Микробиологическая диагностика туляремии

I. Бактериологический метод:

Материал для исследования:содержимое бубона, отделяемое кожной язвы, конъюнктивы, зева, кровь, мокрота, ткани и органы трупа человека, грызунов, животных, объекты внешней среды.

1 день: Обработка Мазки-отпечатки Заражение

иммунолюминесцентной Окраска по Граму морской свинки

сывороткой (РИФ, РНИФ)

3-5 дни: Патанатомическое мазки-отпечатки Посев на среду Посев на МПА

исследование органов Окраска по Граму Мак-Коя (нет роста).

(желточная среда)

6-7 дни: Мазок Реакция агглютинации Изучение биохимической

Окраска с туляремийной активности проводят редко

по Граму диагностической (среды Гисса непригодны.

сывороткой Используют монометрический

метод Варбурга).

Бактерии туляремии расщепляют до кислоты гл, мл

Образуют Н₂S.

II. Биологический метод:

подкожное или внутрибрюшинное заражение мышей, морских свинок:

- патанатомическое исследование (увеличение миндалин, органов РЭС и т.д.);

- мазки – отпечатки, микроскопия;

- посев на питательные среды.

III. Серологический метод:

чаще используют для ретроспективной диагностики реакции:

- агглютинации (диагностический титр у детей 1:100),

- гемагглютинации (титры 1:1280 – 1:1560),

- кровяно-капельную реакцию Минкевича,

- реакцию преципитации.

IV. Аллергологический метод:

0,1 мл тулярина вводится строго внутрикожно.

Для контроля – 0,1 мл 0,9% физиологического раствора.

Учет результатов через 24-48 часов.

Приложение 6

Лабораторная диагностика чумы

1. Материал для исследования

Содержимое бубонов, язв,кровь, СМЖ, мокрота, испражнения, трупный материал(грызунов, людей), блохи.

2. Методы исследования

1. Микроскопический (окраска по Граму, РИФ).

2. Микробиологический с выделением культуры и её идентификацией.

3. Биологический с заражением чувствительных животных (мыши, крысы).

4. Иммунологический: РА, РНГА, РИФ, ИФА.

5. Аллергологический метод применяется invivo,invitro

а) Используется при ДСЛ в виде внутрикожной пробы с аллергеном, полученным из псевдотуберкулезного микроба. Это специфический аутолизат или препарат из его клеточной стенки. Положительная реакция начинает проявляться с 4-7 дня болезни и сохраняется до 5 месяцев. Это реакция in vivo на больных.

б) Аллергеном – псевдотуберкулином пользуются так же для реакции повреждаемости нейтрофилов больного invitro.

Приложение 7

Схема бактериологического выделения возбудителя чумы

I этап. Бактериоскопия Отделяемое язвы, бубона,

(грамотрицательные мокрота, кровь, кал, грызуны,

коккобациллы и палочки) насекомые, трупы

Биопроба

Иммунофлюоресценция (втирание)

РИФ (АТ) МПБ

II этапБактериоскопия Среда Туманского-

МПА Коробковой

Биопроба

По Граму Подвижность Бактериоскопия РНГА

III этапБактериоскопия ИФА

РИФ Иммуно-

флюоросценция

РА РНГА

а)Чувствительность к б)Определение

антибиотикам фаговара

_________________________________________________________________

в) Биохимическая активность (углеводов)

+ Глюкоза + Левулеза ± Сорбит

+ Мальтоза - Сахароза ± Декстрин

+ Галактоза - Рафиноза ± Лактоза

+ Маннит - Инулин ± Глицерин

+ Маноза - Дульцит ± Рамноза

+ Сорбоза ± Инозит

IV этап. Анализ полученных результатов и заключение.

Примечание: В связи с высокой энергией роста Y. pestis все этапы могут пройти в течение суток. Поэтому учет результатов следует проводить многократно, каждые 4-8 часов. Заключение дается на основе совокупности всех признаков.

Приложение 8

Питательные среды для иерсиний

1. Среда Клиглера содержит три сахара: глюкозу, сахарозу, лактозу, МПА, индикатор-феноловый красный.

2. Среда Эндо – МПА, глюкоза, лактоза, индикатор – фуксин.

3. Среда Левина – МПА, лактоза, индикатор – эозин с метиленовым синим.

4. Среда Серова Г.Д. – глюкоза, мочевина, желчь, конго красный, генциановый фиолетовый, МПА, молибденовокислый аммоний.

5. Среда обогащения – фосфатно-буферный раствор.

6. Реакция Фогес-Проскауэра – В среду Кларка засевают культуру, затем добавляют креатинин / альфа-нафтол с КОН/ В положительном случае бульон окрашивается в розовый цвет.

7. Среда Кларка – МПБ, 1% глюкозы, К₂НРО₄.

8. Среда Бессоновой жидкая голодная с рамнозой.

9. Среда Бессоновой плотная – 3% голоднокислый агар.

10. Среда Туманского-Коробковой с рамнозой.

Приложение 9

Схема бактериологического выделения возбудителей иерсиниозов

I этап Испражнения, кровь,

рвотные массы, желчь,

По Граму Подвижность дуоденальное содержимое, моча, секционный материал.

Среда обогащения

Среда Эндо Среда Серова