Добавил:
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
МР ПФ частн студ ПТИ, холера.doc
Скачиваний:
48
Добавлен:
19.06.2017
Размер:
468.99 Кб
Скачать

Экспресс-методы диагностики вибрионов

  1. Люминесцентно-серологический (РИФ, РНИФ).

  2. Иммобилизация вибрионов типовыми сыворотками.

  3. Иммобилизация вибрионов типовыми бактериофагами.

  4. Развернутая реакция агглютинации в бульоне.

  5. Метод микроагглютинации материала.

  6. Выявление вибрионов в воде реакцией агглютинации.

  7. Исследование воды путем подращивания на мембранных фильтрах с помощью люминесцентной микроскопии.

Особенности иммунолюминисцентной диагностики холеры – риф и рниф

РИФ – реакция прямой иммуно-флюоресценции при холере ставится по классической методике путем микроскопического выявления возбудителя в зафиксированном и обработанном ФИТЦ – препаратом мазке. Эта особенность (обязательная фиксация) связана с эпидемической опасностью работы с ООИ.

РНИФ – непрямая реакция иммунофлюоресценции ставится в случае отсутствия меченой ФИТЦ противохолерной иммунной сыворотки, но при наличии специфической не меченой и меченой противоиммуноглобулиновой видовой к белкам того вида животного, который использован для получения иммунных противохолерных антител. Эта реакция разработана Кунсом. Она выявляет антитела к Ig в иммунной сыворотке, среагировавшие в мазке с возбудителем.

Приложение №11

Питательные среды

  1. Жидкие среды обогащения:

  1. 1% пептонная вода.

  2. Пептонная вода с теллуритом калия.

  1. Плотные среды:

  1. Щелочной агар (рН = 8-8,2).

  2. Щелочной агар с теллуритом калия.

  3. Желточно-солевой агар (ЖАС).

  4. Среда Дьедонне (щелочной МПА с дефибринированной кровью быка или барана).

  5. Среда Монсура (таурохолат-теллуритовая).

  6. Среда Аронсона (щелочной агар с сахарозой, сернокислым натрием, фуксином). Холерные вибрионы дают розовые колонии.

  7. Среда Оттоленги (щелочной МПБ с бычьей желчью).

  8. Теллурит-калиевая среда.

  9. Висмут-сульфитная среда Рида.

  10. Висмут-сульфитная среда с маннозой Вильсона и Рейли, рН-8,8.

  1. Консервирующие среды:

  1. Среда Венкатрамена и Рамакришнона (щелочной бульон с морской солью).

  2. 2% раствор поваренной соли (морская соль).

  3. 1% пептонная вода.

Приложение №12

Фаготипирование холерными диагностическими бактериофагами хдф холерных вибрионов Эль-Тор с одновременной дифференциацией их патогенности

Серотип

Вирулентность

Чувствительность к монофагам

Гемолиз эритроцитов барана

ХДФ-3

ХДФ-4

ХДФ-5

Огава,

Гикошима

Высокая

+

+

-

+

+

+

+

-

+

-

+

+

-

-

-

-

Слабая

+

+

+

-

+ + -

-

+

-

+ +

+

+

+(-)

+(-)

Авирулентные

-

+

-

-

-

+

-

-

-

+(-)

+(-)

+(-)

Инаба

Высокая

+ + -

-

+

+ + + -

-

+

-

+ + -

-

-

-

-

-

Слабая

+ + -

+

-

+

+ + + -

-

-

+

-

+

+ +

-

+ + + + + +

Авирулентные

-

-

-

+

-

-

+(-)

+(-)

Примечание: ХДФхолерный диагностический фаг.

Фаготипирование энтеротоксигенных неагглютинирующих вибрионов (наг) не 01 группы типовыми бактериями тэпв к энтеропатогенным вибрионам

Фаготипы вибрионов НАГ

Типирующие фаги

ТЭПВ

- 1

ТЭПВ - 2

ТЭПВ

- 3

ТЭПВ

- 4

ТЭПВ

- 5

ТЭПВ

- 6

ТЭПВ

- 7

1

+

2

+

3

+

4

+

5

+

6

+

7

+

Примечание: ТЭПВ – типовые фаги к энтеропатогенным вибрионам НАГ. Типируют методом агаровых слоев.

Методика: испытуемую культуру засевают в пробирку с 4 мл МПБ, инкубируют при + 37о С в течение 3 часов. Затем 0,3 мл бульонной культуры вносят в пробирку с 4 мл. 0,7% расплавленного и остуженного до + 45оС МПА, перемешивают и выливают вторым тонким слоем в стерильную чашку с первым застывшим слоем 2% МПА, после этого на поверхность МПА петлей или каплей из пипетки наносят типовые бактериофаги в цельном виде, а при необходимости – в разведении от 10-1 до 10-4. Каплям фага дают подсохнуть, впитаться, после чего пробы помещают в термостат при +37оС на 4-18 часов. Контроль – физ.раствор.

Учет результатов ведут при наличии стерильных пятен в связи с лизисом чувствительных к фагу культур. В контроле и при нечувствительности культуры лизиса нет.

Ускоренный метод. Из подготовленной бульонной культуры делают штриховой высев на 8 секторов МПА, а сверху наносят бактериофаг. Режим инкубации и учет результатов те же.

Приложение №13

Тут вы можете оставить комментарий к выбранному абзацу или сообщить об ошибке.

Оставленные комментарии видны всем.