19. Непереносимость металлических зубных протезов

Т. П. Кравец, М. Ю. Кравец

Решение проблемы удаленных зубов сводится к их замещению различными ортопедическими конструкциями. Менталитет нашего населения таков, что протезирование пациентов проводится чаще всего несъемными протезами, даже в случаях, когда показано замещение отсутствующих зубов съемными протезами. Для изготовления таких протезов используют драгоценные, полудрагоценные и недрагоценные сплавы металлов. Из-за своей неоднородности сплавы металлов в полости рта подвергаются электрохимической коррозии.

Металлические зубные протезы у некоторых стоматологических больных могут вызывать развитие патологического симптомокомплекса, который обозначают универсальным термином «непереносимость металлических включений в полости рта». Кроме этого термина используют еще и термины: «гальванизм полости рта», «гальваноз», «металлоз» или термин «гальванический синдром». Актуальность данной проблемы обозначена частотой возникновения аллергических проявлений непереносимости металлических ортопедических конструкций. На сегодняшний день это 20–25 % случаев в системе неинфекционной патологии полости рта (А. И. Воложин и соавт., 2004; Кириллова Л. А., 2004; P. A. Lalor et al., 1991). Основными поражающими факторами, приводящими к непереносимости сплавов металлов, являются:

действие гальванического тока;

влияние продуктов коррозии металлов зубных протезов.

Проблема непереносимости сплавов металлов зубных протезов усложняется еще и тем, что постоянно увеличивается количество внедряемых сплавов металлов для изготовления зубных протезов, отмечается рост аллергизации населения. Кроме того, проводится только перепротезирование (замена) неполноценного протеза без учета фактора аллергизации пациента и наличия в полости рта уже имеющихся сплавов металлов, и тогда количество разности ионов металлов, диффундирующих в ротовую жидкость, значительно возрастает.

Выделяют 3 основных вида патологического воздействия металлических включений в полости рта на окружающие ткани и организм в целом (А. И. Воложин, 1994; В. Т. Долгих, 2000):

Электрогальваническое воздействие — образование гальванических микротоков в результате разности потенциалов сплавов, находящихся в полости рта.

Токсико- химическое воздействие — химические процессы в полости рта, вызванные гальваническими токами, разрушают сплавы металлов (коррозия) с образованием окиси металлов, входящих в состав протезов.

Аллергическое воздействие — образующиеся продукты коррозии сплавов способны сенсибилизировать организм, вызывая различные аллергические реакции.

Когда металл протеза и электролит (слюна) контактируют, то металл всегда стремится отдать положительно заряженные ионы в раствор, сохраняя при этом принадлежащие ему электроны. В результате на металле возникает отрицательный заряд, что ведет к формированию разности потенциалов, величина которой напрямую зависит от природы сплава металла и качественного состава электролита — слюны и температуры в полости рта, при которой происходит химическая реакция. При этом каждый металл в составе сплава приобретает свой определенный потенциал.

Если в полости рта находится 2 металла с различными потенциалами, то образуется гальванический элемент. Эти микротоки можно измерить гальванометром. Характерной особенностью происходящих процессов в полости рта является то, что постоянно протекающие катодные или анодные реакции на металлических элементах ортопедических конструкций могут протекать равномерно на всем протяжении протеза или на каком-либо одном его участке поверхности. Химические реакции могут протекать преимущественно по катодному или преимущественно по анодному типу, причем, эти процессы происходят все на одном протезе! Такое обилие катодных и анодных реакций приводит к возникновению так называемого «вентиляционного элемента», когда образуется щель или зазор между металлической коронкой и облицовкой или стенкой зуба. В результате в щелевом зазоре происходит растворение, а на поверхности протекает катодная реакция. Анодные ионы металла направляются к катодным ионам металла, а в слюне при этом гидроксильные анионы и ионы металлов встречаются и выпадают в осадок продуктами коррозии. Скорость коррозии металла определяется наличием кислорода.

Иногда продукты коррозии бывают нерастворимыми. В таком случае дальнейшая коррозия замедляется и металл пассивируется, т. е. образуется пассивный слой. Полировка металлических конструкций способствует пассивации, а механическое воздействие, наоборот, приводит к активации химических процессов и разрушению пассивного слоя. При этом окисная пленка становится катодом, а обнаженные участки — анодом.

При наличии в полости рта разных (благородных и неблагородных сплавов), потенциалы металлов меняются — неблагородный (отрицательный потенциал) будет стремиться к повышению, а благородный сплав — к понижению, поскольку на неблагородных сплавах протекают преимущественно анодные реакции, а на благородных — катодные. Эти химические реакции влекут за собой отделение растворенных ионов металла из неблагородных сплавов и осаждение их на благородных сплавах в виде осадка, что приводит к изменению цвета последних. Решением этой проблемы будет полная замена неблагородных сплавов.

Кроме электрохимической реакции химические вещества, содержащиеся в протезных материалах, могут выступать в качестве гаптенов, которые, соединяясь с белками организма, образуют молекулу антигена, в ответ на которую может развиваться иммунный ответ. При этом металлические протезы, воздействуя на клетки СОПР, в частности, на тучные клетки, приводят к неспецифическому высвобождению гистамина — одного из основных медиаторов аллергического воспаления. В свою очередь, гистамин обладает модулирующими свойствами в отношении Th2-профиля лимфокинов и способствует формированию аллергического Th2-фенотипа, что ведет к различию соотношения CD4 / CD8 у лиц, пользующихся зубными металлическими протезами (S. Yamanaka, 2002).

Имея низкий молекулярный вес, большинство компонентов металлических сплавов, выступая в роли гаптенов и образуя полноценные антигены, способны индуцировать сенсибилизацию организма по типу контактных дерматитов, стоматитов, хейлитов, глосситов. Через кожу и СОПР аллерген проникает в организм в течение длительного времени. При вызываемой гаптеном аллергической реакции происходит транспортировка аллергена по кровотоку, затем наступает равномерное распределение очага экземы по всему организму. Для лиц с непереносимостью металлов могут быть провокационными и пищевые продукты, в состав которых входят ионы кобальта, хрома и никеля (М. Хеберле, 2003). Согласно статистическим оценкам, более четверти больных экземой реагируют на поступление никеля с пищей даже при его минимальном количестве 2,5 мг (нормой считается безопасное поступление никеля с продуктами в пределах 240–1000 мкг). Пищевая аллергия на металлы поддерживает непереносимость металлов зубных протезов или служит базой для формирования непереносимости с яркими проявлениями или является той самой последней каплей, когда запускается весь комплекс иммунологического ответа.

Выделяют 5 степеней сенсибилизации к химическим веществам:

V — очень сильную;

IV — сильную;

III — умеренную;

II — легкую;

I — слабую.

В качестве аллергологического теста используют соединение 1- хлор-2,4-динитро-бензен у мышей, дающий в 100 % максимальный уровень сенсибилизации. Экспериментально установлено, что ртуть, никель, хром, как составляющие сплавы зубных протезов, могут вызывать у животных сильную аллергическую реакцию (V, IV степень); кобальт и золото дают умеренный уровень сенсибилизации (III степень), а титан и серебро вызывают легкую аллергическую реакцию (II степень). Для алюминия отмечена слабая сенсибилизация у человека и отсутствие таковой у животных. Отсюда, лицам с отягощенным аллергологическим статусом следует использовать сплавы, вызывающие у животных II или I уровни реакции на металлы.

Наряду с сенсибилизирующими свойствами материалов отмечается и их токсическое, механическое и электропатогенетическое действие (А. И. Воложин и соавт., 2004; S. Yamanaka, 2002).

Клиника непереносимости сплавов металлов.

Реакция гиперчувствительности проявляется в виде местных субъективных ощущений (жжение, привкус металла или кислоты, сухость во рту, зуд) и объективных патологических симптомов (гиперемия, отек, петехиальные кровоизлияния, эрозии, афты, пузыри на слизистой оболочке полости рта (СОПР) или поражение и кожи). Кроме того, такая патология может сопровождаться нарушениями со стороны нервной системы (раздражительность, бессонница, эмоциональная лабильность, канцерофобия, обострение хронических заболеваний желудочно-кишечного тракта (ЖКТ), которые не купируются обычной терапией, и т. д.

Выделяют 3 синдрома клинических проявлений гиперчувствительности к нержавеющей стали в полости рта:

1-й синдром характеризуется отсутствием объективных признаков поражения слизистой, но присутствуют субъективные жалобы в полости рта: сухость во рту, зуд, чувство жжения или боли в языке, деснах, СОПР, наличие привкуса металла. Постоянный раздражитель в полости рта приводит к развитию психологических нарушений, пациенты становятся раздражительными, отмечают нарушение сна, в дневное время — общая слабость, недомогание, сонливость, иногда склонность к канцерофобии.

2-й синдром сочетает болевые ощущения в полости рта с наличием элементов поражения СОПР, причем эти проявления четко контурируются на прилегающие участки слизистой, языка или губ. Среди элементов поражения преобладают гиперемия, отек, папулезные, афтозные, эрозийные, иногда даже буллезные, реже — участки десквамации или кератоза.

3-й синдром — кроме сочетания субъективных жалоб и наличия патоморфологических элементов поражения на СОПР в патологический процесс вовлекается и кожа, на которой также появляются патологические элементы поражения — эритема, папулезный, буллезные и эрозийные элементы.

Таким образом, клинические аллергические проявления на компоненты сплавов металлов в полости рта имеют следующие признаки:

Изменение вкуса (от привкуса металла, кислоты, до изменения вкуса и ощущения горечи, соли);

Парестезии различных участков СОПР, губ и языка;

Локализованная или разлитая (но чаще в области контактирующих тканей) гиперемия, отек, эрозии или язвы.

Особенности организма, аллергологический статус пациента, интенсивность электрохимических реакций в ротовой полости и величины генерируемого электрического тока у каждого индивидуальны. Различными являются и последствия проявлений непереносимости сплавов металлов (табл. 1).

Папулезные высыпания в виде лихенизации СОПР, языка или слизистой губ, афтозные элементы, точечные кровоизлияния могут сочетаться с общими проявлениями аллергии замедленного типа (ринит, крапивница, дерматит или экзема).

Исследованиями (У. Р. Никифорчин і співав., 1998; Т. О. Кіріяк, М. М. Рожко, 1998) установлено, что влияние разности электрических потенциалов между металлами сказывается на состоянии микробиоценоза в полости рта. Доказано, что у лиц с металлическими протезами в полости рта наибольшее микробное обсеменение десневой жидкости отмечается в зубодесневой борозде в пришеечной области коронок и мостовидных протезов из нержавеющей стали или нержавеющей стали и защитного декоративного покрытия из нитрида титана. В пришеечной области коронок и мостовидных протезов из золота, металлокерамики или съемных зубных протезов количество микрофлоры значительно меньше с преимущественной контаминацией условно-патогенной и непатогенной флоры и отсутствием патогенных штаммов микрофлоры.

Установлено (У. Р. Никифорчин і співав., 1998), что под влиянием экзогенных и эндогенных факторов микрофлора полости рта претерпевает значительные изменения, которые влияют как на состояние микробиоценоза, так и на видовую изменчивость самих микробов, в результате чего последние могут сами становиться факторами агрессии и вызывать дестабилизацию процессов в полости рта.

При этом у лиц, пользовавшихся штампованно-паянными мостовидными протезами, происходит нарушение соотношения условно-патогенной и патогенной микрофлоры в сторону увеличения колонизации последних видов, в том числе увеличивается число колонийобразующих единиц (КОЕ) грибов рода Candida, клебсиелл, эшерихий и др., которые являются нетипичными для данной экологической ниши микроорганизмов.

На основании проведенных исследований авторы пришли к выводу, что протезирование с использованием металлов из нержавеющей стали или нержавеющей стали и защитного декоративного покрытия из нитрида титана может служить фактором риска и способствовать развитию явлений дисбактериоза в полости рта, обострению заболеваний тканей пародонта и СОПР, вызывая при этом реакцию со стороны органов ЖКТ.

Таким образом, у лиц с непереносимостью металлических протезов в полости рта формируется порочный круг, выход из которого является длительным процессом, требующим комплексного лечения и усердия многих врачей — стоматолога, гастроэнтеролога, невропатолога и др. и выполнения всех рекомендаций лечащих врачей самим пациентом.

Диагностика непереносимости сплавов металлов.

В связи с отсутствием патогномонических клинических симптомов непереносимости сплавов металлов диагностика затруднена. Используя разность электрических потенциалов между металлами, проводят диагностирование с помощью аппарата гальванометра. Замеры проводят в точках отдельных частей ортопедических конструкций (коронки, места пайки, промежуточные участки) между металлами, а также между металлом и языком, металлом и СОПР. Следует заметить, что степень выраженности патологических изменений не всегда равняется или пропорциональна величине разности потенциалов. При этом величина разности потенциалов достоверно не указывает на степень коррозийных процессов. Физиологически переносимой считается разность потенциалов в пределах 70–100 мВ (В. Т. Долгих и соавт., 2000).

Для быстрой оценки контактной аллергии на металлические сплавы и идентификации аллергенного металла используют ряд скринирующих методов определения аллергенного эпитопа in vivo и in vitro. Диагностика in vivo включает использование скарификационного, «патч-теста» и введение материала в полость рта. In vitro проводится тест на пролиферацию лимфоцитов, торможение миграции макрофагов, определение субпопуляций Т-лимфоцитов (клетки CD4+ и CD8+) и лимфоцитарной реактивности (определение рецепторов IL2 и продукции IFN-γ). В клинике в основном используют «патч-тест» in vivo и тест стимуляции лимфоцитов in vitro.

Таблица 1. Клинические проявления непереносимости сплавов металлов

Клинические проявления Сплавы металлов

КХС —

кобальто-хромовый НХС —

никель-хромовый ПС —

палладиевый ЗС —стоматоло-

гическое золото

Гиперемия

Локализованная

Локализованная,

распространенная

Отек

Отек

Пастозность, отек лица,

век, языка

Отек

Отек близлежащих

тканей

Папулы

Папулезная сыпь

на СОПР — лихенизация

КПЛ — Красный

плоский лишай

-

Эрозии, язвы

Одиночные или множественные

-

Эрозии локализованные

Афты

Одиночные или множественные

-

-

Нарушения вкуса

+

+

+

-

Пузыри

±

±

-

-

Гиперплазия СОПР

-

Ограниченные или распространенные участки

-

-

Крапивница

+

+

-

-

Петехии на СОПР

Единичные или сгруппированные

-

-

Стоматит

Контактный, аллергический, катаральный

-

Хейлит

Катаральный

-

Катаральный

Глоссит

Десквамативный

Гиперемия,

отпечатки зубов

Десквамативный

Гиперемия,

отпечатки зубов

Боль

+

+

+

+

Кожные

проявления

Экзема,

дерматит

Экзема,

дерматит

Контактный

дерматит

-

Жжение

+

+

+

+

Привкус металла

+

+

+

-

Сухость во рту

+

Сухость или

гиперсаливация

±

±

Гиперсаливация

±

±

±

Диагностическую ценность представляют аллергические накожные (эпикутанные) пробы «патч-тест»: капельный, компрессный скарификационно-пленочный, компрессно-скарификационный методы с использованием специального пластыря и стандартизованных коммерческих аллергенов, в которых концентрация аллергенов достаточна для проникновения надпороговой дозы аллергена в кожу. В качестве стандартных аллергенов применяют 0,1 % раствор двухлористой ртути; 2 % раствор хлорида золота; 0,5 % раствор бихромата калия; 0,25–1,0 % раствор хромата калия; 5 % сульфат никеля в вазелине; 2 % раствор хлорида кобальта; 1 % хлорид палладия в вазелине и др. (всего 16 коммерческих аллергенов металлов).

Несколько миллиграммов аллергена смешивают с минеральным маслом и взбалтывают, затем смачивают кусочек льняной ткани, помещают ее в резиновую присоску и прикрепляют к слизистой щеки на 20–25 минут. При наличии гиперемии, отечности или появления других патологических элементов проба считается положительной. Однако эпикутанные пробы могут давать и ложный ответ. Отсутствие аллергических проявлений на СОПР после постановки пробы не является исключением аллергии на металл у пациента.

Наряду с эпикутанными тестами проводят диагностику и эпимукозным тестированием (надслизистое тестирование). С этой целью на верхнюю челюсть помещают пластинку из бесцветной пластмассы. В дистальной части пластинки готовят ложе для образцов сплавов металлов из нержавеющей стали. Пластинку с образцами сплавов металлов помещают в полость рта на 7 суток, пластинка извлекается изо рта только для приема пищи или проведения гигиенических процедур. Контрольные осмотры проводят 1 раз в день, при этом учитывают жалобы больного и появление каких-либо патологических изменений СОПР в месте соприкосновения СОПР и опытного образца сплава. Тест считается положительным, когда пациент ощущает жжение, зуд слизистой и / или языка, гиперемия слизистой в месте соприкосновения сплава, а также появление крапивницы, дерматита и / или экземы на коже. Выявлено, что «патч-тест» на кобальт, никель и цинк у женщин выше, чем у мужчин. Значительно чаще положительный «патч-тест» отмечался у лиц с сопутствующей лекарственной, пищевой, пыльцевой аллергией, в этом случае они составляют группу риска и к сплавам металлов. Эпимукозный тест проводят до протезирования при наличии в анамнезе отягощенного аллергологического статуса.

Методы иммунодиагностики in vitro имеют больше достоинств по сравнению с провокационными накожными пробами — это и безопасность применения, и возможность использования различных аллергенов одновременно в пробирках, и объективность результатов диагностики. Для этой диагностики используют методы:

Реакция агломерации лейкоцитов — РАЛ (определяют показатель агломерации лейкоцитов с аллергенами — хромом, никелем, кобальтом.

Тест повреждения нейтрофилов по В. А. Фрадкину (1985) — ППН (показатель повреждения нейтрофилов), который выявляет аллергию сразу к трем металлам — хрому, никелю, кобальту.

Реакция бласттрансформации лейкоцитов — РБТЛ.

Реакция пассивной гемагглютинации.

Реакция дегрануляции базофилов и тучных клеток.

Реакция связывания комплемента с хлоридами кобальта, никеля, хрома.

Многие пациенты приобретают иммунологическую чувствительность к ртути и никелю в результате ежедневного контакта с этими металлами через слизистую оболочку полости рта или кожу. Иммунологическая толерантность развивается в этих случаях относительно легко (например, при контакте СОПР с никелем при ортодонтическом лечении). Однако, иммунологическая толерантность может быть нарушена в результате неблагоприятных воздействий на организм (стресс, усталость, высокий уровень экспозиции металлов и т. д.), провоцирующие возникновение аллергии на металлы в полости рта.

Метод электропунктуры с использованием хромникелевой нержавеющей стали имеет наибольшую диагностическую ценность накануне ортопедического лечения металлическими конструкциями у лиц с отягощенным аллергологическим статусом или для выделения групп риска.

Методом электропунктуры можно проводить диагностику с целью выделения групп риска (Б. П. Марков и соавт., 1998):

Больные с патологией ЖКТ;

Больные с сопутствующей патологией сердечно-сосудистой системы (ССС);

Больные с заболеваниями нервной системы (НС);

Больные с отягощенным аллергологическим статусом;

Женщины с гипоэстрогенемией и нуждающиеся в протезировании, дополнительном или повторном перепротезировании;

Лица, имеющие жалобы на изменение вкуса или другие симптомы при наличии в полости рта сплавов металлов в ортопедических конструкциях;

Пациенты, контактирующие с металлами на производстве, в быту или использующие украшения из металлов, сплавов металлов, и ощущающие дискомфорт в полости рта.

Использование метода рефлексодиагностики включает в себя и диагностика по Фоллю. К ее преимуществам относится неинвазивность и безопасность исследования.

В своей практике для диагностики непереносимости металлов в полости рта мы применяли метод гальванометрии и диагностики по Фоллю. При этом гальванометрией устанавливали наличие непереносимости металлов у пациента, а методом Фолля проводили подбор сплавов металлов для последующего перепротезирования. Для этого после установления факта непереносимости металлов проводили снятие ранее изготовленных металлических ортопедических конструкций, назначали курс гипосенсибилизирующей, антиоксидантной и иммуностимулирующей терапии. При диагностировании сопутствующего дисбиоза в полости рта назначали сорбенты и лечение пробиотиками.

Отсюда, для диагностики непереносимости металлов зубных протезов, следует уделять внимание сбору анамнеза, сопоставлению клинических симптомов и данных лабораторных исследований. При этом следует помнить, что такие же клинические проявления и жалобы могут предъявлять и пациенты с хроническими заболеваниями ЖКТ, психоневрологическими заболеваниями. Еще более затруднена диагностика, если непереносимость металлов сочетается с этими заболеваниями или вызывает их обострения.

Лечение непереносимости металлов.

Лечение непереносимости металлов зубных протезов зависит от причины ее возникновения. При возникновении непереносимости отдельных компонентов сплавов металлов, следует удалить все ортопедические конструкции с наибольшим отрицательным электродным потенциалом (чаще хром, железо, никель) и заменить зубные протезы на конструкции с одним металлом или протезами из благородных сплавов (при отсутствии непереносимости последних). Если причиной является аллергия на сплавы металлов, все ортопедические конструкции подлежат полной замене на другой сплав. Подбор других сплавов металлов следует проводить по методу Фолля.

Профилактика непереносимости металлических протезов.

Однозначного решения проблемы не существует. Наряду с тщательным сбором анамнеза, следует проводить предварительное тестирование доступными методами для исключения возникновения аллергии на сплавы металлов. При возникновении ложноположительных результатов тестирования, следует применять более специфические методы in vitro — тест стимуляции продукции интерферона-γ, тест фиксации рецептора IL2 и определение субпопуляций Т-лимфоцитов.

Решая проблему биосовместимости материалов в стоматологии, следует соблюдать требования к физико- химическим характеристикам сплавов металлов: они должны обладать низкой степенью сенсибилизации и раздражения, иметь минимальное количество выделяемого в слюну металла из металлического протеза и иметь минимальную частоту положительных «патч-тестов».

Из других мероприятий следует отметить технологические моменты изготовления металлических протезов. С этой целью следует рекомендовать соблюдение всех технологических моментов изготовления металлических протезов, применять бесприпойные и / или цельнолитые ортопедические конструкции (хотя и при литье может иметь место ликвация — неоднородная кристаллизация сплава, снижающая его антикоррозийную стойкость).

При невозможности подобрать индифферентный сплав металлов, следует поменять план ортопедического лечения пациента с исключением использования сплавов металлов.

Для лиц, имеющих аллергические реакции на металлы зубных протезов и склонность к аллергии на продукты (какао, шоколад, соевые бобы, овсяные хлопья — содержащие большое количество никеля; ароматизированные пирожные, напиток «Кола», цитрусовые, аперитивы, подсластитель цикламат и др. — содержащие ионы кобальта и хрома), необходимо не только исключить прием этих пищевых продуктов, но и рекомендовать использование посуды из эмали, стекла и пластика, поскольку все овощи впитывают в себя металл кастрюли и в них может накапливаться значительное количество ионов металлов. Употребление продуктов из пищевых банок не является опасным, поскольку жестяная банка покрыта изнутри защитным слоем эпоксидной или акриловой смолы. Кроме прямых источников поступления металлов в организм, лицам с отягощенным аллергологическим статусом следует обращать внимание и на наличие консервантов, которые содержатся в продуктах. Наиболее опасные реакции непереносимости для организма могут представлять сульфиты (Е 220-Е227), вызывающие крапивницу, отек Квинке, шок или приступ бронхиальной астмы.

20. Аллергодиагностика in vitro

Оглавление

1. CAST - оценка активации базофилов аллергенами in vitro

• Активация базофилов специфическими АлГ

• Описание технологии

• Области применении CAST®

2. Определение специфических IgE-(IgG) антител

Сокращения раздела

АлГ – аллерген

АлР – аллергическая реакция

ГНТ – гиперчувствительность немедленного типа

ЛТ – лейкотриены

НПВС – нестероидные противовоспалительные средства

ТК – тучные клетки

Около 30% европейской популяции сталкиваются в своей жизни с проявлениями аллергии. Аллергия – хроническое заболевание, часто ассоциированное с высокой морбидностью и стоимостью лечения, ставшее значительной социально-экономической проблемой для общества. Расходы на лечение больных достигают уже десятков миллиардов евро только в Европе. Отсюда существует острая необходимость в эффективном контроле пациентов, для чего жизненно важна полная и точная диагностика. Основные виды аллергии, являющиеся приоритетными с точки зрения современной медицины, – это анафилактические реакции, которые связаны с угрозой жизни пациента. Они выявляются в Европе с частотой 8-10 на 100 тысяч населения. В основном причиной анафилаксии являются укусы перепончатокрылых насекомых (60% случаев), лекарства (20%) и пищевые аллергены (10%).

На сегодняшний день аллергологи располагают следующими средствами специфической диагностики гиперчувствительности немедленного типа (ГНТ)/IgE-опосредованной реакции (анафилаксия, риноконъюнктивиты, астма, крапивница/отек Квинке): кожные тесты, определение специфических IgE-антител (sIgE) и провокационные тесты in vivo для подтверждения. Несмотря на большой прогресс в диагностике аллергических состояний, специалисты часто сталкиваются с проблемой подтверждения неясных результатов кожных тестов и определения sIgE независимым методом. К тому же, некоторые виды аллергии (на лекарственные средства, пищевые добавки) очень плохо выявляются кожными тестами или серологически (sIgE), для них в настоящее время достоверны только дорогостоящие и опасные провокационные тесты.

CAST –оценка активации базофилов аллергенами in vitro (иммуноферментный анализ)

Активация базофилов специфическими АлГ

Базофилы и тучные клетки (Тк) играют центральную роль в ГНТ. При контакте аллергенов (АлГ) с молекулами IgE на специализированных эффекторных клетках базофилах и Тк происходит каскад ферментных реакций, приводящий к дегрануляции и высвобождению медиаторов из гранул (гепарин, гистамин). Эти реакции приводят также к синтезу и секреции лейкотриенов (ЛТ), цитокинов, медиаторов воспаления, вызывающих симптомы аллергии. ЛТ являются мощными бронхоконстрикторами, они вовлечены в повышение проницаемости сосудов и гиперсекрецию слизи, высвобождение нейропептидаз, влияют на активацию эозинофилов, гипертрофию гладкой мускулатуры бронхов и депозицию коллагена.

ЛТ синтезируются также и в случае псевдоАлР, т.е. реакций, проходящих без участия IgE. ПсевдоАлР по клинической симптоматике сходны с истинными IgE-опосредованными реакциями, но отличаются по механизму развития. Они не связаны с выработкой антител или участием сенсибилизированных лимфоцитов, в патогенезе этих реакций выделяют только две стадии – патохимическую и патофизиологическую. В псевдоАлР происходит активация базофилов и неспецифическое высвобождение медиаторов (гистамина, ЛТ, простагландинов) через триггерные механизмы: активацию комплемента, IgG-опосредованную гиперчувствительность или через ауто-IgE-антитела и неиммунные реакции, приводящие к прямой активации базофилов.

Некоторые клеточные аллергические тесты уже доступны много лет, подобно прямой микроскопической оценке дегрануляции базофилов по окраске щелочными красителями или определению концентрации освобожденного гистамина из базофилов после стимуляции. Эти методы имеют ряд известных ограничений, препятствующих их широкому распространению (воспроизводимость, специфичность, чувствительность). Компанией Buhlmann Laboratories (Швейцария) был разработан тест стимуляции базофилов in vitro – CAST.

Описание технологии

Технология CAST (Cellular Antigen Stimulation Test, тест антигенной стимуляции клеток) основана на определении сульфидоЛТ (LTC4, LTD4, LTE4), секретируемых примированными IL-3 базофилами под действием АлГ in vitro. Его также называют провокационным тестом in vitro. Метод запатентован (авторы – проф. De Weck и д-р Sainte-Laudy). Благодаря синтезу сульфидоЛТ (sLT) de novo анализ CAST® обладает высочайшей специфичностью по сравнению с классическим тестом высвобождения гистамина.

Протокол исследования включает три этапа: выделение популяции лимфоцитов из стабилизированной ЭДТА крови (кровь стабильна 24 часа при температуре 2-8°C!), стимуляция суспензии лимфоцитов специфическими АлГ и иммуноферментное определение концентрации синтезированных базофилами во время стимуляции ЛТ.

Компанией Buhlmann Laboratories также был разработан цитометрический вариант теста стимуляции базофилов – FLOW-CAST®. Этапы выделения лимфоцитов и стимуляции АлГ для обоих вариантов, иммуноферментного и цитометрического, идентичны. Но вместо sLT в третьем этапе FLOW-CAST® определяет количество активированных базофилов, экспрессирующих на поверхности антиген CD63 (gp53) в ответ на стимуляцию АлГ. Тест высоко чувствителен и специфичен, особенно при лекарственной гиперчувствительности.

В качестве позитивного контроля для каждого образца используют моноклональные антитела к высоко аффинному рецептору для IgE (FcεRI), обеспечивающие имитацию связывания IgE-антител с рецептором на мембране базофилов, что повышает специфичность метода.

Чтобы получить надежные и воспроизводимые результаты, очень важно правильно подобрать АлГ для реакции и их дозировку, т.к. некоторые из них способны неспецифически взаимодействовать с базофилами in vitro (лекарства, пищевые добавки, др.). Большой спектр АлГ, предлагаемых компанией Buhlmann Laboratories, тщательно подобран и протестирован для этих целей.

Области применении CAST®