Естественная микрофлора тела человека

	Основные биотопы тела человека
Виды м/о	кожа	ротовая полость	дыхательная система верхний отдел	мочеполовая система нижний отдел	ЖКТ тонкий кишечник	ЖКТ толстый кишечник
Стафилококк	+	+	+	+ -		+ -
Микрококк	+	-	-	-	-	-
Сарцины	+	-	-	-	-	-
Дифтероиды	+	-	-	+ -	-	-
Стрептококки	+	+	+	+ -	+	+ -
Бактероиды	-	+	-	+ -	-	+
Фузобактерии	-	+	-	-	-	-
Вейлонеллы	-	+	-	-	-	+
Актиномицеты	-	+	-	-	-	-
Спирохеты	-	+	-	-	-	-
Микоплазмы	-	+	-	+ -	-	-
Простейшие	-	+	-	-	-	-
Диплококки	-	+	+ -	-	-	-
Энтеробактерии	-	-	+ -	+ -	+	+
Грибы	+	+	_	+ -	+ -	+
Палочка смегмы	-	-	-	+	-	-
Палочка Додерлейна	-	-	-	+	-	-
Лактобактерии	-	+	-	-	+	+
Коринебактерии	-	+	_	+ -	-	-
Бациллы	+	-	-	-	-	+
Клостридии	-	-	-	-	-	+
Бифидумбак-терии	-	-	-	-	-	+

к работе № 1

1. Кожа, особенно ее открытые части, обсеменены различными микробами. Так, во время проведения санитарно-гигиенических процедур с кожи тела человека смывается от 85 до 120 млн. микроорганизмов. Микрофлора кожи складывается не только из микробов, находящихся на поверхности, но и в глубине кожи (волосяные мешочки, протоки сальных и потовых желез).

На грязной коже многие микробы способны не только сохранять жизнеспособность, но и размножаться. На поверхности чистой кожи микроорганизмы быстро гибнут.

Питание микробов кожи обеспечивается отмершими клетками эпителия, а также выделениями потовых и сальных желез. Через неповрежденные кожные покровы большинство микроорганизмов, в том числе и патогенные не проникают. При нарушении же целостности кожных покров, а также при снижении общей резистентности микроорганизмов на коже могут возникать различные заболевания: гнойничковые элементы, инфицированные мацерации, вызванные бактериями, грибками, вирусами.

Микрофлору кожи составляют микроорганизмы как постоянно живущие на ней, так и разнообразная заносная микрофлора, попадающая из внешней среды - из воды, воздуха, почвы, при соприкосновении с грязными объектами внешней среды или полостями организма (рот, кишечник, полость носа и др.).

На поверхности кожи обнаруживаются кокки (стафилококки, стрептококки), чаще непатогенные (сарцины, дифтероиды, бациллы, дрожжевые и дрожжеподобные грибы).

Наиболее часто (80-90%) на коже определяется эпидермальный стафилококк –Staphylococcus epidermidis, - золотистый и лимонно-желтый стафилококк.

Санитарно-бактериологическое исследование кожи проводится двумя методами:

1) посев отпечатков кожи пальцев на чашки с МПА или на специальные среды (например, кровяной агар) с последующим макроскопическим и микроскопическим изучением выросших колоний;

2) смывы с рук, для проведения которых используют увлажненный ватный тампон, которым протирают руки обследуемого, начиная с менее загрязненных участков кожи: тыльную часть ладони, ладонь, межпальцевые поверхности, ногтевые ложа и подногтевые поверхности. Тампон погружают в стерильный физиологический раствор (8-10 мл), жидкость тщательно встряхивают и исследуют на ОМЧ и на наличие кишечной палочки.

Определение общего микробного числа - ОМЧ.

Методика. 1 мл смыва вносят в стерильную чашку Петри, затем заливают ее 12 - 15 мл расплавленного и остуженного до 45°С МПА, перемешивают, после застывания агара посев инкубируют 24 - 48 часов, при температуре 37°С. Производят подсчет выросших колоний на поверхности чашки и в глубине агара при помощи лупы.

Определение кишечной палочки.

Методика. Оставшееся количество смыва помещают в пробирку с 5 мл среды Кесслера и инкубируют в термостате при температуре 43°С. На следующие сутки высеивают на среду Эндо. В случае появления типичных для кишечной палочки колоний производят идентификацию кишечной палочки и делают вывод о фекальном загрязнении кожи.

Среда Кесслера содержит желчь, генциан фиолетовый, пептон, лактозу. E.coli ферментирует лактозу с образованием газа, скапливающегося в поплавке.

к работе № 2

2. Микрофлора ротовой полости и верхних дыхательных путей разнообразна и многочисленна, здесь обнаруживается более 100 видов микроорганизмов. Особенно много их локализуется в зубном налете - в 1 г сухой массы содержится около 250 млн. микробных клеток.

В ротовой полости создаются благоприятные условия для жизнедеятельности микроорганизмов - это щелочная реакция слюны, пищевые остатки, термостатная температура и влажность. В различных участках полости рта микрофлора не одинакова. На боковых поверхностях рта микробов мало. Поверхность языка, особенно задней его части, а также задней части носоглотки содержит большое количество микроорганизмов. Здесь преобладают стрептококки, сарцины, спирохеты, веретенообразные палочки, стафилококки и др. Большое разнообразие микрофлоры наблюдается между зубами, в криптах и лакунах миндалин, где из остатков эпителия, детрита и бактерий образуются тонзиллярные пробки, однако преобладают стрептококки и диплококки. Резидентную группу составляют стрептококки (Str. salivarius и др.), непатогенные стафилококки, диплококки, коринебактерии, лактобациллы, вейлонеллы, трепонемы (Тг. buccalis - наиболее распространённый вид), дрожжеподобные грибы (Candida albicans), актиномицеты, микоплазмы, простейшие.

Среди факультативных микроорганизмов встречаются энтеробактерии (роды Escherichia, Klebsiella, энтеробактерии протея), синегнойная палочка, спорообразующие - бациллы, клостридии, а также пептострептококки и пептококки. Некоторое время в ротовой полости могут персистировать вибрионы, спирохеты, дифтерийная палочка, менингококки и др.

В поддержании количественного и качественного постоянства нормальной микрофлоры полости рта главную роль играет слюна, обладающая антибактериальной активностью за счёт содержания в ней ферментов (лизоцим, лактоферрин, пероксидаза, нуклеаза) и секреторных иммуноглобулинов. Индивидуальные колебания в составе микрофлоры полости рта зависят от возраста, гигиенических навыков, диеты, общей резистентности организма и резистентности слизистых оболочек, наличие дефектов зубов.

Нормальная микрофлора полости рта обеспечивает её защиту за счёт конкуренции, антагонизма по отношению к патогенным микроорганизмам, таким как дифтерийный возбудитель, патогенные стафилококки и стрептококки, менингококки, условно-патогенные и патогенные грибы. В случае же нарушения микрофлоры, то есть возникновение дисбактериоза, патогенные и условно-патогенные микробы могут вызывать заболевания органов полости рта или обеспечивать так называемую нисходящую инфекцию, т.е. миграцию микроорганизмов из полости рта в глотку, гортань, желудок, трахею, бронхи, лёгкие.

Для изучения микрофлоры ротовой полости применяют следующие методы:

а) бактериологический – посев биоматериала на питательные среды с последующей идентификацией микроорганизмов;

б) бактериоскопический (вспомогательный метод диагностики) - готовят препараты-мазки, красят по Граму, по Леффлеру и Нейссеру, Циль-Нильсену, Бурри-Гинсу, микроскопируют. Определяют морфологические и тинкториальные свойства возбудителей.

к работе № 3

3. Микрофлора ЖКТ.

Микрофлора желудка немногочисленна, здесь встречаются сарцины, кислотоустойчивые и спорообразующие бактерии, дрожжевые грибы.

Микрофлора тонкого кишечника также немногочисленна (благодаря действию ферментов), в этом биотопе обнаруживаются лактобактерии, дрожжевые и дрожжеподобные грибы.

Микрофлора толстого кишечника: в толстом кишечнике находится самая разнообразная по составу микрофлора.

Биомасса микроорганизмов, заселяющих кишечник взрослого человека, составляет 2,5-3 кг и включает в себя до 450 видов.

Нормальная микрофлора кишечника на 92-95% состоит из строго анаэробных видов, остальная часть - аэробы.

Микробиологическое исследование фекалий производится с целью определения состояния нормальной микрофлоры или для исключения дисбактериоза кишечника, показания для него разнообразны - предоперационное обследование больных, кишечные инфекции неясной этиологии, дисфункции кишечника после антибиотикотерапии, уточнение диагноза и др.

Методика микробиологического исследования фекалий с целью определения нормальной микрофлоры и исключения дисбактериоза кишечника.

Забор фекалий производится стерильной стеклянной палочкой в стерильную взвешенную посуду, забирают теплые нативные фекалии, доставляют в лабораторию не позднее чем через 2 часа.

Исследуемые фекалии помещают в тиогликолевый буфер (способствующий сохранению как аэробный, так и анаэробной микрофлоры), затем готовят десятикратное разведение надосадочной жидкости в физиологическом растворе и высеивают на элективные и дифференциально-диагностические среды, соответственно группам выделяемых микроорганизмов, как аэробов, так и анаэробов. Посевы на факультативные анаэробы инкубируют в обычном термостате при 37°С.

Из выросших подозрительных колоний выделяют чистую культуру микроорганизма, проводят полное изучение всех свойств (культуральных, морфологических, биохимических, патогенных и др.), идентифицируют до вида, подвида, типа.

Идентификацию проводят как для выделенных патогенных и условно-патогенных возбудителей, так и представителей нормальной микрофлоры кишечника.

Одновременно на чашках подсчитывают количество выросших колоний определённого рода, вида и производят определение микроорганизмов в 12 г фекалий, при подсчёте учитывают посевную дозу и разведения в буфере, из которых сделан высев.

Количество обнаруженных микроорганизмов выражают в десятичных логарифмах.

Полученные результаты сравнивают со справочными данными и делают заключение о состоянии микрофлоры кишечника.

Характеристика представителей нормальной микрофлоры кишечника человека:

1. Бифидобактерии (род Bifidobacterium).

Строгие анаэробы. Занимают доминирующее положение в облигатной микрофлоре кишечника здорового человека, обладают высокой антагонистической активностью. Своё название получили из-за характерного разветвления на конце палочек - бифиркаций. Культивирование проводится на специальной питательной среде Блаурокка, в пробирках в анаэробных условиях.

Среда Блаурокка готовится следующим образом - к печёночному отвару добавляют пептон, поваренную соль, мясопептонный агар, лактозу, солянокислый цистеин, среду стерилизуют и регенерируют кипячением в течение 40-45 минут.

Культуральные свойства бифидобактерий. На среде Блаурокка, в толще среды, бифидобактерии дают характерный придонный рост - в виде "точек с хвостиками" или маленьких комочков.

Морфологические свойства бифидобактерий. В мазке регистрируются характерные Гр+ палочки с разветвлёнными или утолщёнными концами, расположенные в виде римских пятёрок или скоплений, напоминающих китайские иероглифы.

2. Кишечные палочки (Escherichia coli).

Факультативные анаэробы. Прямые Гр- палочки с закругленными концами.

ДДС - среда Эндо (питательный агар, 1% лактоза и индикатор – основной фуксин, обесцвеченный сульфитом натрия). Свежеприготовленная среда бесцветна или имеет бледно-розовую окраску. При росте кишечной палочки (лактозоположительные бактерии) колонии окрашиваются в темно-красный цвет с металлическим блеском; лактозоотрицательные бактерии образуют бледно-розовые колонии.

3. Энтерококки (род Enterococcus).

Аэробы. В настоящее время определяют 2 вида энтерококков - 1) Ent. fecalis и 2) Ent. faecium. Культивирование энтерококков проводится на среде Калины.

Среда Калины - это ДДС для энтерококков, готовится на основе 1,5% ПМА, содержит глюкозу, дрожжевой гидролизат, молоко, полимиксин, краску кристаллический фиолетовый (водный раствор).

На этой среде 2 вида энтерококков различаются по культурным свойствам - первый вид даёт колонии мелкие или средних размеров яркие, красно-вишнёвые, второй вид - розовые, розовато-серые колонии.

Морфологические свойства энтерококков - в мазке видны короткие цепочки Гр+ кокков, иногда вытянутой формы или единичные кокки.

к работе № 4

4. Микрофлора урогенитальной системы. Почки, мочеточники и моча в мочевом пузыре в норме стерильны. На наружных половых органах мужчин и женщин обнаруживаются микобактерии смегмы (Myсobaсterium smegmatis) непатогенные, иногда патогенные стафилококки, монококки, коринебактерии, микоплазмы, но пейзаж микроорганизмов однообразен, включает 2-3-4 вида. Уретра женщин обычно стерильна. Уретра мужчин имеет микрофлору немногочисленную - непатогенные кокки, сапрофиты, дрожжи. Микрофлора влагалища разнообразна, но не постоянна, зависит от многих причин, в том числе и от функции яичников, от возраста и общей резистентности организма, а также от уровня гликогена в клетках эпителия влагалища и рН влагалищного секрета. Сразу после рождения женщины происходит заселение влагалища лактобактериями, затем появляется кокковая флора. В зрелом возрасте, кроме лактобактерий и непатогенных кокков, появляются непатогенные стрептококки, клебсиеллы, бактероиды, анаэробы, микоплазмы, дрожжевые грибки, грибы Candida. Но основным и важнейшим представителем нормальной микрофлоры влагалища является Lас. vaginalis (палочки Додерлейна), влагалищные палочки. Влагалищные палочки имеют двоякую форму - одни из них крупные, грамположительные, с резко обрубленными концами, другие - тонкие, изящные, с заострёнными концами, располагаются поодиночке или попарно. Микроорганизмы неподвижны, спор не образуют, капсул не имеют, факультативные анаэробы. Наилучшей средой для культивирования является печёночный бульон с добавлением 2% виноградного сахара и кусочков печени или сахарный бульон, образуют S- и R- формы колоний. Обладают довольно выраженной биохимической активностью.

В некоторых случаях, в микрофлоре влагалища появляются и вызывают заболевания такие микробы как патогенные или условно-патогенные стафилококки, стрептококки, синегнойные палочки, клебсиеллы, хламидии, а также микробные ассоциации.

Хламидии, вызывающие распространённое в настоящее время хламидиоз, не являются представителем нормальной микрофлоры влагалища. Обнаружение хламидий в соскобе или мазке всегда говорит о патологическом процессе, даже в том случае, если у женщины нет клиники - в этом случае имеет место персистенция - до начала появления клинической болезни.

Поражения органов урогенитального тракта, вызванные микоплазмами, хламидиями, клебсиеллами, сложны как в диагностике, так и в лечении. Трудности в диагностике вызваны особенностями строения и культивирования микроорганизмов - так, микоплазмы и хламидии размножаются внутриклеточно, а клебсиеллы имеют капсулу и требуют особых методов окраски.

Микробиологическое изучение микрофлоры влагалища включает 2 метода исследования - микроскопическое и микробиологическое, с выделением чистой культуры возбудителей.

Микроскопическое исследование состоит в определении степени чистоты влагалищного секрета (схема Гейрлина) в препарате-мазке или соскобе, взятым стерильным тампоном или специальным инструментом.

Различают 4 степени чистоты влагалищного секрета при окраске по Граму:

• при первой степени - обнаруживаются влагалищные палочки в чистой культуре и скудное количество клеток плоского эпителия;

• при второй степени чистоты - кроме влагалищной палочки в мазке определяется небольшое количество посторонних бактерий (кокков и других непатогенных микроорганизмов) и клеток плоского эпителия;

• третья степень чистоты характеризуется очень незначительным содержанием влагалищных палочек, значительным количеством кокковых форм, бактерий и обилием лейкоцитов;

• при четвёртой степени частоты - влагалищные палочки совершенно отсутствуют, большое количество разнообразных кокков, палочковидные бактерии, грибы, микоплазмы, клебсиеллы, и др. Лейкоциты находятся в большом количестве.

Микрофлору третьей и четвёртой степени чистоты следует рассматривать как дисбактериоз влагалища, но у женщин в климактерическом периоде или в пожилом возрасте она является распространённым явлением и не всегда рассматривается как патология.

Во влагалищном содержимом при патологии могут быть обнаружены патогенные или условно-патогенные микроорганизмы - гонококки, стафилококки, хламидии, а также простейшие.

Наиболее распространённым возбудителем из простейших является вагинальная трихомонада - Tr. vaginalis - жгутиковое простейшее длинной 5-30 мкм, имеет 3-5 жгутиков, вызывающая трихомонадный кольпит.

Для обнаружения этого возбудителя вагинальный секрет берут ватным тампоном или вагинальной ложечкой, помещают на подогретое предметное стекло, покрывают покровным стеклом и микроскопируют. Вагинальная трихомонада обнаруживается и в окрашенных мазках - по Граму, по Романовскому-Гимза.

14