лекции / ГЛАВА42

3

ГЛАВА IY

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ КОРРЕКЦИЯ НАРУШЕНИЙ СИСТЕМЫ ГЕМОСТАЗА ДАЛАРГИНОМ И МИЛДРОНАТОМ

4.1 Влияние различных доз даларгина, милдроната и их сочетания

на показатели свертывания крови, содержания продуктов

ПОЛ в органах системы гемостаза у интактных животных

Разработка патогенетически обоснованных принципов профилактики и терапии нарушений, вызываемых длительной геморрагической гипотензией, относится, по мнению академика В.А.Неговского, [ ] к числу актуальных проблем теоретической и практической медицины.

В целях сравнительной оценки возможности фармакологической коррекции нарушений системы гемостаза в постреанимационном периоде использовали профилактическое и лечебное введение аналога опиоидных пепетидов даларгина и аналога  -бутиробетана-милдроната. Исследовали влияние трехкратного раздельного введения даларгина в дозе 100 мкг/кг и милдроната в дозе 100 мг/кг за 48, 24 и 1 ч до опыта, трехкратного введения комбинации препаратов (даларгин+милдронат) соответственно в дозе 100 мкг/кг и 100 мг/кг за 48, 24 и 1 ч до опыта и однократного введения комбинации препаратов в тех же дозах за 1 ч до опыта на показатели агрегатного состояния крови, содержание первичных продуктов ПОЛ в биомембранах органов и тканей системы гемостаза у интактных животных.

Рис.12. Влияние даларгина и милдроната на ТЭГ крови крыс.

А - ТЭГ крови контрольных крыс; Б - ТЭГ крови крыс, получавших милдронат в дозе 100 мг/кг за 48, 24 и 1 ч до опыта; В - ТЭГ крови крыс, получавших даларгин в дозе 100 мкг/кг за 48, 24 и 1 ч до опыта; Г - ТЭГ крови крыс, получавших даларгин + милдронат в дозе соответственно 100 мкг/кг и 100 мг/кг за 48, 24 и 1 ч до опыта; Д - ТЭГ крови крыс, получавших даларгин + милдронат в дозе соответственно 100 мкг/кг и 100 мг/кг за 1 ч до опыта.

Рис.13. Влияние даларгина и милдроната на ЭлКГ крови крыс.

А - ЭлКГ крови контрольных крыс, Б - ЭлКГ крови крыс, получавших милдронат в дозе 100 мг/кг за 48, 24 и 1 ч до опыта, В - ЭлКГ крови крыс, получавших даларгин в дозе 100 мкг/кг за 48, 24 и 1 ч до опыта, Г - ЭлКГ крови крыс, получавших даларгин + милдронат в дозе соответственно 100 мкг/кг и 100 мг/кг за 48, 24 и 1 ч до опыта; Д - ЭлКГ крови крыс, получавших даларгин + милдронат в дозе соответственно 100 мкг/кг и 100 мг/кг за 1 ч до опыта.

Таблица 10

Влияние милдроната, даларгина и комбинации этих препаратов на показатели системы

гемостаза интактных крыс (Мm)

Показатель	Контроль	С е р и и о п ы т о в
		М	Д	ЗДМ	ДМ
Время реакции (Р), мин	3,00,2	3,30,24	4,30,12***	5,50,1***	4,50,23***
Время образования сгустка (К), мин	2,20,09	3,00,11***	4,80,14***	10,00,6***	3,50,15***
Константа свертывания (t), мин	18,70,4	21,90,5***	26,20,9***	23,20,8***	27,91,5***
Константа тотального свернтывания (Т), мин	27,01,5	28,21,5	35,32,0**	38,82,0***	35,92,7**
Максимальная амплитуда (МА), мм	5,50,07	5,60,10**	4,70,11***	4,10,03***	5,40,16
Начало свертывания (Т1), с	64,81,4	60,32,1	150,15,7***	190,32,5***	150,55,1***
Конец свертывания (Т2), с	248,64,2	261,310,7	462,511,4***	480,210,7***	441,79,4***
Продолжительность свертывания (Т), с	191,27,40	201,010,1	312,410,2***	289,97,7***	291,210,7***
Интенсивность первичной агрегации (А1), ом	65,11,1	65,00,4	65,20,4	64,90,7	64,20,7
Интенсивность вторичной волны агрегации (А2), ом	1,8+0,07	1,9+0,02	2,0+0,02*	1,9+0,02	1,7+0,05
Интенсивность максимальной агрегации (А3), ом	65,9+0,3	66,1+0,4	66,3+0,3	65,5+0,1	65,1+1,0
Интенсивность дезагрегации (А4), ом	1,0+0,09	0,8+00,1*	0,9+0,02	1,0+0,08	0,8+0,02
Время начала дезагрегации (Т1 ), с	62,0+1,2	64,3+0,9	63,3+1,1	61,9+0,8	62,2+1,0
Время начала вторичной агрегации (Т2 ), с	123,0+2,5	119,1+1,9	127,8+2,0	125,0+1,0	125,5+2,2
pH крови	7,52+0,016	7,50+0,013	7,51+0,011	7,53+0,019	7,53+0,014
Количество тромбоцитов  109/л	354,15,8	358,34,1	350,07,6	340,66,8	351,16,1
Время рекальцификации плазмы, мин	180,22,9	190,410,6	215,95,6***	304,29,1***	205,04,3***
Толерантность плазмы к гепарину, мин	8,60,4	8,80,76	10,90,8**	15,60,8***	11,10,3***
Протромбиновое время, с	24,10,7	24,00,8	28,20,3***	36,50,7***	29,00,8***
Тромбиновое время, с	20,10,3	20,00,8	23,10,9***	24,20,7***	23,70,5***
Концентрация фибриногена, г/л	1,80,04	1,800,57	1,80,71	1,70,63	1,840,9
Фибриноген В, балл		-	-	-	-
Фибринолитическая активность, мин	110,03,1	111,25,0	139,16,8***	142,29,2**	140,08,4**

Примечание. М – серия опытов, где животные получили милдронат в дозе 100 мг/кг за 48, 24 и 1ч до опыта;

Д – серия опытов, в которой животные получили даларгин в дозе 100 мкг/кг за 48, 24 и 1 ч до опыта;

ЗДМ – серия опытов, где животные получили даларгин + милдронат в дозе соответственно 100 мкг/кг и 100 мг/кг за

48, 24 и 1 ч до опыта, ДМ – серия опытов, где животные получили даларгин + милдронат в дозе соответственно 100 мкг/кг и 100 мг/кг за 1 ч

до опыта.

Статистически значимая связь по отношению к контролю: * - Р<0,05, ** - Р<0,01, *** -Р<0,001.

Трехкратное введение милдроната не оказало влияния на коагуляционные тесты (рис.12, и 13, табл.10): форма ТЭГ, ЭлКГ и основные

показатели агрегатного состояния крови близки к контрольным значениям. В других сериях, где троекратно вводился даларгин или его комбинация с милдронатом (независимо от того, однократно или трехкратно), регистрировался отчетливо выраженный гипокоагуляционный тип ТЭГ и ЭлКГ, особенно после трехкратного введения комбинации этих препаратов.

Общая коагулирующая активность в первом случае (Д) характеризуется значительным (в 1,4 раза) замедлением свертывания крови, во втором случае (3ДМ) - в 1,3 раза, в третьем (ДМ) - в 1,3 раза. Во всех случаях отмечается замедление времени начала свертывания крови Т₁ ЭлКГ (на 131,6%, 193,7% и 132,3% от контрольного значения), что отражает торможение процессов тромбопластино - и тромбинообразования (табл.10). Изменение показателей ТЭГ сходно с изменением показателей ЭлКГ. На клеточный гемостаз (количество тромбоцитов, интенсивность их агрегации и дезагрегации) исследуемые препараты влияния не оказывают.

Для I фазы гемостаза характерно увеличение времени рекальцификации плазмы и понижение толерантности плазмы к гепарину, что особенно выражено при трехкратном предварительном введении комбинации препаратов.

Во II фазе гемостаза наблюдается снижение протромбинового индекса во всех случаях (исключая милдронат). Так, при трехкратном введении даларгина протромбиновый индекс снижается на 14,5%, при трехкратном введении комбинации препаратов (даларгин + милдронат) - на 34,0% и однократном введении комбинации препаратов (даларгин + милдронат) - на 16,9%. Антитромбиновая активность соответственно увеличивается на 13,0%, на 16,9% и на 15,2%.

Для III фазы гемостаза характерно умеренное торможение фибринолитической активности во всех сериях опытов (исключая милдронат) и отрицательной пробой на продукты паракоагуляции. Количество фибриногена близко к контрольным значениям.

Было исследовано влияние даларгина, милдроната и их сочетания на содержание гидроперекисей липидов в органах и тканях системы гемостаза. При этом было установлено (табл.11), что предварительное трехкратное введение милдроната не оказывает достоверно значимого влияния на содержание гидроперекисей липидов. Отчетливо уменьшение уровня концентрации гидроперекисей наблюдалось при предварительном трехкратном введении даларгина, трехкратном и однократном введении комбинации препаратов . Причем, наиболее существенное снижение уровня гидроперекисей в случае трехкратного введения комбинации этих препаратов: в эритроцитах - в 1,38; в сердце - в 1,35; в головном мозге - в 1,37; в печени - в 1,36 и в легких - в 1,43 раза.

Предварительное однократное введение комбинации препаратов (даларгин + милдронат) оказывает более умеренное в сравнении с трехкратным предварительным введением этой же комбинации препаратов, снижение уровня содержания первичных продуктов ПОЛ в объектах исследования. Содержание гидроперекисей липидов в этом случае уменьшается: в эритроцитах - в 1,22; в сердце - в 1,28; в головном мозге - в 1,3; в печени - в 1,22 и в легких - в 1,39 раза.

Таким образом, в экспериментах на интактных животных установлено, что даларгин в дозе 100 мкг/кг как самостоятельно, так и в комбинации с милдронатом обладает гипокоагуляционным и фибринолитическим действием. Особенно это выражено при предварительном введении за 48, 24 и 1 ч до опыта, чем за 1 ч до опыта. Установлено также, что у животных, получавших даларгин, отмечается падение уровня содержания продуктов ПОЛ в исследуемых органах и системах

Таблица 11

Влияние даларгина, милдроната и их комбинации на содержание гидроперекисей липидов (ммоль/кг) в органах и тканях системы гемостаза интактных крыс (Мm)

Объект	Контроль	Серии опытов
исследования		М	Д	3ДМ	ДМ
Эритроциты	0,720,02	0,700,05	0,610,02**	0,520,01***	0,590,02***
Сердце	5,40,27	5,60,18	4,30,28*	4,00,21**	4,20,43*
Мозг	5,20,17	5,00,23	4,10,1***	3,80,13***	4,00,21***
Печень	7,10,19	6,50,12	6,00,21**	5,20,24***	5,80,18***
Легкие	4,30,21	3,90,21	3,40,23*	3,00,19**	3,10,31**

Примечание. М – серия опытов, где животные получили милдронат в дозе 100 мг/кг за 48, 24 и 1 ч до опыта, Д – серия опытов, где животные получили даларгин в дозе 100 мкг/кг за 48, 24 и 1 ч до опыта, 3ДМ – серия опытов, где животные получили даларгин и милдронат в дозе соответственно 100 мкг/кг и 100 мг/кг за 48, 24 и 1 ч до опыта,

ДМ – серия опытов, где животные получили даларгин и милдронат в дозе соответственно 100 мкг/кг и 100 мг/кг за 1 ч до опыта.

Статистически значимая связь по отношению к контролю: * - Р<0,05; ** - Р<0,01; *** - Р<0,001.

до значений ниже их физиологического уровня. Изучение влияния даларгина на гемокоагуляцию и интенсивность процессов ПОЛ позволяет предполагать, что ослабление свободнорадикального окисления липидов в биологических мембранах органов и тканей целостного организма под влиянием этого препарата приводит к снижению гемостатического потенциала, что делает патогенетически обоснованной фармакокоррекцию с помощью этих препаратов постреанимационных коагулопатий.

4.2. Общая характеристика постреанимационого периода

у крыс, получавших даларгин и милдронат с профи-

лактической и лечебной целью

Как видно из табл.12,13, под влиянием трехкратного профилактического введения препаратов раньше возобновлялись сердечные сокращения, значительно раньше появлялся первый вдох, быстрее восстанавливались роговичные рефлексы и самостоятельные движения. Оживляемость крыс возросла с 56,8% до 73,6% и более чем в 2 раза снизилась летальность в раннем постреанимационном периоде. Фибрилляция желудочков сердца у “защищенных” животных возникала во время реанимации в 3,0 раза реже, а частота фибрилляции в раннем периоде оживления сократилась в 2,2 раза.

Из 254 подопытных крыс во время клинической смерти и в различные сроки после реанимации погибло 67 животное (табл.13), что в целом составило 26,4% от общего числа животных (без препаратов - 43,3%).

Гибель животных в первые сутки в сравнении с группой "незащищенных" животных снизилось на 20,8%, что особенно видно в раннем периоде оживления (на 13,1%).

При оценке лечебного эффекта даларгина и милдроната, установлено, что введение данных препаратов сразу же после появления сердечных сокращений, летальность животных в первые сутки уменьшалась, но не столь значительно, как при профилактических исследований комбинации этих препаратов (на 8,3%), особенно в раннем периоде оживления (на 0,8%). Все это свидетельствует о том, что предпосылки для развития необратимых повреждений в организме закладываются уже во время умирания и, особенно, клинической смерти, достигают своего максимального выражения в раннем постреанимационном периоде, порой несовместимого с жизнью, и оживленные животные погибают.

Таблица 12

Влияние предварительно вводимых даларгина и милдроната на

сроки восстановления жизненноважных функций организма (Мm)

	Серии опытов
Показатель	Реанимация (I)	Даларгин + милдронат+ реанимация (II)
Сердечные сокращения, с	142,02,6	71,90,3*
Дыхание, мин	13,50,1	9,10,2*
Роговичный рефлекс, мин	34,10,2	27,90,1*
Самостоятельные движения, ч	5,10,1	3,80,01*

Примечание. Статистически значимая связь между I и II группами обозначена: * - Р<0,001.

Таблица 13

Влияние профилактического (А) и лечебного (Б) введения комбинации препаратов (даларгин + милдронат) на летальность крыс

Группы	Всего погибло	Сроки гибели животных
животных	(%)	Во время кл.смерти	Во время реанимации	0,5-1,5 ч	1,5-6 ч	6 - 24 ч	24 - 72 ч
А. Всего:	254 (100%)
оживленные	187 (73,6%)
погибшие	67 (26,4%)	10 (14,9%)	19 (28,4%)	4 (6,0%)	5 (7,5%)	12 (17,9%)	17 (25,3%)
Б. Всего:	175 (100%)
оживленные	97 (55,4%)
погибшие	78 (44,6%)	11 (14,2%)	31 (39,7%)	6 (7,7%)	5 (6,4%)	15 (19,2%)	10 (12,8%)
В.Всего:	308 (100%)
оживленные	175 (56,8%)
погибшие	133 (43,2%)	16 (12,0%)	58 (43,6%)	9 (6,8%)	9 (6,8%)	35 (26,3%)	6 4,5%)

Примечание. В - группа подопытных животных, не получавших препараты.

Таким образом, даларгин и милдронат в комбинации способствуют более раннему восстановлению жизненно важных функций организма, более благоприятному течению раннего постреанимационного периода и снижают общую летальность, особенно если используются предварительно, т.е. до клинической смерти.

4.3. Влияние даларгина и милдроната на показатели

коагулограммы, содержание продуктов ПОЛ в

органах системы гемостаза

В предыдущих главах нами отмечено, что клиническая смерть и реанимация вызывают значительные нарушения гемостаза в постреанимационном периоде. В этой связи нами была предпринята попытка уменьшаить эти нарушения с помощью двух препаратов (даларгина и милдроната), обладающих в сочетании гипокоагуляционным и фибринолитическим действием. Оба препарта вводили одновременно, но в одном случае с профилактической, а в другом - с лечебной целью.

Как видно на рис.14 и 15, форма ТЭГ и ЭлКГ животных, получавших даларгин и милдронат до клинической смерти, существенно не отличается от таковых у интактных животных. Лишь в конце смерти (В) отмечается незначительная гиперкоагуляция. В последующем на протяжении 3 сут (3) прослеживается постепенный переход к нормальным формам ТЭГ и ЭлКГ, что отчетливо заметно, начиная с 6-го ч после оживления.

Анализ данных агрегатометрии (рис.16, табл.14) свидетельствует о том, что профилактическое введение этих препаратов значительно снижает

Рис.14.Влияние профилактического введения комбинации препаратов (даларгин+милдронат) на изменение формы ТЭГ крови крыс во время клинической смерти и в постреанимационном периоде.

А - контроль; Б - контроль + даларгин + милдронат; В -клиническая смерть; Г-3 - соответственно 30 мин, 3 и 6 ч, 1 и 3 сут после оживления.

Рис.15. Влияние профилактического введения комбинации препаратов (даларгин + милдронат) на изменение формы ЭлКГ крови крыс во время клинической смерти и в постреанимационном периоде.