Экспресс-методы диагностики вибрионов

1. Люминесцентно-серологический (РИФ, РНИФ).

2. Иммобилизация вибрионов типовыми сыворотками.

3. Иммобилизация вибрионов типовыми бактериофагами.

4. Развернутая реакция агглютинации в бульоне.

5. Метод микроагглютинации материала.

6. Выявление вибрионов в воде реакцией агглютинации.

7. Исследование воды путем подращивания на мембранных фильтрах с помощью люминесцентной микроскопии.

Особенности иммунолюминисцентной диагностики холеры – риф и рниф

РИФ – реакция прямой иммуно-флюоресценции при холере ставится по классической методике путем микроскопического выявления возбудителя в зафиксированном и обработанном ФИТЦ – препаратом мазке. Эта особенность (обязательная фиксация) связана с эпидемической опасностью работы с ООИ.

РНИФ – непрямая реакция иммунофлюоресценции ставится в случае отсутствия меченой ФИТЦ противохолерной иммунной сыворотки, но при наличии специфической не меченой и меченой противоиммуноглобулиновой видовой к белкам того вида животного, который использован для получения иммунных противохолерных антител. Эта реакция разработана Кунсом. Она выявляет антитела к Ig в иммунной сыворотке, среагировавшие в мазке с возбудителем.

Приложение №11

Питательные среды

1. Жидкие среды обогащения:

1. 1% пептонная вода.

2. Пептонная вода с теллуритом калия.

2. Плотные среды:

1. Щелочной агар (рН = 8-8,2).

2. Щелочной агар с теллуритом калия.

3. Желточно-солевой агар (ЖАС).

4. Среда Дьедонне (щелочной МПА с дефибринированной кровью быка или барана).

5. Среда Монсура (таурохолат-теллуритовая).

6. Среда Аронсона (щелочной агар с сахарозой, сернокислым натрием, фуксином). Холерные вибрионы дают розовые колонии.

7. Среда Оттоленги (щелочной МПБ с бычьей желчью).

8. Теллурит-калиевая среда.

9. Висмут-сульфитная среда Рида.

10. Висмут-сульфитная среда с маннозой Вильсона и Рейли, рН-8,8.

3. Консервирующие среды:

1. Среда Венкатрамена и Рамакришнона (щелочной бульон с морской солью).

2. 2% раствор поваренной соли (морская соль).

3. 1% пептонная вода.

Приложение №12

Фаготипирование холерными диагностическими бактериофагами хдф холерных вибрионов Эль-Тор с одновременной дифференциацией их патогенности

Серотип	Вирулентность	Чувствительность к монофагам			Гемолиз эритроцитов барана
		ХДФ-3	ХДФ-4	ХДФ-5
Огава, Гикошима	Высокая	+ + - +	+ + + -	+ - + +	- - - -
	Слабая	+ + + -	+ + - -	+ - + +	+ + +(-) +(-)
	Авирулентные	- + -	- - +	- - -	+(-) +(-) +(-)
Инаба	Высокая	+ + - - +	+ + + - -	+ - + + -	- - - - -
	Слабая	+ + - + - +	+ + + - - -	+ - + + + -	+ + + + + +
	Авирулентные	- -	- +	- -	+(-) +(-)

Примечание: ХДФ – холерный диагностический фаг.

Фаготипирование энтеротоксигенных неагглютинирующих вибрионов (наг) не 01 группы типовыми бактериями тэпв к энтеропатогенным вибрионам

Фаготипы вибрионов НАГ	Типирующие фаги
	ТЭПВ - 1	ТЭПВ - 2	ТЭПВ - 3	ТЭПВ - 4	ТЭПВ - 5	ТЭПВ - 6	ТЭПВ - 7
1	+
2		+
3			+
4				+
5					+
6						+
7							+

Примечание: ТЭПВ – типовые фаги к энтеропатогенным вибрионам НАГ. Типируют методом агаровых слоев.

Методика: испытуемую культуру засевают в пробирку с 4 мл МПБ, инкубируют при + 37^о С в течение 3 часов. Затем 0,3 мл бульонной культуры вносят в пробирку с 4 мл. 0,7% расплавленного и остуженного до + 45^оС МПА, перемешивают и выливают вторым тонким слоем в стерильную чашку с первым застывшим слоем 2% МПА, после этого на поверхность МПА петлей или каплей из пипетки наносят типовые бактериофаги в цельном виде, а при необходимости – в разведении от 10^-1 до 10^-4. Каплям фага дают подсохнуть, впитаться, после чего пробы помещают в термостат при +37^оС на 4-18 часов. Контроль – физ.раствор.

Учет результатов ведут при наличии стерильных пятен в связи с лизисом чувствительных к фагу культур. В контроле и при нечувствительности культуры лизиса нет.

Ускоренный метод. Из подготовленной бульонной культуры делают штриховой высев на 8 секторов МПА, а сверху наносят бактериофаг. Режим инкубации и учет результатов те же.

Приложение №13