5. Метод массового исследования на вибриононосительство.
Проводят во время эпидемических вспышек холеры. Стул одновременно забирают из прямой кишки алюминиевыми петлями от 10 человек, рационально сгруппированных, и вносят их в одну колбу с 200 мл щелочной пептонной воды и 01 холерной агглютинирующей сывороткой, разведенной до половины титра. Инкубацию проводят при 37°С в течение 3-4 часов. Холерные вибрионы, размножившись, начинают агглютинировать и в виде хлопьев опадают на дно колбы. При положительном результате материал забирают от каждого из 10 человек и исследуют раздельно. Такой метод дает значительную экономию питательных сред и рабочего времени бактериологов.
Ускоренные методы следует рассматривать лишь как ориентировочные. Для окончательного ответа необходимо выделение чистой культуры возбудителя холеры и ее идентификация по совокупности признаков.
к работе № 7
Принципиальная схема бактериологического выделения возбудителей холеры
к работе № 8
Экспресс-тест для качественного одноэтапного выявления антигена Helicobacter pylori в фекалиях человека
НАЗНАЧЕНИЕ
Иммунохроматографический экспресс-тест для качественного определения антигена Helicobacter pylori в фекалиях.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ
Helicobacter pylori - грамотрицательная бактерия, поражающая слизистую оболочку желудка. Заражение Helicobacter pylori может привести к хроническому гастриту, язве желудка и двенадцатиперстной кишки. Helicobacter pylori диагностируют у 40-50% населения в развитых странах и у 80-90% в развивающихся странах.
ПРИНЦИП
Тест-система представляет собой полоску нитрацеллюлозной мембраны в пластиковом футляре (кассете) с фиксированными на ней моноклональными антителами к Helicobacter pylori , конъюгированными с коллоидными частицами золота. Поликлональные антитела зафиксированы в контрольной зоне полоски. Антигены Helicobacter pylori, находящиеся в пробе, реагируют со специфическими моноклональными меченными антителами. Формируется комплекс антиген-антитело, который мигрирует по мембране, образуя розово-сиреневую полоску в тестовой зоне, что оценивается как положительный результат. Непрореагированный конъюгат мигрирует в контрольной зоне, где захватывается поликлональными антителами, формируя розово-сиреневую полоску, подтверждающую корректность результатов теста.
ТЕХНИКА ВЫПОЛНЕНИЯ АНАЛИЗА
Перед началом тестирования тестовую кассету и образец фекалий довести до комнатной температуры (20-30оС).
Непосредственно перед исследованием вскрыть индивидуальную упаковку теста (вскрытая кассета пригодна для использования в течение 1 ч).
Маркировать тестовую кассету инициалами или идентификационным номером пациента.
Суспендировать пробу энергичным встряхиванием пробирки.
Отвинтить колпачок на дне пробирки, отломить кончик капельницы, внести 3 капли тестируемой суспензии в тестовое окно кассеты.
Результат анализа учитывают через 5-8 мин (позднее возможно проявление неспецифических реакций)
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
ПОЛОЖИТЕЛЬНЫЙ
Проявляется двумя красными полосами в контрольной (“C”) и тестовой (“ Т”)
зонах тестового окна. Тестовая и контрольная линии могут различаться по яркости.
ОТРИЦАТЕЛЬНЫЙ:
Проявляется красной линией в контрольной зоне тестового окна при отсутствии тестовой линии.
СОМНИТЕЛЬНЫЙ:
При отсутствии видимой красной полосы в тестовой зоне результаты теста оценивают как сомнительные. Тест проводят повторно.
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
1. Тест предусматривает контроль за правильностью проведения процедуры. Окрашенная линия, появляющаяся в контрольной области (С) мембраны, указывает на правильность осуществления процедуры теста и работы кассеты.
2. Результаты теста не учитывают, если фон неясный и мешает увидеть или интерпретировать результаты.
ХАРАКТЕРНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ТЕСТА
Чувствительность теста: 92,5%
Специфичность теста: 95,0%
Порог чувствительности теста: 100 нг/мл
Тест не дает неспецифических перекрестных реакций с E. coli, S. aureus, Campilobacter coli, Enterococcus faecalis при их титре 106 КОЕ/мл и гемоглобином в концентрации 0,5 г/л
УРЕАЗНЫЙ ТЕСТ
В лабораторию доставляют из катетера эндоскопических исследований кусочки биоптата слизистой желудка или двенадцатиперстной кишки в пробирках, содержащих мочевину и фуксин. В нейтральной pH среде индикатор не изменяет своего цвета, а в результате наличия фермента уреазы в биоптате pH сдвигается в кислую сторону и цвет изменяется на малиновый. Для подтверждения результата делают мазки-отпечатки на обезжиренное предметное стекло. Мазки фиксируются 10 мин в 95% этиловом спирте, а затем окрашиваются по Граму. В положительном случае в препарате видны грамотрицательные S-образные микроорганизмы. В качестве контроля дополнительно делается посев на сектора среды Эндо для исключения наличия протея и стафилококков в слизистой желудка, так как многие патогенные микробы имеют фермент уреазу.