Методические указания для студентов к практическому занятию № 24

Тема: Грамположительные кокки (стафилококки и стрептококки).

Цель: Изучение основных элементов микробиологических исследований при диагностике заболеваний, вызванных грамположительными кокками.

Модуль 2. Специальная, клиническая и экологическая микробиология.

Содержательный модуль № 12. патогенные прокариоты и эукариоты.

Тема занятия. Микробиологическая диагностика заболеваний, вызванных грамположительными кокками.

Актуальность темы.

1. Стафилококки. СемействоMicrococcaceae, родStaphylococcus. Все виды стафилококков представляют собой округлые клетки диаметром 0,5-1 мкм. В мазке располагаются обычно несимметричными гроздьями («гроздья винограда»), но встречаются одиночные клетки, пары клеток. Грамположительны. Спор не образуют, жгутиков не имеют. У некоторых штаммов можно обнаружить капсулу. Могут образовыватьL-формы. Клеточная стенка содержит большое количество пептидогликана, связанных с ним тейхоевых кислот, протеин А.

Стафилококки хорошо растут на простых средах (рН 7,0-7,5); факультативные анаэробы. На плотных средах образуют гладкие круглые выпуклые колонии с различным пигментом. Пигмент не имеет токсономического значения. Продуцируют сахаролитические и протеолитические ферменты. Стафилококки вырабатывают гемолизины, фибринолизин, фосфатазу, β-лактамазу и др.

Стафилококки очень пластичны: быстро вырабатывают устойчивость к антибактериальным препаратам. Существенную роль в этом играют плазмиды, передающиеся с помощью трансдукцирующих фагов от одной клетки к другой. R-плазмиды детерминируют устойчивость к одному или нескольким антибиотикам, в т.ч. и за счет экстрацеллюлярной продукции β-лактамазы – фермента, разрушающего пенициллин, разрывающего его β-лактамное кольцо.

Антигенная структура – сложная и вариабельная. Известно около 30 антигенов. Протеин А обладает свойством прочно связываться с Fc-фрагментом любой молекулыIgG. При этомFab-фрагмент молекулы иммуноглобулина остается свободным и может соединяться со специфическим антигеном. В связи с этим свойством протеин А нашел применение в диагностических методах (коагглютинация).

При микробиологической диагностике отнесение культуры к роду стафилококков основывается на типичной морфологии и окраске клеток, их взаимном расположении и анаэробной ферментации глюкозы. Для видовой идентификации используют в основном 3-4 теста: продукцию плазмокоагулазы, лецитовителлазы, анаэробную ферментацию маннита и глюкозы. В сомнительных случаях проводят тесты на наличие ДНК-азы, α-токсина.

Возбудителем стафилококковых инфекций чаще бывает S.aureus, несколько реже -S.epidermidis, очень редко -S.saprophyticus. Стафилококки являются представителями нормальной микрофлоры человеческого тела, поэтому микробиологическая диагностика стафилококковых инфекций не может ограничиваться выделением и идентификацией возбудителей; необходимы количественные методы исследования, т.е. определение микроорганизмов в пробе.

Лечение стафилококковых инфекций обычно проводят антибиотиками и сульфаниламидными препаратами. При резистентности стафилококков к большинству химиотерапевтическим препаратам используют антитоксическую противостафилококковую плазму или иммуноглобулин, полученные из крови доноров, иммунизированных стафилококковым анатоксином. Для активной иммунизации может быть использован адсорбированный стафилококковый анатоксин.

2. Стрептококки. СемействоStreptococcaceae, родStreptococcus. В родStreptococcusвходят более 20 видов, среди которых есть представители нормальной микрофлоры человеческого тела и возбудители тяжелых инфекционных эпидемических заболеваний человека.

Стрептококки – мелкие (меньше 1 мкм) шаровидные клетки, располагающиеся цепочками или попарно, грамположительны, спор не образуют, неподвижны. Большинство штаммов стрептококков образуют капсулу, состоящую из гиалуроновой кислоты. Клеточная стенка содержит белки, углеводы и пептидогликаны. Легко переходят в L-формы.

Растут на средах, обогащенных углеродами, кровью, сывороткой, асцитической жидкостью. На плотных средах обычно формируют мелкие серые колонии. На жидких средах для стрептококков характерен придонный рост. Стрептококки – факультативные анаэробы. На кровяном агаре вызывают α-гемолиз (зеленящий) и β-гемолиз (полный). Погибают при пастеризации при 56⁰С в течение 30 мин.

Генетический обмен возможет за счет трансформации и трансдукции, но не конъюгации. Устойчивость к антибиотикам вырабатывается медленно.

На основе полисахаридного антигена стрептококки делятся на серогруппы. Стрептококки группы А вырабатывают более 20 внеклеточных веществ, обладающих антигенной активностью. Наибольшее значение в патогенезе стрептококковых инфекций имеют: стрептокиназа (фибринолизин), ДНК-аза, гиалуронидаза, эритрогенин.

Стандартный разведенный эритрогенин используют при постановке внутрикожной пробы (проба Дика) для выявления чувствительности к этому токсину (восприимчивость к скарлатине).

3. Пневмококки–Streptococcuspneumoniae– грамположительные диплококки, обычно ланцетовидные или располагающиеся в виде цепочек, имеющие полисахаридную капсулу, которая позволяет легко «типировать» их специфическими антисыворотками. Пневмококки неподвижны, спор не образуют; факультативные анаэробы. При культивировании на искусственных питательных средах теряют капсулу, переходят изS- вR-форму. Хорошо растут на кровяных и сывороточных средах.

Иммунитет к пневмококковой инфекции является типоспецифическим. Пневмококки чувствительны ко многим антибактериальным препаратам, включая пенициллины.

Конкретные цели:

• Трактовать методики приготовления бактериологического препарата и окрашивание его по Граму;

• Трактовать результаты микроскопического исследования микроорганизмов;

• Делать выводы по микроскопии демонстрационных бактериологических препаратов;

• Делать посев исследуемого материала на питательные среды;

• Трактовать результаты бактериологического исследования микроорганизмов.

Уметь:

• Охарактеризовать колонии, образованные стафилококком или стрептококком на МПА в чашке Петри;

• Приготовить мазок, окрасить по Граму, промикроскопировать, зарисовать;

• Идентифицировать выделенную культуру по морфологическим, культуральным, биохимическим свойствам, пигментообразованию.

Теоретические вопросы:

1. Морфологические, культуральные, биохимические свойства стафилококков и стрептококков.

2. Принципы классификации стафилококков (эпидермальные, золотистые) и стрептококков.

3. Заболевания, вызванные этими микроорганизмами.

4. Распространение грамположительных кокков в природе. Потенциально-патогенные.

5. Носительство стафилококков.

6. Пути заражения, патогенез.

7. Схема микробиологической диагностики инфекционных заболеваний, вызванных грамположительными кокками.

Практические задания, используемые на занятии:

1. Приготовление микропрепаратов из чистых культур стафилококков, стрептококков.

2. Окраска микропрепаратов по Граму.

3. Микроскопия микропрепаратов из чистых культур бактерий, их анализ и зарисовывание в протокол.

4. Микроскопия демонстрационных препаратов, зарисовывание их в протокол.

5. Разбор и запись схем лабораторной диагностики инфекционных заболеваний, вызванных грамположительными кокками.

6. Оформление протокола.

Литература:

1. Пяткін К.Д., Кривошеїн Ю.С. Мікробіологія з вірусологією та імунологією.– Київ: Вища школа, 1992.– 431с.

2. Воробьев А.В., Быков А.С., Пашкола Е.П., Рибакова А.М. Микробиология.– М.: Медицина, 1998.– 336с.

3. Медицинская микробиология /Под редакцией В.И. Покровского.– М.: ГЄОТАР-МЕД, 2001.– 768с.

4. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология /Под редакцией академика А.А. Воробьева,- М.: Медицинское информационное агентство, 2004.– 691с.

5. Конспект лекции.

Дополнительная литература:

1. Збірник завдань для підготовки до тестового екзамену Крок-1. Загальна лікарська підготовка.– Київ: „Медицина”, 2004.- С. 300-333.

2. Методические указания для преподавателей к практическим занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии.– Харь-ков,1986.– 125с.

3. Сборник тестовых заданий для самоподготовки по медицинской микробиологии и вирусологии.– Харьков, 2005.– 28с.

Короткие методические указания к работе на практическом занятии:

В начале занятия проводиться проверка уровня подготовки студентов к занятию.

Самостоятельная работа складывается из исследования материала, полученного от больного:

1. Приготовление мазков-препаратов, окраска их по Граму, микроскопия и оценка результатов бактериоскопического метода исследования.

2. Микроскопическая характеристика колоний, которые выросли на МПА в чашке Петри.

3. Изучение характера изменения среды (сахарный бульон) при росте в нем микроорганизмов – возбудители сепсиса (стафилококков) после посева крови больного. Сравнение с внешним видом незасеянной среды в колбе.

4. Изучение биохимических свойств стафилококка по пестрому ряду.

5. Разбор и запись схем лабораторной диагностики инфекционных заболеваний, вызванных грамположительными кокками.

В конце занятия проводиться тестовый контроль и анализ итогов результатов самостоятельной работы.