![](/user_photo/2706_HbeT2.jpg)
- •Содержание
- •Введение
- •Глава 1. Обзор литературы
- •1.1. Клетки крови
- •1.2. Экспериментальные методы
- •1.3. Моделирование светорассеяния
- •1.4. Обратная задача светорассеяния
- •Глава 2. Метод дискретных диполей
- •2.1. Обзор МДД
- •2.1.1. Введение
- •2.1.2. Общая формулировка
- •2.1.3. Разновидности МДД
- •2.1.3.1. Теоретические основы МДД
- •2.1.3.2. Точность МДД вычислений
- •2.1.3.3. МДД для кластеров шаров
- •2.1.3.4. Модификации и расширения МДД
- •2.1.4. Численные соображения
- •2.1.4.1. Прямые и итерационные методы
- •2.1.4.2. Разложение по порядкам рассеяния
- •2.1.4.3. Блочно-топлицева структура
- •2.1.4.4. Быстрое преобразование Фурье
- •2.1.4.5. Быстрый метод мультиполей
- •2.1.4.6. Усреднение по ориентации и повторные вычисления
- •2.1.5. Сравнение МДД с другими методами
- •2.1.6. Заключительные замечания
- •2.2. Сходимость МДД
- •2.2.1. Введение
- •2.2.2. Теоретический анализ
- •2.2.2.1. Дополнительные определения
- •2.2.2.2. Анализ ошибок
- •2.2.2.3. Ошибки формы
- •2.2.2.4. Различные формулировки МДД
- •2.2.3. Численное моделирование
- •2.2.4. Обсуждение
- •2.2.5. Выводы
- •2.3. Методика экстраполяции для улучшения точности МДД
- •2.3.1. Введение
- •2.3.2. Экстраполяция
- •2.3.3. Численное моделирование
- •2.3.4. Обсуждение
- •2.3.5. Выводы
- •2.4. Текущие возможности МДД для очень больших частиц
- •2.4.1. Введение
- •2.4.2. Компьютерная программа ADDA
- •2.4.3. Численное моделирование
- •2.4.3.1. Параметры моделирования
- •2.4.3.2. Результаты
- •2.4.4. Обсуждение
- •2.4.5. Выводы
- •2.5. Сравнение компьютерных программ на основе МДД
- •2.5.1. Введение
- •2.5.2. Программы МДД
- •2.5.2.1. SIRRI
- •2.5.2.2. DDSCAT
- •2.5.2.4. ADDA
- •2.5.3. Сравнение программ
- •2.5.3.1. Формы объектов и параметры
- •2.5.3.2. Точные методы
- •2.5.3.3. Точность
- •2.5.3.4. Скорость
- •2.5.4. Обсуждение
- •2.6. Сравнение МДД с методом конечных разностей во временной области
- •2.6.1. Введение
- •2.6.2. Параметры моделирования
- •2.6.3. Результаты для шаров
- •2.6.4. Пример применения к биологическим клеткам
- •2.6.5. Выводы
- •Глава 3. Эритроциты
- •3.1. Введение в эритроциты
- •3.1.1. Морфология
- •3.1.2. Светорассеяние эритроцитами
- •3.2. Решение обратной задачи светорассеяния для эритроцитов, используя простую форму и постоянный показатель преломления
- •3.2.1. Методология моделирования
- •3.2.2. Экспериментальный метод и процедура обращения
- •3.2.3. Эффект формы и ориентации
- •3.2.4. Характеризация эритроцитов
- •3.2.5. Приближённые формы
- •3.2.6. Выводы
- •3.3. Характеризация морфологии нативных эритроцитов с помощью сканирующего проточного цитометра
- •3.3.1. Расширенная модель формы эритроцита
- •3.3.2. Методология моделирования
- •3.3.3. Экспериментальный метод и процедура обращения
- •3.3.4. Результаты и обсуждение
- •3.3.5. Эмпирическая процедура определения диаметра эритроцитов
- •3.3.6. Выводы
- •Глава 4. Гранулоциты
- •4.1. Введение в гранулоциты
- •4.1.1. Нейтрофилы
- •4.1.2. Эозинофилы
- •4.1.3. Базофилы
- •4.1.4. Оптическая характеризация гранулоцитов
- •4.2. Теоретическое исследование светорассеяния простой моделью гранулоцита – зернистым шаром
- •4.2.1. Введение
- •4.2.2. Простая модель гранулоцита
- •4.2.3. Ортогональное светорассеяние
- •4.2.4. Результаты и обсуждение
- •4.2.5. Выводы
- •4.3. Экспериментальное исследование нейтрофилов сканирующим проточным цитометром
- •4.3.1. Экспериментальная процедура
- •4.3.2. Дополнительное МДД моделирование
- •4.3.3. Результаты и обсуждение
- •4.3.4. Выводы
- •Заключение
- •Развитие метода дискретных диполей
- •Характеризация эритроцитов с помощью сканирующего проточного цитометра
- •Теоретическое и экспериментальное исследование гранулоцитов
- •Основные результаты
- •Литература
- •Приложение
- •A1. Описание сокращений и символов
- •A2. Свойства симметрии матрицы Мюллера
- •A3. Расчёт бокового рассеяния зернистым шаром в рамках приближения Релея-Дебая-Ганса
- •A4. Расчёт деполяризованного бокового рассеяния зернистым шаром в рамках второго борновского приближения
![](/html/2706/378/html_C66808HEfC.bJo_/htmlconvd-kbmS6x148x1.jpg)
|
800 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
700 |
|
|
|
|
теория |
|
|
|
|
|
|
V = 92 мкм3 |
|
|||||
) |
|
|
|
|
|
эксперимент |
|
|
|
|
|
D = 6.33 мкм |
|
||||||
)I(θ |
600 |
|
|
|
|
V = 110 мкм3 |
|
|
|
|
|
β = 90° |
|
|
|||||
. w(θ |
500 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||
|
|
|
|
D = 7.6 мкм |
|
|
|
|
|
χ |
2 |
= 31 |
|
|
|||||
интен |
|
|
|
|
|
β = 90° |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||
400 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Модиф. |
300 |
|
|
|
|
χ2=28 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
200 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
100 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
700 |
|
|
|
|
V = 92 мкм3 |
|
|
|
|
|
V = 110 мкм3 |
|
||||||
(θ ) |
|
|
|
|
|
D = 6.75 мкм |
|
|
|
|
|
D = 6.75 мкм |
|
||||||
600 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
β = 80° |
|
|
|||||||
|
|
|
|
β = 90° |
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||
)I |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||
. w(θ |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||
500 |
|
|
|
|
χ |
2 |
= 33 |
|
|
|
|
|
|
χ2 = 36 |
|
|
|||
интен |
400 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Модиф. |
300 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
200 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
100 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
700 |
|
|
|
|
V = 100 мкм3 |
|
|
|
|
|
V = 100 мкм3 |
|
||||||
) |
|
|
|
|
|
D = 8.28 мкм |
|
|
|
|
|
D = 6.84 мкм |
|
||||||
)I(θ |
600 |
|
|
|
|
β = 90° |
|
|
|
|
|
|
β = 80° |
|
|
||||
. w(θ |
500 |
|
|
|
|
χ2 = 30 |
|
|
|
|
|
|
χ2 = 30 |
|
|
||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||
интен |
400 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Модиф. |
300 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
200 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
100 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
010 |
15 |
20 |
25 |
30 |
35 |
|
40 |
45 |
15 |
20 |
25 |
30 |
35 |
40 |
45 |
50 |
||
|
|
|
Угол рассеяния θ, градусы |
|
|
|
|
Угол рассеяния θ, градусы |
|
|
|
|
|
||||||
Рис. 38. Экспериментальные и теоретические модифицированные индикатрисы зрелых |
|||||||||||||||||||
эритроцитов. Также приведены χ 2 расстояния. |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
3.2.4. Характеризация эритроцитов
Практически невозможно использовать МДД для подгонки экспериментальных индикатрис, ввиду большого времени вычислений даже для современной программы и аппаратных средств (см. подраздел 2.4.2). В качестве подхода к решению обратной задачи светорассеяния мы вычислили индикатрисы нескольких двояковогнутых дисков с разными диаметрами и объёмами, представленными в таблице 13, создав тем самым малую базу данных. В ячейках таблицы указаны значения η для соответствующих диаметра и объёма, а прочерк означает, что для этих параметров вычисления не проводились. Для каждой пары диаметра и объёма вычислялись четыре индикатрисы
148
![](/html/2706/378/html_C66808HEfC.bJo_/htmlconvd-kbmS6x149x1.jpg)
Таблица 13. Параметры эритроцитов для предварительных вычислений.a
D, мкм |
|
|
V, мкм3 |
|
|
86 |
92 |
100 |
105 |
110 |
|
6.08 |
0.638 |
– |
– |
– |
– |
6.33 |
0.565 |
0.605 |
– |
– |
– |
6.51 |
– |
0.556 |
0.604 |
– |
0.665 |
6.75 |
0.466 |
0.499 |
0.542 |
0.569 |
0.596 |
6.84 |
– |
– |
0.521 |
– |
0.573 |
7.01 |
– |
– |
0.484 |
– |
0.532 |
7.60 |
0.327 |
0.349 |
0.380 |
0.399 |
0.418 |
8.28 |
– |
– |
0.294 |
0.418 |
0.323 |
a Приведены отношения толщины к диаметру, прочерки означают, что вычисления не проводились.
Количество
250
200
150
100
50
0
60 |
70 |
80 |
90 |
|
Угол ориентации β, градусы |
|
Рис. 39. Распределение зрелых эритроцитов по углу ориентации, полученное χ2 методом.
для β = 60°, 70°, 80° и 90° – всего было вычислено 92 индикатрисы. Эти теоретические индикатрисы использовались для характеризации эритроцитов χ2 методом, как описано в подразделе 3.2.2.
Несколько представительных примеров результатов χ2 метода представлены на рис. 38 – видно хорошее согласие между теоретическими и экспериментальными индикатрисами. Средняя интенсивность (по всему диапазону углов) измеренных индикатрис соответствует теоретическим индикатрисам для значений β равных 70° и
90° [рис. 36(б)], и превосходит среднюю интенсивность для меньших β. Используя все экспериментальные индикатрисы, для которых значение χ2 было меньше заданного уровня (примерно 10% всех экспериментальных индикатрис), построено распределение зрелых эритроцитов по углу ориентации, показанное на рис. 39. Можно заключить, что ориентация эритроцитов в капилляре СПЦ близка к перпендикулярной (β = 90°), что согласуется с предыдущими результатами [225]. При этом рис. 39 даёт оценку отклонения от этой предпочтительной ориентации.
149
![](/html/2706/378/html_C66808HEfC.bJo_/htmlconvd-kbmS6x150x1.jpg)
|
800 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
700 |
|
|
|
|
|
|
(а) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
) |
600 |
|
|
|
|
|
|
|
|
)I(θ |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
w(θ |
500 |
|
|
|
|
|
|
|
|
. |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
интен |
400 |
|
|
|
|
|
эритроцит |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||
Модиф. |
300 |
|
|
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
диск |
|
|
||
200 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
100 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
0 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
350 |
|
|
|
|
|
|
(б) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
)I(θ ) |
300 |
|
|
|
|
|
|
|
|
250 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
w(θ |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
интен. |
200 |
|
|
|
|
|
|
|
|
150 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
. |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Модиф |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
100 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
50 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
0 |
15 |
20 |
25 |
30 |
35 |
40 |
45 |
50 |
|
10 |
||||||||
|
|
|
|
Угол рассеяния θ, градусы |
|
|
|
Рис. 40. Модифицированные индикатрисы двояковогнутого диска и шарового диска с тем же диаметром и объёмом: (а) перпендикулярная и (б) параллельная ориентация.
3.2.5. Приближённые формы
Существует несколько приближений формы нативных эритроцитов. Кроме совсем простых, наиболее популярными являются шаровой диск и сплюснутый сфероид. Их преимуществом по сравнению с реалистичными формами является то, что их можно быстро моделировать с помощью МРГУ. Мы сравнили индикатрисы эритроцита с
D = 7.60 мкм и η = 0.380 (V = 100 мкм3) с приближёнными формами для того же диаметра и объёма, рассматривая две ориентации оси эритроцита: перпендикулярную
(β = 90°) и параллельную (β = 0°) падающему излучению. Результаты для шарового диска показаны на рис. 40, где видно, что он является удовлетворительной моделью только в диапазоне от 10° до 15°.
Результаты сравнения для сплюснутого сфероида (рис. 41) показывают хорошее согласие с реальной формой, но только для перпендикулярной ориентации. Это согласуется с выводами на основе метода граничных элементов [226] и МДИ [228]. Однако обоснованность замены эритроцита сфероидом требует более обширной
150
![](/html/2706/378/html_C66808HEfC.bJo_/htmlconvd-kbmS6x151x1.jpg)
|
800 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
700 |
|
|
|
|
эритроцит |
|
(а) |
|
|
|
|
|
|
сфероид |
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
||
) |
600 |
|
|
|
|
|
|
|
|
)I(θ |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
w(θ |
500 |
|
|
|
|
|
|
|
|
. |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
интен |
400 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Модиф. |
300 |
|
|
|
|
|
|
|
|
200 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
100 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
0 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
(б) |
|
250 |
|
|
|
|
|
|
|
|
) |
200 |
|
|
|
|
|
|
|
|
)I(θ |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
. w(θ |
150 |
|
|
|
|
|
|
|
|
интен |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Модиф. |
100 |
|
|
|
|
|
|
|
|
50 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
0 |
15 |
20 |
25 |
30 |
35 |
40 |
45 |
50 |
|
10 |
||||||||
|
|
|
|
Угол рассеяния θ, градусы |
|
|
|
Рис. 41. Модифицированные индикатрисы двояковогнутого диска и сплюснутого сфероида с тем же диаметром и объёмом: (а) перпендикулярная и (б) параллельная ориентация.
проверки для различных размеров эритроцита в контексте конкретной задачи светорассеяния.
3.2.6. Выводы
Моделирование светорассеяния зрелыми эритроцитами показало, что индикатриса чувствительна к форме эритроцита, поэтому в общем случае требуется использовать МДД (или другой метод способный работать с реалистичной формой) для изучения влияния характеристик эритроцита на его индикатрису. Однако при ориентации оси эритроцита перпендикулярно падающему излучению он может быть заменён на сплюснутый сфероид, светорассеяние которым можно моделировать с помощью метода расширенных граничных условий (МРГУ). К счастью, гидродинамическая система сканирующего проточного цитометра (СПЦ) доставляет эритроциты в измерительную зону именно в этой ориентации. Это может сильно облегчить решение обратной задачи, например, с помощью параметризации или нейронной сети, так как МРГУ намного быстрее чем МДД. Тем не менее точность подобных алгоритмов необходимо
151
проверять, используя реалистичные индикатрисы, вычисленные, например, с помощью МДД.
Подход на основе базы данных не упрощает форму эритроцита и является перспективным для его точной характеризации. Но малая база данных, построенная в данном разделе, только демонстрирует идею и не может использоваться для построения распределений эритроцитов в измеряемой на СПЦ пробе по диаметру, объёму и другим параметрам. Для того чтобы иметь возможность строить подобные распределения, необходимо составить намного бóльшую базу данных и отрегулировать
χ2 метод, а модель эритроцита должна включать, по крайней мере, вариацию концентрации гемоглобина. Все эти задачи рассматриваются в разделе 3.3.
152