнозы	-	-	-
“ муката	-	-	-
Психрофильность	-	+	+

Приложение 12