- •Методические указания для студентов к практическому занятию
- •Санитарная микробиология пищевых продуктов, санитарный контроль бактерионосительства у персонала пищеблоков. Микробиология холеры и галофилезов»
- •Владивосток – 2013 г.
- •2. Мотивация изучения темы.
- •3. Цели занятия.
- •4. Задания для самостоятельной подготовки к практическому занятию:
- •4.1. Перечень контрольных вопросов для самоконтроля знаний.
- •I раздел:
- •II раздел:
- •4.2. Задания для срс во внеучебное время
- •Методические указания по выполнению практической работы с полным регламентом протокола занятия и его оформлением
- •5.3. Задания для самоконтроля подготовки к практическому занятию.
- •6. Этапы проведения практического занятия.
- •7. Ориентировочная основа действия (оод) для проведения самостоятельной работы студентов в учебное время (курация, выполнение лабораторной работы и т.Д.).
- •9. Учебно-материальное обеспечение:
- •9.1 . Литература:
- •9.2. Базы данных, информационно-справочные и поисковые системы:
- •Методы исследования пищевых токсикоинфекций:
- •Внутрибольничный сальмонеллез
- •Бактериологическое исследование
- •2. Микроскопия (1, 2 делают для того, чтобы убедиться в чистоте культуры)
- •Методы дополнительного тестирования и диагностики
- •Материал исследования
- •Микробиологическая индикация ботулизма у больных и пищевых объектах:
- •Токсинообразование у бацилл ботулизма:
- •Сальмонеллезных токсикоинфекций
- •Сальмонеллезов
- •Объекты и материал для диагностики
- •Мероприятия, направленные на предупреждение заноса инфекции в стационары и возникновение госпитальных сальмонеллезов:
- •Классификация семейства Vibrionaceae
- •V.Harveyi V.Marinus
- •V.Parahaemolyticus V.Minicus
- •Основные дифференциальные признаки возбудителей холеры
- •Развернутая дифференциальная характеристика холерных 01 и основных видов холерных не 01 вибрионов
- •Бактериологического исследования (начальный этап)
- •Ускоренный метод диагностики холеры
- •I этап:
- •Экспресс-методы диагностики вибрионов
- •Особенности иммунолюминисцентной диагностики холеры – риф и рниф
- •Питательные среды
- •Фаготипирование холерными диагностическими бактериофагами хдф холерных вибрионов Эль-Тор с одновременной дифференциацией их патогенности
- •Фаготипирование энтеротоксигенных неагглютинирующих вибрионов (наг) не 01 группы типовыми бактериями тэпв к энтеропатогенным вибрионам
- •Характеристика генетической основы патогенности
- •Галофильные вибрионы
- •Основные свойства некоторых морских галофильных и не галофильных вибрионов, патогенных для человека
Бактериологическое исследование
1 день
материал Цель исследования - накопление микроорганизмов.
1 .Визуальный контроль 2.Ориентировочная микроскопия
день
рост
на средах Мюллера, Кауфмана
день
рост
изолированных колоний на среде Эндо
день
рост
чистой культуры
Цель исследования - получение изолированных колоний.
1 .Визуальный контроль
2. Микроскопия
3. Посев на среду Эндо (+37°С, 24 часа)
Цель - получение чистой культуры.
1 .Визуальный контроль
2.Микроскопия (изучение морфологии, тинкториальных свойств)
3. Реакция агглютинации с О и Н монорецепторными сальмонел- лезными сыворотками
4. Посев на скошенный агар (МЦА) +37°С, 24 часа
Цель - идентификация микробного вида.
1 .Визуальный контроль
2. Микроскопия (1, 2 делают для того, чтобы убедиться в чистоте культуры)
3. Изучение биохимических свойств
4. Пробы Штерна, Биттера
5. Серологическая идентификация с набором диагностических агглютинирующих сывороток (к S.cliderae bius, C.enterilidis, S.typbrimurium).
Приложение № 3
Методы дополнительного тестирования и диагностики
Среды накопления:
Среда Мюллера (МПБ + мел + раствор Люголя + гипосульфит).
Среда Кауфмана (ср. Мюллера + желчь + 0,1 % водный раствор бриллиантового зеленого).
Диагностическо-дифференциальные пробы:
Проба Штерна: Глицериновый фуксин - бульон по Штерну составлен по принципу среды Эндо (МПБ + 5 капель спиртового раствора основного фуксина + сульфит натрия + глицерин). Среда золотисто-желтая. В среде Штерна палочка Бреслау с первого дня образует интенсивное лилово-красное окрашива ние (ранняя реакция), палочка Гертнера - с 3-5 дня, бактерии паратифа В подобные изменения вызывают на 6-9 день (поздняя реакция). Изменение цвета идет за счет восстановления фуксина, ранее обесцвеченного сульфита натрия. Восстановление — за счет образования кислоты или альдегидобразования.
2. Проба Биттера: Среда Биттера с рамнозой (дистиллированная вода + двуосновной фосфорнокислый натрий + сернокислый аммоний + лимоннокислый натрий + хлористый натрий + пептон + рамноза).
К суточной культуре, выросшей на этой среде, добавляют 2-3 капли 0,5 % спиртового раствора метилрота. В зависимости от степени, кислотоустойчиво- сти среда краснеет или остается желтой. Бреславская палочка дает красную окраску, суипестифер - оранжевую или желтую, паратифа В - желтую.
Серологическая диагностика
Постановка реакции Видаля с сывороткой больного. Она имеет основное диагностическое значение у детей раннего возраста, т.к. процент положительных гемо- копро- культур у них невысок. Дагностический титр взрослых 1 : 200, у детей - 1 : 100. Диагностическое значение имеет повышение титра антител при повторном исследовании.
Приложение № 4
Схема исследования на токсичность стафилококка по Г.Н Чистовичу (1969)
Материал исследования
ЖСА - желточно-солевой агар Г.Н. Чистовича элективен для стафилококков в связи с высоким содержанием хлористого натрия (10 %), а добавленный яичный желток (1 на 100 мл МПА) позволяет выявлять лецитовителлазную активность, которая является одним из показателей патогенности стафилококков. Поэтому ЖСА более четко дифференцирует патогенных представителей, чем кровяной агар.
Реакция плазмоагглютинации:
Микробную массу размешать петлей на стекле в каплях цитратной кроличьей или человеческой плазмы, разведенной 1 : 4. Образование хлопьев учитывают в течение 30 сек-1 мин. При наличии плазмоагглютинации штаммы считают патогенными.
Коагулазная проба развернутая
Ассептично взятую кровь обрабатывают 1 -4 % раствором цитрата или 0,1 % оксалата, для получения плазмы кровь центрифугируют или отстаивают на холоду, отсасывают пипеткой. Плазму по 0,2-0,3 мл наливают в стерильные пробирки + 1 петля или 0,1 мл испытуемой бульонной культуры. Контроль - то же с заведомо патогенным стафилококком. Все пробирки выдерживают в термостате при +37°С. Учет проводят дважды: через 2- 3 часа и 24 часа по свертыванию плазмы и образованию сгустков. Активные культуры дают положительную реакцию уже через 2-3 часа, слабокоагулирующие - в более поздние сроки.
Определение фибролизина методом Кристи:
Среда Кристи-Чемпена; мясной экстракт, пептон, хлористый натрий, агар, вода, рН=7,0. Стерилизуют в автоклаве, хранят впрок.
Перед опытом растапливают агар, остужают до +50оС, добавляют 20% стерильной плазмы. Прогревают в водяной бане при +70оС в течение 2-5 минут до появления явной мути, разливают в чашки Петри. Испытуемые культуры засевают «пятнами» по 15-20 на чашку. Посевы инкубируют при +37оС. Учет результатов по зонам просветления (лизиса фибрина) вокруг колоний ведут через 14, 24, 48 часов.
Для изучения токсигенности стафилококков используют:
Метод Илека и Леви (1950)
Берут чашки с МПА + 5 % отмытых физиологическим раствором эритроцитов барана (кролика, человека). На поверхность питательной среды по диаметру помещают стерильную полоску фильтровальной бумаги, смоченную альфа-антитоксической сывороткой. Отступив 1-2 мл от края полоски перпендикулярно к ней засевают штрихами исследуемые культуры. Посевы инкубируют при +37оС в течение суток, после чего учитывают результаты;
альфа-гемолизин проявляется в виде полного просветления среды вокруг штриха культуры и нейтрализуется альфа-антитоксической сывороткой мазка полоски. Он выявляется на средах с кроличьими и бараньими эритроцитами;
бета-гемолизин на агаре с бараньей кровью дает частичное просветление, зона которого имеет буровато-пурпурный оттенок. Это «тепло-холодовой» токсин и лучше выявляется после дополнительного суточного выдерживания чашек в холодильнике при +4оС по характерному послойному гемолизу бараньих эритроцитов и не нейтрализуется альфа- антитоксической сывороткой. На кроличьих эритроцитах он не активен;
дельта-гемолизин определяется по узкой полоске гемолиза бараньих и кроличьих эритроцитов, не нейтрализуется альфа-антитоксической сывороткой.
Приложение № 5