1.Препараты сполоснуть 2x SSC.

2.Провести окрашивание рабочим раствором красителя:

3.Сполоснуть 2х SSC.

4.Заключить в фотозащитный раствор и исследовать под микроскопом.

Иногда удобно добавить краситель непосредственно в заключающую среду (Протокол 2.2.9). Для этой цели подходят красители, слабо флуоресцирующие в водных растворах, такие как DAPI или PI, или димерные красители, такие как TOTO-1, дающие яркий флуоресцентный сигнал только в том случае, если произошло взаимодействие молекулы красителя с нуклеиновой кислотой.

Протокол 2.2.9. Совмещенная с заключением окраска нуклеиновых кислот

Концентрированный раствор DAPI: 0,5 мг/мл водный раствор, хранить в темноте при -20оС.

Концентрированный раствор PI: 1 мг/мл водный раствор, хранить в темноте при -20оС.

Концентрированный раствор хромомицина А3: 0,5 мг/мл водный раствор,

оставить на 1 неделю при 4оС в темноте для созревания.

1.Добавить краситель непосредственно в фотозащитную заключающую среду: DAPI – 50 нг/мл; PI – 1 мкг/мл; хромомицин А3 – 20 мкг/мл.

2.Заключить препараты в подготовленную среду с красителем и оставить в темной коробочке при 4оС на несколько часов (для DAPI и PI) или на несколько дней, вплоть до 2 недель (для хромомицина А3).

3.Исследовать препараты под микроскопом.

Использование парарозанилина, акрифлавина или аурамина О в качестве цветного реактива в реакции Фельгена позволяет производить количественную оценку ДНК на препарате. Красители OliGreen, PicoGreen и RiboGreen дают возможность проводить количественную оценки ДНК (одно и двунитевой) и

РНК в водных растворах, а система SYTO RNASelect Green Fluorescent Cell Stain (Molecular Probes) селективно окрашивает РНК на препаратах.

Для прижизненного окрашивания организмов используют водные растворы акридинового оранжевого, дигидроэдидиума, SITS, диацетата флуоресцина, SYNTOX и DAPI, поскольку для получения детектируемого свечения достаточно использовать эти флуорохромы в очень низких концентрациях

(Протоколы 2.2.10-1.1.12).