ЗАНЯТИЕ № 7

ТЕМА: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ ХИМИОТЕРАПИИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ИНФЕКЦИЙ. АНТИСЕПТИКА.

ПЕРЕЧЕНЬ КОНТРОЛЬНЫХ ВОПРОСОВ

1. Противомикробные мероприятия. Влияние экологических факторов на микробы. Действие физических факторов (температуры, высушивания, излучений, ультразвука, осмотического давления). Действие химических факторов.

2. Цели, способы, средства и объекты стерилизации и дезинфекции в медицинской и микробиологической практике. Контроль качества дезинфекции. Контроль стерилизации и стерильности. Способы проведения.

3. Антисептика. Определение. Антисептические средства, требования, происхождение, свойства, группы, механизмы действия на микробы. Типы антисептики. Терапевтическая антисептика. Профилактическая антисептика.

4. Химиотерапевтические препараты. Свойства. Основные группы химиопрепаратов. Механизмы действия на бактерии. Понятие об избирательности и "мишенях" действия.

5. Органические и неорганические соединения металлов и металлоидов. Сульфаниламидные препараты. Препараты нитрофуранового ряда. Противогрибковые, противовирусные, противопаразитарные химиопрепараты.

6. Антибиотики. Определение. Продуценты антибиотиков. Синтетические и полусинтетические антибиотики.

7. Основные группы антибиотиков по химической структуре. Бета-лактамные антибиотики Тетрациклины. Аминогликозиды. Макролиды и азолиды. Анзамицины (рифампицины). Левомицетин. Фторхинолоновые антибиотики. Линкомицин. Полимиксины. Гликопептиды

8. Классификация антибиотиков про механизму действия на бактериальную клетку.

9. Механизмы устойчивости микроорганизмов к антибактериальным препаратам.

10. Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам и другим химиопрепаратам. Техника постановки, учета и оценки чувствительности методом дисков, Е-теста, серийных разведений.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА

1► Впишите в таблицу возможные способы и режимы стерилизации указанных объектов:

Стерилизуемые объекты	Способы и режимы стерилизации
Бактериологические петли	Стерилизация пламенем мгновенно
Перевязочный материал (марля, вата, бинт)	Стерилизация паром под давлением 2 атм (132ºС) 20 минут
Резиновые, пластиковые изделия	Стерилизация паром под давлением 1 атм (121ºС) 45 минут, газовая стерилизация (окись этилена),
Стеклянные изделия	Стерилизация сухим жаром 180ºС 1 час
Основные питательные среды (МПА, МПБ)	Стерилизация паром под давлением 1 атм (121ºС) 20 минут
Питательные среды, содержащие белок	Дробная стерилизация (тиндализация) 56ºС в течение часа 5-6 суток подряд
Растворы, содержащие вещества, которые инактивируются при температуре свыше 60оС	Стерилизация фильтрованием, Ɣ излучением

Методы определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам

Диско-диффузионный метод

На поверхность плотной питательной среды, засеянной сплошным газоном исследуемой культурой, накладывают не более 6 дисков, пропитанных антибиотиками, на расстоянии не менее 2 см друг от друга. Регистрация результатов проводится через 18-24 часов инкубирования в термостате по диаметру зоны отсутствия роста вокруг дисков с антибиотиками. Наличие роста вокруг диска свидетельствует о нечувствительности данного микроба к антибиотику. Для интерпретации результатов используются специальные таблицы.

Рисунок 1. Определение чувствительности

микроорганизмов диско-диффузионным методом:

1 – микроорганизм чувствителен к антибиотику;

2 – микроорганизм умеренно резистентен к антибиотику;

3 – микроорганизм устойчив к антибиотику.

Метод Е-тестов Принцип метода. Определение чувствительности микроорганизма проводится аналогично тестированию диско-диффузионным методом. Отличие состоит в том, что вместо диска с антибиотиком используют полоску Е-теста, содержащую градиент концентраций антибиотика от максимальной к минимальной. В месте пересечения эллипсовидной зоны подавления роста с полоской Е-теста получают значение минимальной подавляющей концентрации (МПК).

Рисунок 2. Определение чувствительности микроорганизмов с помощью Е-тестов

Метод серийных разведений в бульонной среде Берут 9 пробирок, содержащих 1 мл бульона Мюллер-Хинтона. Одна из них служит контролем роста бактерий, а в остальных готовят двукратные серийные разведения антибактериального препарата. Например, 32 мг/л – 1-я, 16 мг/л – 2-я, 8 мг/л – 3-я, 4 мг/л – 4-я и т.д. Затем в каждую пробирку вносят 0,1 мл испытуемой бактериальной суспензии. Посевы инкубируют при 37°С в течение 18-24 ч., отсутствие помутнения среды свидетельствует о задержке роста бактерий в присутствии данной концентрации препарата.

Рисунок 3. Определение значения МПК методом разведения в жидкой питательной среде

Минимальная подавляющая концентрация (МПК) – наименьшая концентрация антибиотика (в мкг/мл или мг/л), которая in vitro полностью подавляет видимый рост бактерий.

2► Определение чувствительности разных штаммов стафилококков к антибиотикам методом стандартных дисков

Антибиотик	Зона подавления роста, мм	Характеристика штамма
1. Оксациллин
2. Ко-тримоксазол
3. Рифампицин
4. Эритромицин
5. Ванкомицин
6. Ципрофлоксацин

Исследуемая культура является чувствительной (S), умеренно устойчивой к (I), устойчивой (R) _.

Достоинства метода: Легко воспроизводимый метод Недостатки метода: качественный метод, не позволяет определить МПК препарата./

3►Определение минимальной подавляющей концентрации (МПК) пенициллина методом серийных разведений.

Вывод: МПК пенициллина для исследуемого штамма составляет (см . рисунок № 3) 4 мг/мл

Достоинства метода: количественный , позволяет определить МПК препарата

Недостатки метода: трудновоспроизводимый метод

4►Выявление и регистрация антагонистического действия разных видов бактерий.

На чашку с МПА штрихом по диаметру засевается микроб-антагонист и перпендикулярно к нему тест-штаммы. Учет результатов проводится через сутки после посева. Наличие и степень антагонистического действия определяют по величине зон задержки роста тест-культур.

Штриховой посев Васillus polymyxa

Вывод: наибольшее антагонистическое действие выявлено к тест-штаммам (укажите виды)

P.aeruginosae, E.coli, нет антагонизма к S. aureus