Общие свойтсва крови

ОБЩИЕ СВОЙСТВА КРОВИ

Задание:

•в рабочую тетрадь переписать работы с 1 по 8;

•вырезать и вклеить иллюстрации к соответствующим работам;

•перерисовать или вклеить график изменения лимфоцитов и нейтрофилов

свозрастом;

•переписать или вклеить таблицу «классификация клеток крови и их процентное содержание у взрослых»;

•вклеить гемограмму у детей (возрастные нормы).

•рассчитать эритроцитарные индексы

Работа № 1. Определение СОЭ микрометодом Панченкова.

Цель работы: определить СОЭ капиллярной крови. Объект: испытуемый.

Оборудование: стерильная вата, стерильные одноразовые скарификаторы, раствор 70 градусного этилового спирта, планшетка с лунками, 5% раствор цитрата натрия, капилляры Панченкова с грушами, прибор (штатив) Панченкова (рисунок), перчатки резиновые одноразовые.

Ход работы: Все работы с кровью проводят в резиновых перчатках. Обрабатывают место укола (стандартное – 4 палец левой руки) ватным шариком, смоченным 70 градусным этиловым спиртом. Далее, после промокания остатков спирта сухим стерильным ватным шариком, производят прокол кожи одноразовым скарификатором. Первую выступившую каплю крови снимают стерильным ватным шариком, после этого набирают кровь капилляром Панченкова и резиновой грушей выдувают в лунку планшетки. В капилляр Панченкова, предварительно промытый 5% раствором цитрата натрия, набирают этот реактив до метки «Р» и выдувают в пробирку. Кровь из лунки набирают в капилляр дважды до метки «0» и переносят в пробирку с цитратом. Перемешивают. Получается соотношение крови и цитрата 4:1. Набирают эту смесь в капилляр, который помещают в штатив Панченкова строго вертикально, упирая нижний конец в резиновую прокладку. Записывают время. Ровно через 1 час отмечают СОЭ по высоте отстоявшегося слоя плазмы до эритроцитов.

Результаты: нормативные величины: мужчины: 1–10 мм/час, женщины: 2–15 мм/час.

Выводы: сравнивают полученные результаты с нормативными величинами и делают вывод об ускорении, замедлении, или соответствии норме СОЭ.

Работа № 2. Определение гематокритного показателя.

Цель работы: определение объемного процента форменных элементов в исследуемой крови.

Объект: донорская кровь с добавлением гепарина.

Оборудование: капилляры с делениями , центрифуга, перчатки резиновые. Ход работы: кровь набирают в предварительно обработанный гепарином и

высушенный капилляр. Держа его строго гризонтально, закупоривают с двух сторон резинкой и помещают в ротор центрифуги. Центрифугируют 5 минут со скоростью 1500 оборотов 30 мин. По шкале капилляра определяют гематокритную величину в процентах (по столбику эритроцитов).

Результат: нормативные величины гематокриного показателя: мужчины 4048 %, женщины 36-42 %.

Выводы: сравнивают полученные результаты с нормальными величинами.

Работа № 3. Подсчет количества эритроцитов в счетной камере.

Цель работы: определить количество эритроцитов в исследуемой крови. Объект: донорская кровь.

Оборудование: пробирки, мерные микропипетки, дозаторы, счетные камеры Горяева (рисунок), микроскоп, 3,5 % раствор хлорида натрия, перчатки резиновые, смеситель для эритроцитов «красный» меланжер.

Ход работы: в сухую пробирку дозатором отмеривают 4 мл 3,5% раствора хлорида натрия, туда же вносят микропипеткой 20 мкл (0,02 мл) исследуемой крови. Получают разведение крови в 200 раз.

Аналогичное разведение можно получить в специальном смесителе– меланжере набрав кровь до метки 0,5, а 3,5% раствор хлорида натрия до метки 101, после этого тщательно размешав.

Перемешивают и заполняют камеру Горяева, предварительно притерев покровное стекло на нее до радужных кругов. Камера Горяева состоит из двух сеток, разделенных канавками. Сетка Горяева (рисунок) – это 225 больших квадратов, часть из которых разделена

на 16 малых квадратов. Камеру помещают на столик микроскопа, микроскопируют и считают количество эритроцитов в 5 разделенных на малые больших квадратах по

поэтому 4000–это множитель, приводящий результат к объему 1 мкл.

b-степень разведения крови (200 раз) c–число малых квадратов, в которых

считались эритроциты –80 10 6 –количество микролитров в 1

литре

Подставляем известные значения в формулу и получаем:

X=6=a6/л

Полученный результат приводим к форме a12

a=4,8 × 1012/л

Нормальные показатели: мужчины 4,0–5,0 ×1012, женщины 3,7–4,7×1012 Вывод: сравнивают полученные показатели с нормативные и делают вывод о

соответствии количества эритроцитов норме.

Работа № 4. Подсчет количества лейкоцитов в счетной камере.

Цель работы: определить количество лейкоцитов в донорской крови. Объект: донорская кровь.

Оборудование: перчатки резиновые, микропипетки, дозатор, счетная камера Горяева, микроскоп, 3% раствор уксусной кислоты, подкрашенной метиленовым синим.

Ход работы: отмеряют в пробирку 0,4 мкл 3% раствора уксусной кислоты, туда же микропипеткой добавляют 0,02 мл донорской крови. Получают разведение в

20 раз.

Аналогичное разведение можно получить в специальном смесителе– меланжере, набрав кровь до метки 0,5, а 3 % раствор уксусной кислоты, подкрашенной метиленовым синим, до метки 11, после этого тщательно размешав.

Подготовленную счетную камеру заполняют разведенной кровью и производят подсчет лейкоцитов под микроскопом (окуляр 10, объектив 8), считая лейкоциты по всей камере, во всех больших квадратах, не разделенных на малые (100 квадратов), начиная с левого верхнего угла.

Результат: расчет количества лейкоцитов в одном литре крови производят по формуле

×106/л

Где X–количество лейкоцитов в 1 литре

–число лейкоцитов, сосчитанных в камере

b–степень разведения крови (20)

c–количество больших квадратов (100), в которых считались лейкоциты. 1/250–объем одного большого квадрата, умножение на 250 приведет к объему

в 1 мкл крови.

Подставив известные значения в формулу, получаем:

Полученные результаты преобразовываем по форме X×109

Например, получили =80, значит, после всех подставлений и преобразований

получим X=80×50×106=4000×106=4×109

нормативные величины: для взрослых 4,0–9,0×109/л Выводы: делают заключение о соответствии полученных данных

нормативные.

Работа № 5. Определение количества гемоглобина гемиглобинцианидным методом.

Цель работы: определить количество гемоглобина в исследуемой крови.

Объект исследования: донорская кровь.

Оборудование: резиновые перчатки, микропипетки 0,02 мкл, дозатор, фотоэлектрокалориметр,кюветы толщиной слоя 1 см, пробирки, смесь трансформирующего раствора (калий железосинеродистый, ацетонциангидрид, дистиллированная вода).

Ход роботы: в пробирку отмеряют 5 мл трансформирующего раствора, превращающего гемоглобин в гемиглобинцианид. Добавляют туда же 0,02 мл (20 мкл) донорской крови, перемешивают. Получается раствор красного цвета. После этого измеряют его оптическую плотность (экстинкцию) на ФЭКе. Далее по калибровочному графику, полученному на данном ФЕКе по стандартным растворам гемиглобинцианида, определяют количество гемоглобина в граммах на литр.

Результат: нормативные показатели для мужчин 132-164 г/л, для женщин

115-145 г/л.

Выводы: делают заключение о соответствии полученных данных нормативным.

Работа № 6. Определение содержания гемоглобина методом Сали (гематиновый метод).

Цель работы: определить содержание гемоглобина. Объект: донорская кровь.

Оборудование: резиновые перчатки, гемометр Сали (ГС-2 или ГС-3), капиллярная пипетка на 0,02 мл, 0,1 % раствор соляной кислоты.

Ход работы: Гемометр Сали представляет собой прибор, состоящий из трех пробирок одинакового диаметра. Средняя пробирка – пустая, градуированная, две другие запаяны и содержат стандартный раствор солянокислого гематина, интенсивность которого соответствует идеальной норме – 166,7 г/л (16,67 г %). В градуированную пробирку наливают 0,1% раствор соляной кислоты до метки 2 г%, набирают кровь микропипеткой – 0,02 мл и осторожно выдувают ее на дно той же пробирки. После этого перемешивают и выдерживают для образования солянокислого гематина коричневого цвета. Затем в среднюю пробирку каплями добавляют воду, перемешивают стеклянной палочкой до тех пор, пока цвет испытуемой жидкости не совпадет с цветом стандарта.

По шкале на пробирке определяют деление, соответствующее нижнему мениску. Цифра деления шкалы выражает содержание гемоглобина в г %. Для перевода в г/л результат умножают на 10.

В некоторых гемометрах результат представляется в виде единиц Сали. Для перевода в г/л единицы Сали делят на 6 и умнажают на 10.

Результат: нормативные показатели для мужчин 132-164 г/л, для женщин

115-145 г/л.

Выводы: делают заключение о соответствии полученных данных нормативным.

Работа №7 Осмотический гемолиз. Определение границ осмотической резистентности эритроцитов.

Цель работы: наблюдать осмотический гемолиз. Определить границы осмотической стойкости эритроцитов.

Объект исследования: гепаринизированная донорская кровь. Оборудование: резиновые перчатки, 16 пробирок, мерные пипетки, 15

растворов хлорида натрия убывающей концентрации.

Ход работы: в пробирки разливают по 5 мл растворов хлорида натрия разной концентрации от 0,9 до 0,2%. Помечают пробирки номерами от 1 до 16. Затем в каждую пробирку добавляют по 0,02 мл исследуемой крови, перемешивают и выдерживают при комнатной температуре 30 минут. Центрифугируют в течение 5 минут при 2000 оборотов в минуту. По состоянию надосадочной жидкости в пробирках судят о наличии гемолиза.

160 %,

дистиллирова «Лаковая» кровь нная вода

Результат:

Нормативные величины:

максимальная осмотическая резистентность 0,4-0,35% Минимальная осмотическая резистантность 0,5-0,45%

Вывод: делают вывод о принципе метода определения осмотической стойкости эритроцитов (осмотический гемолиз), объясняют его механизмы.

Делают вывод о соответствии полученных результатов нормальным значениям минимальной и максимальной осмотической резистентности эритроцитов, дают определение этим показателям.

Работа №8. Расчет эритроцитарных индексов.

Цель работы: рассчитать эритроцитарные индексы: цветовой показатель, среднее содержание гемоглобина в эритроците, средняя концентрация гемоглобина в эритроците, средний объем эритроцитов.

Ход работы:

1. Расчет цветового показателя – отражает относительное содержание гемоглобина в эритроците:

ЦП=

Нормативные величины: 0,86–1,05

2. Среднее содержание гемоглобина в эритроците (mean corpuscular hemoglobin (MCH)) – отражает абсолютное содержание гемоглобина в эритроците.

MCH

Hb–количество гемоглобина (г\л) RBC–количество эритроцитов (1012\л)

Получаем X×10-12, где X–результат деления количества гемоглобина на первые две цифры количества эритроцитов, 1грамм×10-12–соответствует одному пикограмму. Поэтому результат записывают в виде MCH=X пикограмм (пг). Нормативные величины: 24–33 пг.

3. Средняя концентрация гемоглобина в эритроците (mean corpuscular hemoglobin concentration (MCHC))–отражает степень насыщенности эритроцита гемоглобином.

MCHC=

Hb – количество гемоглобина в г\л

Ht – гематокритная величина в процентах Нормативные величины: 300-380 г\л

4. Средний объем эритроцитов (mean corpuscular volume (MСV))–

характеризует размер эритроцита.

MCV= х10

Ht–гематокритная величина в процентах RBC–количество эритроцитов (1012\л)

Получаем X×10-12, где X – результат деления гематокритной величины на первые две цифры количества эритроцитов, 1литр×10-12–соответствует одному фемолитру. Поэтому результат записывают в виде MCV=X фемолитров (фл). Нормативные величины: 81 – 99 фл.