- •Вопрос №1. Медицинская микробиология. Предмет, задачи, методы, связь с другими науками. Значение микробиологии в деятельности провизора.
- •Вопрос №3. Принципы классификации бактерий.
- •Бактерии делят на 2 домена: «Bacteria» и «Archaea».
- •Вопрос №4. Структура бактериальной клетки. Основные отличия прокариотов и эукариотов. Особенности химического состава клеточных стенок грамположительных и грамотрицательных бактерий.
- •Основные отличия прокариотов и эукариотов:
- •Вопрос №5. Морфологические и тинкториальные свойства бактерий. Методы микроскопии (люминесцентная, темнопольная, фазово-контрастная, электронная).
- •Вопрос №6. Рост и размножение бактерий. Фазы размножения.
- •Вопрос №7. Питание бактерий. Типы и механизмы питания бактерий. Факторы роста. Прототрофы и ауксотрофы.
- •Вопрос №8. Питательные среды и их классификация. Искусственные питательные среды: простые, сложные, общего назначения, дифференциально-диагностические, элективные.
- •Вопрос №9. Принципы и методы выделения чистых культур бактерий. Характер роста микроорганизмов на жидких и плотных питательных средах.
- •Методы выделения чистых культур бактерий.
- •Характер роста микроорганизмов на жидких питательных средах:
- •Характер роста микроорганизмов на плотных питательных средах:
- •Вопрос №10. Способы получения энергии бактериями (дыхание, брожение). Типы дыхания бактерий.
- •Типы дыхания бактерий:
- •Вопрос №11. Ферменты бактерий. Классификация ферментов: 1) по химической природе; 2) по генетическому контролю.
- •Идентификация бактерий по ферментативной активности.
- •Классификация ферментов:
- •По химической природе:
- •Вопрос №12. Актиномицеты, их морфология. Актиномицеты-продуценты антибиотиков.
- •Вопрос №13. Грибы, их морфология и особенности биологии. Принципы систематики.
- •Различают гифальные и дрожжевые формы грибов.
- •Вопрос №14. Простейшие, их морфология и особенности биологии. Принципы систематики.
- •Вопрос №16. Взаимодействие вируса с клеткой. Фазы жизненного цикла.
- •Вопрос №17. Принципы и методы лабораторной диагностики вирусных инфекций. Методы культивирования вирусов.
- •Методы стерилизации, аппаратура.
- •Вопрос №21.Строение генома бактерий. Понятие о генотипе и фенотипе. Виды изменчивости: фенотипическая и генотипическая.
- •Вопрос №22. Плазмиды бактерий, их функции и свойства. Использование плазмид в генной инженерии.
- •Вопрос №23. Цели и задачи биотехнологии. Микроорганизмы, клетки и процессы, применяемые в биотехнологии.
- •Вопрос №24. Генная инженерия. Биологические препараты, полученные методом генной инженерии.
- •Вопрос №25. Микробиологический контроль в аптеках. Объекты контроля аптек. Отбор проб для санитарно-бактериологического исследования.
- •Методика исследования
- •Вопрос №26. Микрофлора воздуха. Характеристика санитарно-показательных микроорганизмов. Методы санитарно-бактериологического исследования аптек. Нормативы.
- •Вопрос №27. Микрофлора воды. Санитарно-показательные микроорганизмы. Методы исследований.
- •Вопрос №28. Микрофлора почвы. Характеристика санитарно-показательных микроорганизмов. Методы санитарно-бактериологического исследования. Нормативы.
- •Вопрос №29. Нормальная микрофлора растений. Функции. Фитопатогенные микроорганизмы.
- •Вопрос №30. Микрофлора лекарственного сырья и готовых лекарственных форм. Источники загрязнения. Требования Гос. Фармакопеи.
- •Вопрос №31. Нестерильные лекарственные средства. Методы санитарно-бактериологического исследования. Нормативы.
- •Вопрос №32. Стерильные лекарственные средства и методы бактериологического контроля. Пирогенность. Нормативы.
- •Вопрос №33. Нормальная микрофлора организма человека, ее значение. Понятие о дисбактериозе. Препараты для восстановления нормальной микрофлоры: эубиотики (пробиотики).
- •Вопрос №34. Понятие об инфекции. Условия возникновения инфекционного процесса. Понятие об источниках инфекции, механизмах, путях и факторах передачи.
- •Вопрос №36. Роль микроорганизма в инфекционном процессе. Патогенность и вирулентность. Единицы измерения вирулентности. Понятие о факторах патогенности.
- •Вопрос №37. Классификация факторов патогенности по о.В. Бухарину. Характеристика факторов патогенности.
- •Факторы агрессии и инвазии (факторы вирулентности):
- •Характеристика экзотоксинов:
- •Характеристика эндотоксинов:
- •Вопрос №38. Понятие об иммунитете. Виды иммунитета.
- •Вопрос №39. Неспецифические защитные факторы организма против инфекции. Роль и.И. Мечникова в формировании клеточной теории иммунитета.
- •Неспецифические факторы защиты организма
- •Вопрос №40. Антигены: определение, основные свойства. Антигены бактериальной клетки.
- •Вопрос №41. Структура и функции иммунной системы. Кооперация иммунокомпетентных клеток. Формы иммунного ответа.
- •Формы иммунного ответа.
- •Вопрос №42. Иммуноглобулины, их молекулярная структура и свойства. Классы иммуноглобулинов. Первичный и вторичный иммунный ответ.
- •Первичный и вторичный иммунный ответ.
- •Вопрос №43. Гиперчувствительность немедленного типа. Анафилактический шок и сывороточная болезнь.
- •Вопрос №44. Гиперчувствительность замедленного типа. Кожно-аллергические пробы и их использование в диагностике некоторых инфекционных заболеваний.
- •Вопрос №45. Реакция агглютинации. Компоненты, механизм, способы постановки. Применение.
- •Вопрос №46. Реакция пассивной гемагглютинации. Механизм. Компоненты. Применение.
- •Вопрос №49. Реакция иммунофлюоресценции. Механизмы. Компоненты. Применение.
- •Вопрос №50. Иммуноферментный анализ. Механизмы. Компоненты. Применение.
- •Вопрос №56. Генно-инженерные вакцины. Получение. Применение. Преимущества и недостатки.
- •Вопрос №59. Сыворотки. Определение. Современная классификация сывороток. Требования, предъявляемые к сывороточным препаратам.
- •Вопрос №60. Антительные препараты – сыворотки, применяемые для лечения и профилактики инфекционных заболеваний. Способы получения. Осложнения при применении и их предупреждение.
- •Вопрос №61. Антительные препараты – сыворотки, применяемые для диагностики инфекционных заболеваний. Способы получения. Применение.
- •Вопрос №62. Понятие об иммуномодуляторах. Принцип действия. Применение.
- •Вопрос №63. Интерфероны. Природа, способы получения. Применение.
- •Вопрос №64. Химиотерапевтические препараты. Понятие о химиотерапевтическом индексе. Основные группы химиотерапевтических препаратов, механизм их антибактериального действия.
- •В зависимости от механизма действия различают пять групп антибиотиков:
- •Источники антибиотиков.
- •Способы получения.
- •Осложнения со стороны макроорганизма
- •Побочное воздействие на микроорганизмы.
- •Вопрос №67. Лекарственная устойчивость микроорганизмов и механизм ее возникновения. Пути преодоления лекарственной устойчивости.
- •Вопрос №68. Методы микробиологической диагностики инфекционных болезней.
- •Вопрос №69. Роль кишечной палочки в норме и патологии. Препараты, применяемые для лечения.
- •Вопрос №70. Возбудители дизентерии. Таксономия. Характеристика. Препараты применяемые для лечения.
- •Вопрос №71. Возбудители брюшного тифа и паратифов. Таксономия. Характеристика. Препараты, применяемые для профилактики и лечения.
- •Вопрос №72. Возбудители сальмонеллезов – пищевых токсикоинфекций. Таксономия. Характеристика. Препараты, применяемые для профилактики и лечения.
- •Вопрос №73. Возбудители холеры. Таксономия. Характеристика. Препараты, применяемые для профилактики и лечения.
- •Вопрос №74. Стафилококки. Таксономия. Характеристика. Препараты, применяемые для профилактики и лечения.
- •Вопрос №75. Стрептококки. Таксономия. Характеристика. Препараты, применяемые для лечения.
- •Вопрос №76. Менингококки. Таксономия. Характеристика. Препараты, применяемые для профилактики и лечения.
- •Вопрос №77. Гонококки. Таксономия. Характеристика. Препараты, применяемые для лечения.
- •Вопрос №78. Возбудитель туляремии. Таксономия. Характеристика. Препараты, применяемые для профилактики и лечения.
- •Микробиологическая диагностика:
- •Вопрос №79. Возбудитель сибирской язвы. Таксономия. Характеристика. Препараты, применяемые для профилактики и лечения.
- •Вопрос №80. Возбудитель бруцеллеза. Таксономия. Характеристика. Препараты, применяемые для профилактики и лечения.
- •Микробиологическая диагностика:
- •Вопрос №81. Возбудитель чумы. Таксономия. Характеристика. Препараты, применяемые для профилактики и лечения.
- •Микробиологическая диагностика:
- •Вопрос №82. Возбудители анаэробной газовой инфекции. Таксономия. Характеристика. Специфическая профилактика и лечение.
- •Вопрос №83. Возбудитель ботулизма. Таксономия. Характеристика. Препараты, применяемые для профилактики и лечения.
- •Вопрос №84. Возбудитель столбняка. Таксономия. Характеристика. Препараты, применяемые для профилактики и лечения.
- •Вопрос №85. Возбудитель дифтерии. Таксономия. Характеристика. Выявление антитоксического иммунитета. Препараты, применяемые для профилактики и лечения.
- •Вопрос №86. Возбудители туберкулеза. Таксономия. Характеристика. Препараты, применяемые для профилактики и лечения.
- •Вопрос №87. Возбудитель сифилиса. Таксономия. Характеристика. Препараты, применяемые для лечения.
- •Вопрос №88. Возбудитель иксодового клещевого боррелиоза (болезни Лайма). Таксономия. Характеристика. Препараты, применяемые для лечения.
- •Вопрос №89. Классификация грибов. Характеристика. Роль в патологии человека. Препараты, применяемые для лечения.
- •Вопрос №90. Классификация микозов. Поверхностные и глубокие микозы. Системные микозы. Дрожжеподобные грибы рода кандида. Роль в патологии человека.
- •Вопрос №91. Возбудитель гриппа. Таксономия. Характеристика. Препараты, применяемые для профилактики и лечения.
- •Вопрос№92. Возбудитель полиомиелита. Таксономия. Характеристика. Препараты, применяемые для профилактики.
- •Вопрос №93. Возбудители гепатитов: а и е. Таксономия. Характеристика. Препараты, применяемые для профилактики.
- •Гепатит е
- •Вопрос №94. Возбудитель клещевого энцефалита. Таксономия. Характеристика. Препараты, применяемые для профилактики.
- •Вопрос №95. Возбудитель бешенства. Таксономия. Характеристика. Препараты, применяемые для профилактики.
- •Вопрос №96. Возбудитель краснухи. Таксономия. Характеристика. Препараты, применяемые для профилактики.
- •Вопрос №97. Возбудитель кори. Таксономия. Характеристика. Препараты, применяемые для профилактики.
- •Вопрос №98. Герпес-инфекция. Таксономия. Характеристика. Препараты, применяемые для профилактики и лечения.
- •Вопрос №99. Возбудитель ветряной оспы. Таксономия. Характеристика. Препараты, применяемые для профилактики и лечения.
- •Вопрос №100. Возбудители гепатитов: в, с, д. Таксономия. Характеристика. Носительство. Препараты, применяемые для профилактики.
- •Вопрос №101. Вич-инфекция. Таксономия. Характеристика возбудителей. Специфическая профилактика и лечение.
- •Микробиологическая диагностика.
Вопрос №17. Принципы и методы лабораторной диагностики вирусных инфекций. Методы культивирования вирусов.
Для культивирования вирусов используют культуры клеток, куриные эмбрионы и чувствительных лабораторных животных. Эти же методы используют и для культивирования риккетсий и хламидий — облигатных внутриклеточных бактерий, которые не растут на искусственных питательных средах.
Культуры клеток. Культуры клеток готовят из тканей животных или человека. Культуры подразделяют на первичные (неперевиваемые), полуперевиваемые и перевиваемые.
Приготовление первичной культуры клеток складывается из нескольких последовательных этапов: измельчения ткани, разъединения клеток путем трипсинизации, отмывания полученной однородной суспензии изолированных клеток от трипсина с последующим суспендированием клеток в питательной среде, обеспечивающей их рост, например в среде 199 с добавлением телячьей сыворотки крови.
Перевиваемые культуры в отличие от первичных адаптированы к условиям, обеспечивающим им постоянное существование in vitro, и сохраняются на протяжении нескольких десятков пассажей.
Перевиваемые однослойные культуры клеток приготовляют из злокачественных и нормальных линий клеток, обладающих способностью длительно размножаться in vitro в определенных условиях. К ним относятся злокачественные клетки HeLa, первоначально выделенные из карциномы шейки матки, Нер-3 (из лимфоидной карциномы), а также нормальные клетки амниона человека, почек обезьяны и др.
К полуперевиваемым культурам относятся диплоидные клетки человека. Они представляют собой клеточную систему, сохраняющую в процессе 50 пассажей (до года) диплоидный набор хромосом, типичный для соматических клеток используемой ткани. Диплоидные клетки человека не претерпевают злокачественного перерождения и этим выгодно отличаются от опухолевых.
О размножении (репродукции) вирусов в культуре клеток судят по цитопатическому действию (ЦПД), которое может быть обнаружено микроскопически и характеризуется морфологическими изменениями клеток.
Характер ЦПД вирусов используют как для их обнаружения (индикации), так и для ориентировочной идентификации, т. е. определения их видовой принадлежности.
Один из методов индикации вирусов основан на способности поверхности клеток, в которых они репродуцируются, адсорбировать эритроциты — реакция гемадсорбции. Для ее постановки в культуру клеток, зараженных вирусами, добавляют взвесь эритроцитов и после некоторого времени контакта клетки промывают изотоническим раствором хлорида натрия. На поверхности пораженных вирусами клеток остаются прилипшие эритроциты.
Другой метод — реакция гемагглютинации (РГ). Применяется для обнаружения вирусов в культуральной жидкости культуры клеток либо хорионаллантоисной или амниотической жидкости куриного эмбриона.
Количество вирусных частиц определяют методом титрования по ЦПД в культуре клеток. Для этого клетки культуры заражают десятикратным разведением вируса. После 6—7-дневной инкубации их просматривают на наличие ЦПД. За титр вируса принимают наибольшее разведение, которое вызывает ЦПД в 50 % зараженных культур. Титр вируса выражают количеством цитопатических доз.
Более точным количественным методом учета отдельных вирусных частиц является метод бляшек.
Некоторые вирусы можно обнаружить и идентифицировать по включениям, которые они образуют в ядре или цитоплазме зараженных клеток.
Куриные эмбрионы. Куриные эмбрионы по сравнению с культурами клеток значительно реже бывают контаминированы вирусами и микоплазмами, а также обладают сравнительно высокой жизнеспособностью и устойчивостью к различным воздействиям.
Для получения чистых культур риккетсий, хламидий. и ряда вирусов в диагностических целях, а также для приготовления разнообразных препаратов (вакцины, диагностикумы) используют 8—12-дневные куриные эмбрионы. О размножении упомянутых микроорганизмов судят по морфологическим изменениям, выявляемым после вскрытия эмбриона на его оболочках.
О репродукции некоторых вирусов, например гриппа, оспы, можно судить по реакции гемагглютинации (РГА) с куриными или другими эритроцитами.
К недостаткам данного метода относятся невозможность обнаружения исследуемого микроорганизма без предварительного вскрытия эмбриона, а также наличие в нем большого количества белков и других соединений, затрудняющих последующую очистку риккетсий или вирусов при изготовлении различных препаратов.
Лабораторные животные. Видовая чувствительность животных к определенному вирусу и их возраст определяют репродуктивную способность вирусов. Во многих случаях только новорожденные животные чувствительны к тому или иному вирусу (например, мыши-сосунки — к вирусам Коксаки).
Преимущество данного метода перед другими состоит в возможности выделения тех вирусов, которые плохо репродуцируются в культуре или эмбрионе. К его недостаткам относятся контаминация организма подопытных животных посторонними вирусами и микоплазмами, а также необходимость последующего заражения культуры клеток для получения чистой линии данного вируса, что удлиняет сроки исследования.
Лабораторные исследования играют важную роль в установлении диагноза инфекционных болезней, назначении этиотропной терапии, проведении контроля за эффективностью лечения. Процесс специфической лабораторной диагностики основан на выявлении возбудителя и ответной реакции организма человека в ходе инфекционного процесса. Он состоит из трех этапов: сбора материала, транспортировки и его исследования в лаборатории. К проведению каждого этапа предъявляют определенные требования, от соблюдения которых зависит эффективность лабораторной диагностики. Задача врача заключается в правильном выборе метода исследования и грамотной оценке его результатов.
-
Микробиологический метод диагностики основан на обнаружении возбудителей в биологическом материале. Используют светооптическую и электронную микроскопию. Материалом для микроскопического исследования могут быть кровь, костный мозг, ликвор, пунктаты лимфатических узлов, фекалии, дуоденальное содержимое и желчь, моча, мокрота, отделяемое мочеполовых путей, биоптаты тканей, мазки со слизистой оболочки ротовой полости, небных миндалин, носа и др.
-
Бактериологический метод - применение бактериологического метода дает возможность выделить возбудителя в чистой культуре из материала, полученного от больного, и идентифицировать его на основании изучения комплекса свойств. Большинство бактерий способны к культивированию на различных искусственных питательных средах (кроме хламидий и риккетсий), поэтому бактериологический метод имеет важное значение в диагностике многих инфекционных болезней
-
Вирусологический метод включает два основных этапа: выделение вирусов и их идентификацию. Материалами могут быть кровь, другие биологические и патологические жидкости, биоптаты органов и тканей.
-
Вирусологическое исследование крови часто проводят с целью диагностики арбовирусных инфекций. В слюне могут быть обнаружены вирусы бешенства, эпидемического паротита, простого герпеса. Носоглоточные смывы служат для выделения возбудителей гриппа и других ОРВИ, кори. В смывах с конъюнктивы обнаруживают аденовирусы. Из фекалий выделяют различные энтеро-, адено-, рео- и ротавирусы.
-
Биологический метод состоит в заражении различным материалом (клиническим, лабораторным) лабораторных животных для индикации возбудителя, а также для определения некоторых свойств микроорганизмов, характеризующих их патогенность (токсигенность, токсичность, вирулентность). В качестве лабораторных животных используют белых мышей, белых крыс, морских свинок, кроликов и др.
-
Иммунологический метод (серологический) включает исследования сыворотки крови, а также других биологических субстратов для выявления специфических антител и антигенов. Классическая серодиагностика основана на определении антител к выявленному или предполагаемому возбудителю. Положительный результат реакции свидетельствует о наличии в исследуемой сыворотке крови антител к антигенам возбудителя, отрицательный результат указывает на отсутствие таковых. Обнаружения в исследуемой сыворотке крови антител к возбудителю ряда инфекционных болезней недостаточно для постановки диагноза, поскольку оно может отражать наличие постинфекционного или поствакцинального иммунитета, поэтому исследуют «парные» сыворотки крови, первую, взятую в первые дни болезни, и вторую, взятую с интервалом 7—10 дней. В этом случае оценивают динамику нарастания уровня антител.
-
Серологические реакции обозначают в соответствии с феноменами, сопровождающими образование комплекса антиген — антитело при взаимодействии различных по свойствам компонентов. Различают реакции агглютинации, преципитации и лизиса.
-
Иммунологические реакции, такие, как иммунофлюоресценция, иммуноферментный анализ, радиоиммунологический анализ, иммунный блоттинг характеризуется применением различных способов детекции (обнаружения) комплекса антиген — антитело на основе химических или физических меток (флюоресцирующих веществ, ферментсубстратных взаимодействий, приводящих к окрашиванию реакционной смеси, радиоактивных изотопов), что имеет целью достижения большей чувствительности и специфичности анализа по сравнению с серологическими методами, основанными на естественных феноменах.
-
Иммуноферментный анализ (ИФА) проводят в два этапа: первый — взаимодействие антител с антигеном, второй — ферментативная индикация комплекса антиген — антитело за счет появления окрашивания реакционной смеси и регистрации окрашивания визуально либо спектрофотометрическим методом.
-
Принцип метода иммунного блоттинга состоит в выявлении антител к отдельным антигенам возбудителя. С помощью этого метода определяют антитела к антигенам ВИЧ (гликопротеинам оболочки вируса, белкам сердцевины и ферментам вируса). Результаты иммунного блоттинга оценивают как положительные, сомнительные и отрицательные в зависимости от количественного и качественного набора выявленных антител.
-
Метод ПЦР был разработан американским биохимиком Кэри Мюллисом в 1983 г. на основе применения открытой им термостабильной ДНК-полимеразы (Tag-полимеразы). Принцип метода состоит в увеличении в 106—108 раз числа копий специфического участка ДНК возбудителя, катализируемого in vitro ДНК-по-лимеразой в автоматическом режиме.
Вопрос №18. Вирусы бактерий - фаги. Взаимодействие фага с бактериальной клеткой. Умеренные и вирулентные бактериофаги. Профаг. Лизогения. Применение фагов в биотехнологии, микробиологии и медицине.
Бактериофаги — вирусы бактерий, обладающие способностью специфически проникать в бактериальные клетки, репродуцироваться в них и вызывать их растворение (лизис).
Взаимодействие фага с бактериальной клеткой. По механизму взаимодействия различают вирулентные и умеренные фаги.
Вирулентные фаги, проникнув в бактериальную клетку, автономно репродуцируются в ней и вызывают лизис бактерий. Процесс взаимодействия вирулентного фага с бактерией протекает в виде нескольких стадий и весьма схож с процессом взаимодействия вирусов человека и животных с клеткой хозяина. Однако для фагов, имеющих хвостовой отросток с сокращающимся чехлом, он имеет особенности. Эти фаги адсорбируются на поверхности бактериальной клетки с помощью фибрилл хвостового отростка. В результате активации фагового фермента АТФазы происходит сокращение чехла хвостового отростка и внедрение стержня в клетку. В процессе «прокалывания» клеточной стенки бактерии принимает участие фермент лизоцим, находящийся на конце хвостового отростка. Вслед за этим ДНК фага, содержащаяся в головке, проходит через полость хвостового стержня и активно впрыскивается в цитоплазму клетки. Остальные структурные элементы фага (капсид и отросток) остаются вне клетки.
После биосинтеза фаговых компонентов и их самосборки в бактериальной клетке накапливается до 200 новых фаговых частиц. Под действием фагового лизоцима и внутриклеточного осмотического давления происходит разрушение клеточной стенки, выход фагового потомства в окружающую среду и лизис бактерии. Один литический цикл (от момента адсорбции фагов до их выхода из клетки) продолжается 30—40 мин. Процесс бактериофагии проходит несколько циклов, пока не будут лизированы все чувствительные к данному фагу бактерии.
Взаимодействие фагов с бактериальной клеткой характеризуется определенной степенью специфичности. По специфичности действия различают поливалентные фаги, способные взаимодействовать с родственными видами бактерий, моновалентные фаги, взаимодействующие с бактериями определенного вида, и типовые фаги, взаимодействующие с отдельными вариантами (типами) данного вида бактерий.
Умеренные фаги лизируют не все клетки в популяции, с частью из них они вступают в симбиоз, в результате чего ДНК фага встраивается в хромосому бактерии. В таком случае геномом фага называют профаг. Профаг, ставший частью хромосомы клетки, при ее размножении реплицируется синхронно с геном бактерии, не вызывая ее лизиса, и передается по наследству от клетки к клетке неограниченному числу потомков.
Биологическое явление симбиоза микробной клетки с умеренным фагом (профагом) называется лизогенией, а культура бактерий, содержащая профаг, получила название лизогенной. Это название отражает способность профага самопроизвольно или под действием ряда физических и химических факторов исключаться из хромосомы клетки и переходить в цитоплазму, т. е. вести себя как вирулентный фаг, лизирующий бактерии.
Лизогенные культуры по своим основным свойствам не отличаются от исходных, но они невосприимчивы к повторному заражению гомологичным или близкородственным фагом и, кроме того, приобретают дополнительные свойства, которые находятся под контролем генов профага. Изменение свойств микроорганизмов под влиянием профага получило название фаговой конверсии. Последняя имеет место у многих видов микроорганизмов и касается различных их свойств: культуральных, биохимических, токсигенных, антигенных, чувствительности к антибиотикам и др. Кроме того, переходя из интегрированного состояния в вирулентную форму, умеренный фаг может захватить часть хромосомы клетки и при лизисе последней переносит эту часть хромосомы в другую клетку. Если микробная клетка станет лизогенной, она приобретает новые свойства. Таким образом, умеренные фаги являются мощным фактором изменчивости микроорганизмов.
Практическое применение фагов. Бактериофаги используют в лабораторной диагностике инфекций при внутривидовой идентификации бактерий, т. е. определении фаговара (фаготипа). Для этого применяют метод фаготипирования, основанный на строгой специфичности действия фагов: на чашку с плотной питательной средой, засеянной «газоном» чистой культурой возбудителя, наносят капли различных диагностических типоспецифических фагов. Фаговар бактерии определяется тем типом фага, который вызвал ее лизис (образование стерильного пятна, «бляшки», или «негативной колонии», фага). Методику фаготипирования используют для выявления источника и путей распространения инфекции (эпидемиологическое маркирование). Выделение бактерий одного фаговара от разных больных указывает на общий источник их заражения.
По содержанию бактериофагов в объектах окружающей среды (например, в воде) можно судить о присутствии в них соответствующих патогенных бактерий. Подобные исследования проводят при эпидемиологическом анализе вспышек инфекционных болезней.
Фаги применяют также для лечения и профилактики ряда бактериальных инфекций. Производят брюшнотифозный, сальмонеллезный, дизентерийный, синегнойный, стафилококковый, стрептококковый фаги и комбинированные препараты (колипротейный, пиобактериофаги и др). Бактериофаги назначают по показаниям перорально, парентерально или местно в виде жидких, таблети-рованных форм, свечей или аэрозолей.
Бактериофаги широко применяют в генной инженерии и биотехнологии в качестве векторов для получения рекомбинантных ДНК.
Вопрос №19. Действие физических факторов на микроорганизмы. Понятие о стерилизации, дезинфекции. Методы стерилизации.
Влияние физических факторов.
Влияние температуры. Различные группы микроорганизмов развиваются при определенных диапазонах температур. Бактерии, растущие при низкой температуре, называют психрофилами, при средней (около 37 °С) — мезофилами, при высокой — термофилами.
К психрофильным микроорганизмам относится большая группа сапрофитов — обитателей почвы, морей, пресных водоемов и сточных вод (железобактерии, псевдомонады, светящиеся бактерии, бациллы). Некоторые из них могут вызывать порчу продуктов питания на холоде. Способностью расти при низких температурах обладают и некоторые патогенные бактерии (возбудитель псевдотуберкулеза размножается при температуре 4 °С). В зависимости от температуры культивирования свойства бактерий меняются. Интервал температур, при котором возможен рост психрофильных бактерий, колеблется от -10 до 40 °С, а температурный оптимум — от 15 до 40 °С, приближаясь к температурному оптимуму мезофильных бактерий.
Мезофилы включают основную группу патогенных и условно-патогенных бактерий. Они растут в диапазоне температур 10— 47 °С; оптимум роста для большинства из них 37 °С.
При более высоких температурах (от 40 до 90 °С) развиваются термофильные бактерии. На дне океана в горячих сульфидных водах живут бактерии, развивающиеся при температуре 250—300 °С и давлении 262 атм.
Термофилы обитают в горячих источниках, участвуют в процессах самонагревания навоза, зерна, сена. Наличие большого количества термофилов в почве свидетельствует о ее загрязненности навозом и компостом. Поскольку навоз наиболее богат термофилами, их рассматривают как показатель загрязненности почвы.
Хорошо выдерживают микроорганизмы действие низких температур. Поэтому их можно долго хранить в замороженном состоянии, в том числе при температуре жидкого газа (—173 °С).
Высушивание. Обезвоживание вызывает нарушение функций большинства микроорганизмов. Наиболее чувствительны к высушиванию патогенные микроорганизмы (возбудители гонореи, менингита, холеры, брюшного тифа, дизентерии и др.). Более устойчивыми являются микроорганизмы, защищенные слизью мокроты.
Высушивание под вакуумом из замороженного состояния — лиофилизацию — используют для продления жизнеспособности, консервирования микроорганизмов. Лиофилизированные культуры микроорганизмов и иммунобиологические препараты длительно (в течение нескольких лет) сохраняются, не изменяя своих первоначальных свойств.
Действие излучения. Неионизирующее излучение — ультрафиолетовые и инфракрасные лучи солнечного света, а также ионизирующее излучение — гамма-излучение радиоактивных веществ и электроны высоких энергий губительно действуют на микроорганизмы через короткий промежуток времени. УФ-лучи применяют для обеззараживания воздуха и различных предметов в больницах, родильных домах, микробиологических лабораториях. С этой целью используют бактерицидные лампы УФ-излучения с длиной волны 200—450 нм.
Ионизирующее излучение применяют для стерилизации одноразовой пластиковой микробиологической посуды, питательных сред, перевязочных материалов, лекарственных препаратов и др. Однако имеются бактерии, устойчивые к действию ионизирующих излучений, например Micrococcus radiodurans была выделена из ядерного реактора.
Стерилизация – предполагает полную инактивацию микробов в объектах, подвергшихся обработке.
Дезинфекция — процедура, предусматривающая обработку загрязненного микробами предмета с целью их уничтожения до такой степени, чтобы они не смогли вызвать инфекцию при использовании данного предмета. Как правило, при дезинфекции погибает большая часть микробов (в том числе все патогенные), однако споры и некоторые резистентные вирусы могут остаться в жизнеспособном состоянии.