- •Руководство
- •Основные этапы развития микробиологии
- •Принципы организации и оборудования микробиологической лаборатории, правила работы в ней
- •Раздел . Морфология микроорганизмов
- •Клеточная стенка
- •Химический состав клеточных стенок грамположительных и грамотрицательных прокариот
- •Цитоплазматическая мембрана
- •Периплазматическое пространство
- •Мезосомы
- •Цитоплазма
- •Метод окраски по Нейссеру
- •Нуклеоид
- •Капсула
- •Жгутики
- •Ворсинки (фимбрии, пили)
- •Светлопольная микроскопия
- •Темнопольная микроскопия
- •Фазовоконтрастная микроскопия
- •Люминесцентная микроскопия
- •Электронная микроскопия
- •Питание бактерий
- •Питание бактерий
- •Питательные среды
- •Условия культивирования бактерий
- •Дыхание бактерий
- •Дыхание бактерий
- •Ферменты бактерий
- •Культуральные свойства бактерий
- •Выделение чистых культур микроорганизмов
- •Особенности культивирования отдельных групп прокариот
- •Действие физических факторов на микроорганизмы
- •Методы стерилизации
- •Действие химических факторов на микроорганизмы
- •Раздел III. Экология микроорганизмов
- •Микрофлора почвы
- •Санитарно-бактериологическое исследование почвы
- •Микрофлора воды
- •Санитарно-бактериологическое исследование воды
- •Нормативы качества питьевой воды
- •Микрофлора воздуха
- •Санитарно-бактериологическое исследование воздуха
- •Критерии оценки воздуха жилых помещений
- •Критерии оценки воздуха лечебно-профилактических учреждений
- •Микрофлора организма человека
- •Микрофлора кожи
- •Санитарно-бактериологическое исследование кожи
- •Микрофлора полости рта
- •Микрофлора желудочно-кишечного тракта
- •Микрофлора дыхательных путей
- •Микрофлора конъюнктивы
- •Микрофлора уха
- •Микрофлора мочеполовой системы
- •Значение нормальной микрофлоры организма человека
- •Дисбиоз
- •Микрофлора пищевых продуктов
- •Санитарно-бактериологическое исследование пищевых продуктов
- •Микрофлора лекарственных растений, лекарственного сырья и готовых лекарств
- •Микрофлора растительного лекарственного сырья
- •Микрофлора готовых лекарственных форм
- •Санитарно-бактериологические методы исследования в аптеках
- •Санитарная микробиология, её задачи
- •Влияние биологических факторов на микроорганизмы
- •Раздел IV. Генетика микроорганизмов Генетическая система бактерий
- •Репликация бактериальной днк
- •Транскрипция
- •Регуляция выражения генетической информации у бактерий
- •Перенос генетического материала бактерий
- •Генетическая изменчивость бактерий
- •Фенотипическая изменчивость бактерий
- •Методы изучения генетики бактерий
- •Применение генетических методов в диагностике инфекционных заболеваний
- •Зонд с меткой
- •Раздел V. Инфекция Инфекция. Факторы инфекционного процесса. Основные формы инфекции
- •Основные источники инфекции. Пути и способы заражения. Ворота инфекции.
- •Периоды инфекционного процесса.
- •Понятие о патогенности и вирулентности бактерий. Токсины.
- •Моделирование инфекционного процесса на лабораторных животных.
- •Раздел VI. Иммунология инфекционного процесса Общая характеристика, виды и формы иммунитета
- •Факторы и механизмы неспецифической противоинфекционной защиты
- •Слизистые оболочки
- •Лимфатические узлы
- •Воспаление. Фагоцитоз
- •Гуморальные факторы и методы их определения
- •Нормальные антитела
- •Комплемент
- •Мембраноатакующий комплекс
- •Пропердин
- •Лизоцим
- •Бактерицидная активность сыворотки
- •Интерферон
- •2,5-Олигоадени-
- •Антигены
- •Методы дезинтеграции микробов
- •Методы выделения клеточных компонентов
- •Антитела
- •Генетический контроль биосинтеза антител
- •Клеточная кооперация в иммунном ответе
- •Процессинг и презентация антигена
- •Корецепторы межклеточных взаимодействий
- •Клеточный тип иммунного ответа
- •Гуморальный (антительный) тип иммунного ответа
- •Особенности иммунитета при бактериальных, грибковых и протозойных инфекциях Антибактериальный иммунитет
- •Особенности иммунитета при грибковых заболеваниях
- •Особенности иммунитета при протозойных заболеваниях
- •Серологические методы исследования
- •Реакция агглютинации (ра)
- •Реакция преципитации (рп)
- •Реакция кольцепреципитации
- •Радиальная иммунодиффузия по Манчини
- •Реакция иммуноэлектрофореза (иэф)
- •Реакция связывания комплемента (рск)
- •Реакция непрямой гемагглютинации(рнга)
- •Реакция гемагглютинации (рга) и реакция торможения гемагглютинации (ртга)
- •Реакция иммунофлуоресценции (риф)
- •Радиоиммунологический анализ (риа)
- •Иммуноферментный метод (ифа)
- •Раздел VII. Основы вирусологии Морфология и методы исследования вирусов
- •Кислота
- •Физиология вирусов
- •Цитоплазма
- •Методы культивирования и индикации вирусов
- •Генетика вирусов
- •Противовирусный иммунитет
Лизис
мембраны
МАКМембраноатакующий комплекс
Пропердин
В 1954 году Л. Пилломер обнаружил сывороточный фактор, который, как тогда считалось, активирует С3и является центральным звеном альтернативного пути активации комплемента. Он был назван пропердином. Вскоре были обнаружены еще два дополнительных сывороточных белка – В иD. Вместе с компонентами комплемента С5– С9они были объединены в пропердиновую систему. Действительная роль пропердина (Р) в альтернативном пути активации оказалась иной. Он является стабилизатором комплекса С3ВВ (схема3).
Схема 3. Роль пропердина в альтернативном пути активации комплемента
ЛПС
P
– стабилизатор комплекса С3вВ
Д – фермент-активатор
комплекса С3вВ.
Образуется
С3вВв, являющийся конвертазой для С5
Первичный
С3в
С3
С3а
Усиление образования
С3в
за счет расщепления
С3
Фактор В – протеиназа, Мм – 95 кD,
Фактор D– гликопротеин, Мм – 25 кD,
Фактор Р – -глобулин, Мм – 220 кD.
Тем не менее, содержание пропердина в сыворотке крови в определенной степени, коррелирует с уровнем ее бактерицидной активности. В силу этого определение содержания пропердина в сыворотке крови больных продолжает использоваться в практике.
О количестве пропердина в испытуемой сыворотке судят по степени сорбции комплемента на комплексе зимозан-пропердин. Чем больше в сыворотке пропердина, тем интенсивнее будет связываться этим комплексом комплемент.
Методика: опыт ставится в двух пробирках. Опытная содержит испытуемую сыворотку, зимозан и комплемент. Контрольная — только испытуемую сыворотку и комплемент. Пробирки инкубируют при 37°С 60 мин. Далее в обеих пробирках по общепринятой методике титруют комплемент. Титр комплемента в контрольной пробирке показывает, какое количество комплемента было в опытной пробирке до образования комплекса пpoпердин-зимозан. Титрование же комплемента в опытной пробирке показывает какое количество осталось несвязанным после образования этого комплекса. По разнице полученных единиц можно судить о количестве комплемента, связанного комплексом пропердин—зимозан. За одну единицу пропердина принимается его количество, которое полностью связывает весь комплемент в 1 мл сыворотки.
Лизоцим
По химической структуре лизоцим относится к полипептидам, содержащим в молекуле около 130-160 аминокислотных остатков. Он растворим в слабокислой среде, устойчив к непродолжительному кипячению, к трипсину.
Лизоцим (мурамидаза) способен расщеплять основное вещество клеточной стенки бактерии муреин путем разрушения связи между первым углеродным атомом n-ацетилмурамовой кислоты и четвертым углеродным атомомn-ацетилглюкозамина, входящего в состав клеточной стенки бактерий. В результате этого изменяется ее проницаемость.
Лизоцим является мощным защитным фактором слизистой оболочки полости рта, глаза, содержится в слезах, слюне, крови, материнском молоке, тканях различных внутренних органов. Высокая концентрация лизоцима выявляется в околоплодных оболочках и водах плода.
Основная масса лизоцима синтезируется, по-видимому, тканевыми макрофагами и нейтрофилами.
Лизоцим выполняет в организме важные биологические функции: бактерицидное действие, стимулирующее воздействие на фагоцитоз, способность нейтрализовать некоторые микробные токсины, а также противовоспалительное действие.
Наибольший литический эффект лизоцим оказывает на культуру микрококка (in vitro). Действие лизоцима можно оценить фотометрически по уменьшению оптической плотности суспензии микрококка.
Методика.Готовят исходный раствор кристаллического лизоцима 100 мг/мл, а из него 9 различных разведений.
Все разведения как лизоцима, так и бактерий, делают на 1/15 М фосфатном буфере, рН=6,2 (табл. 11).
Для приготовления взвеси бактерий смывают буферным раствором со скошенного агара суточную культуру микрококка и стандартизируют его на ФЭК-М по левому барабану до оптической плотности 0,66.
Таблица 11
Схема титрования лизоцима
-
Ингредиенты
пробирки
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
1. Исследуемая сыворотка (1:10), мл
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
0,20
0,30
0,40
0,50
-
2. Физ. раствор, мл
0,48
0,46
0,44
0,42
0,40
0,30
0,20
0,10
-
0,5
В каждую пробирку с приготовленными разведениями лизоцима вносят по 2 мл взвеси микрококка и выдерживают при 37°С 30 мин в термостате. Замеряют оптическую плотность на ФЭК-М по правому барабану в кювете № 2 с зеленым светофильтром. На основе полученных данных строят калибровочную кривую.
Для определения количества лизоцима исследуемый материал в объеме 0,1 мл добавляют к 0,4 мл буфера и к полученной смеси приливают 2 мл стандартизованной смеси микрококка. Контролем является пробирка, не содержащая исследуемого материала. Инкубируют в термостате 30 минут при 37°С и на ФЭК-М определяют оптическую плотность в опытной и контрольной пробирках. По калибровочной кривой устанавливают концентрацию лизоцима в исследуемом материале.