НПВП

Следует сказать, что наличие многоуровневых перекрестных (“cross-talk”) взаимодействий между CОХ-2-зависимым внутриклеточным сигнальным каскадом и каскадом, активируемым рецепторами полипептидных ростовых факторов (EGFR), при образовании многих видов опухолей (рака толстой кишки, рака легких, рака головы и шеи и др.) в настоящее время можно считать практически доказанным (56) (рис. 24). Это позволяет говорить о целесообразности и эффективности комбинированного использования СОХ-2-ингибиторов и EGFR-тирозинкиназных ингибиторов в широкой онкохимиопрофилактике и онкотерапии (65).

Экспериментально обнаруженная способность образующихся под действием СОХ-2 простагландинов повышать активность ароматазы послужила основанием для проведения клинических испытаний по совместному использованию в качестве терапевтических средств при лечении РМЖ селективных СОХ-2-ингибиторов и широко применяемых в клинике ингибиторов ароматазы. В настоящее время в Канаде под эгидой Национального Института рака проходит III фаза сравнительного клинического исследования по комбинированному применению СОХ-2-ингибитора – Целекоксиба – и ингибитора ароматазы – Экземестана– у постменопаузальных женщин с повышенным риском развития РМЖ (3).

Несколько лет тому назад были получены доказательства того, что широко применяемые в онкологии лекарственные средства, механизм действия которых основан на нарушении структуры и функционирования микротрубочек (препараты группы Таксола), стимулируют СОХ-2-транскрипцию (116). Понятно, что данное свойство может приводить к снижению общей эффективности указанных препаратов. Поэтому в подобных случаях следует считать целесообразным совместное назначение препаратов группы Таксола и селективных ингибиторов СОХ-2.

Всего в настоящее время проводится более 20 различных клинических исследований по изучению возможного использования в качестве профилактических и терапевтических противоопухолевых средств СОХ-2-ингибиторов в комбинации с другими химиотерапевтическими средствами (1).

 И в заключение еще об одном очень важном моменте. В последнее время все большую популярность (особенно в качестве потенциальных противоопухолевых химиопрофилактических средств) приобретают природные ингибиторы СОХ-2. К таким веществам причисляют ретиноиды, тритерпеноиды, антиоксиданты и резорцины (15, 74, 75, 77, 115, 120).

Недавно было показано, что флавоноид эпигаллокатехин-3-галлат (EGCG) – вещество природного происхождения, один из активных действующих компонентов, входящих в состав препарата Индигал^®, также обладает избирательной СОХ-2-ингибирующей активностью в отношении трансформированных эпителиальных клеток различного типа, в том числе клеток аденокарциномы простаты (50, 59).

На эпителиальных опухолевых клетках различного происхождения удалось показать, что EGCG в физиологических концентрациях эффективно ингибирует экспрессию COX-2, стимулируемую под действием митогенных форболовых эфиров (рис. 8).При этом одновременно наблюдалось ингибирование активности вышестоящих в данном сигнальном каскаде митоген-активируемых протеинкиназ.

Интерес к природным СОХ-2-ингибиторам растет в последнее время еще и вот почему. Дело в том, что, как мы уже отмечали, синтетические селективные СОХ-2-ингибиторы, несмотря на повышенную избирательность воздействия и, как следствие, существенное ослабление основных побочных эффектов, характерных для неселективных NSAIDs, все-таки сохраняют некоторые токсические свойства (в частности отрицательное влияние на сердечно-сосудистую систему (10)), особенно при длительном назначении высоких доз препаратов, что ограничивает их применение в клинике. Однако совместное использование синтетических СОХ-2-ингибиторов с нетоксичными веществами, обладающими комплементарным механизмом действия (природными ингибиторами СОХ-2), позволяет снизить дозировку первых и ослабить их отрицательное побочное воздействие без снижения общей терапевтической эффективности. К тому же при использовании одновременно нескольких препаратов направленного действия (“таргетных” препаратов) достигается эффект мультитаргетности (или мультифокального таргетного воздействия), позволяющий максимально эффективно блокировать опухолевую прогрессию.

Яркой иллюстрацией правомерности подобных рассуждений является недавно опубликованная статья (1). Ее авторы на модели рака простаты в условиях invitroи invivoпровели сравнительное изучение противоопухолевой активности, опосредованной ингибированием СОХ-2, при комплексном использовании EGCG и известных селективных СОХ-2-ингибиторов (Целекоксиба и NS-398), а также каждого из веществ в отдельности. Эта блестящая работа заслуживает того, чтобы остановиться на ней подробнее, что мы и сделаем ниже.

 

Комбинированный ингибирующий эффект EGCG и селективных ингибиторов СОХ-2 на модели рака простатыinvitroи invivo

В экспериментах invitroавторы процитированной выше работы (1) использовали опухолевые простатические клетки трех линий: гормон-чувствительные (LNCaP и CWR22Ru1) и гормон-нечувствительные (PC-3). Известно, что при постановке диагноза “рак простаты” обнаруженная опухоль, как правило, представляет собой сообщество андроген-зависимых и андроген-независимых опухолевых клеток, и идеальный противоопухолевый агент должен воздействовать на оба клеточных типа.

Обработка в течение 48 час указанных клеточных линий по отдельности селективным СОХ-2-ингибитором NS-398 (10 мкМ/л) и катехином EGCG (10-40 мкМ/л), как и следовало ожидать, приводила к дозо-зависимому ингибированию клеточного роста. Однако комбинация EGCG и NS-398 на 15-28% (варьирование для разных клеточных линий) более эффективно подавляла рост опухолевых клеток, что указывает на наличие синергизма при действии данных соединений.

Поскольку и для EGCG, и для ингибиторов СОХ-2 известен проапоптотический эффект, на следующем этапе авторы решили проанализировать возможность синергизма указанных веществ в отношении индукции апоптоза опухолевых клеток. Используя метод флуоресцентной микроскопии, авторы показали, что комбинация EGCG и NS-398 более выраженно индуцировала апоптоз опухолевых простатических клеток, чем каждое из веществ в отдельности. Данный эффект хорошо коррелировал с уровнем экспрессии молекулярных маркеров апоптоза (про- и антиапоптотических белков). Количество проапоптотического белка Bax, повышенное при инкубации опухолевых клеток как с EGCG, так и с NS-398, еще больше возрастало при использовании их комбинации. Та же закономерность, но с обратным знаком, отмечалась для антиапоптотического белка Bcl-2. Cинергизм СОХ-2-опосредованной проапоптотической активности со стороны EGCG и NS-398 выражался также в усилении под действием их комбинации экспрессии ключевых эффекторных белков апоптоза - каспаз 6 и 9, а также поли(ADP)рибозо-полимеразы (PARP).

Еще одним важным результатом, полученным в данной работе в экспериментах invitro, является обнаруженный авторами факт, касающийся СОХ-2-независимой противоопухолевой активности NSAIDs. Выше мы отмечали, что не все противоопухолевые свойства нестероидных противовоспалительных препаратов обусловлены их способностью ингибировать СОХ-2. Некоторые из них опосредованы другими сигнальными механизмами и молекулярными мишенями, в частности ядерным фактором транскрипции NF-kB. В подтверждение данной гипотезы авторам работы удалось показать снижение уровня белков NF-kB и PPARg(peroxisomeproliferatoractivatedreceptorg) в присутствии индивидуальных EGCG и NS-398. При этом, как и в предыдущих случаях, комбинация указанных соединений приводила к усилению наблюдаемого эффекта. 

Забегая вперед, скажем, что аналогичные результаты, касающиеся уровня экспрессии про- и антиапоптотических белков, а также молекулярных маркеров пролиферации, неоангиогенеза и сигнальных каскадов, не зависимых от СОХ-2-активности, были получены авторами данной работы и в экспериментах invivo.

Опыты invivoпроводились на бестимусных мышах, которым были инъецированы андроген-чувствительные клетки рака простаты линии CWR22Rv1. Известно, что в организме животного данная клеточная линия быстро и воспроизводимо формирует опухоль, секретирующую в кровяное русло простат-специфический антиген (PSA). На данной ксенотрансплантатной модели изучался противоопухолевый эффект, оказываемый вводимыми экспериментальным животным СОХ-2-ингибитором Целекоксибом (10 мг/кг, i.p., ежедневно, 5 дней в нед.) и декафеинизированной полифенольной фракцией, экстрагированной из зеленого чая (GTP – greenteapolyphenol) (0,1% в питьевой воде). Данные субстанции вводились животным по отдельности и в комплексе. Было установлено, что если при комбинированном введении Целекоксиба и GTP опухоль размером 1300 мм³образовывалась за 48 дней, то при введении каждой из субстанций в отдельности эти временные промежутки составляли, соответственно, 40 дней (только Целекоксиб) и 36 дней (только GTP). В группе контрольных животных этот параметр составлял 28 дней. С другой стороны, на сроке 28 дней отмечалось 81%-ное ингибирование опухолевого роста при использовании комбинации (Целекоксиб+GTP), в то время как индивидуальные компоненты подавляли рост опухоли, соответственно, на 57% и 42%.

При оценке уровней секретируемого опухолями PSA и инсулиноподобного фактора роста IGF-I (повышенная концентрация в крови IGF-I является следствием повышения уровня PSA) выявленная закономерность синергичного взаимодействия данных компонентов сохранялась. Оказалось, что и Целекоксиб, и GTPсущественно снижали секрецию PSA, однако при использовании их комбинации данный эффект был достоверно выражен в большей степени.

Ранее было установлено, что высокий уровень IGF-I в плазме коррелирует с повышенным риском развития как доброкачественной гиперплазии простаты, так и рака простаты (110). Есть даже точка зрения, что усиление клеточной пролиферации, вызванное фактором IGF-I, является ключевым молекулярным механизмом патогенеза данных заболеваний (27, 63). В обсуждаемой выше работе у животных, получавших комбинацию (Целекоксиб+GTP), уровень в сыворотке крови IGF-Iбыл достоверно ниже, чем для Целекоксиба и GTP в отдельности.

Подводя итог всему вышесказанному, следует еще раз подчеркнуть безусловную важность индуцибельного изофермента – циклооксигеназы-2 – как ключевой белковой мишени, опосредующий сразу несколько молекулярных механизмов при образовании многих видов опухолей, в том числе рака простаты. В этой связи препарат Индигал^®, в состав которого входит эпигаллокатехин-3-галлат, следует рассматривать как безопасное и перспективное средство таргетной терапии, селективно ингибирующее активность СОХ-2. Данный препарат может назначаться для профилактики и лечения гиперпластических, предопухолевых и опухолевых заболеваний предстательной железы индивидуально, а также в комплексе с другими противоопухолевыми средствами - селективными ингибиторами СОХ-2 и средствами стандартной онкотерапии.