- •1.Метод ферментативного определения глюкозы в сыворотке крови
- •2. Определение общего белка в сыворотке крови биуретовым методом
- •7.Метод ферментативного определения мочевины в сыворотке крови
- •4. Метод ферментативного определения общего холестерина в сыворотке крови.
- •5.Метод ферментативного определения триацилглицеринов в сыворотке крови
- •8. Бензидиновая проба на кровь
- •9. Качественная реакция на сахар в моче
- •10.Качественная р-ция на кетоновые тела в моче
- •11. Качественная реакция на фенилпировиноградную кислоту (проба Фелинга)
- •12.Определение примесей крови в моче методом ’’сухой” химии при помощи тест-полосок фирмы boehRiNger mannheim
- •14.Качественное определение белка в моче (Проба Геллера)
10.Качественная р-ция на кетоновые тела в моче
принцип р-ции:Ацетон и ацетоуксусная к-та в щелочной среде образуют с нитропруссидом натрия оранжево-красное окрашивание(проба Легаля). После подкисления концентрированной уксусной к-той образуется соединение вишнёвого цвета.
Реактивы,исследуемый материал: 1.моча 2.раствор нитропруссида натрия,100г/л. 3.Концентрированная уксусная к-та.4.Раствор едкого натра,100г/л.
диагностическое значение:Нормальная моча содержит незначительное колличество кетоновых тел (20-50 мгв сутки), которые не обнаруживаются обычными качественными пробами. Наличие кетоновых тел в моче называется кетонурия. Кетоновые тела - это продукты неполного окисления липидов и белков:бета - гидрооксимасляная кислота, ацетоуксусная кислота и ацетон. Кетоновые тела синтезируются в печени. Их определение имеет наибольшее значение для диагностики метаболической декомпенсации сахарного диабета. Обычно кетонурия появляется при уровне глюкозы в крови 13,5- 16,7 ммоль/л и/или при глюкозурии более 3%,. Кетонурия может определяться при: 1.некомпенсированном диабете, 2. гипертонемической коме, 3. несбалансированном питьаниии (голодании,диета, напрвленная на похудание, употребление преимущественно белковой пищи, исключение из рациона углеводов), 4.гиперпродукция кортикостероидов( опухоли гипофиза или надпочечников), 5. дизентерия , токсикозы в детском возрасте, приводящее к кетоацидозу.
11. Качественная реакция на фенилпировиноградную кислоту (проба Фелинга)
Принцип пробы Фелинга. Фенилпировиноградная кислота с ионами трехвалентного железа образует комплексное соединение сине-зеленого цвета.
Диагностическое значение. В норме основным путем превращения фенилаланина в тканях (в основном в печени) является его окисление фенилаланингидроксилазой в тирозин. Вследствие дефекта гена, ответственного за выработку в печени этого фермента, не происходит его синтеза. Фенилаланин гачинает превращаться по комплексному пути – вступает в переаминирование с образованием фенилпировиноградной к-ты. Фенилпируват накапливается в крови, тканях, выводится с мочой; развивается фенилкетонурия. Вследствие накопления фенилпирувата нарушается синтез миелина и миелинизация нервных волокон, а вследствие недостатка тирозина отмечается дефицит Т3, Т4, дофамина и катехоламинов, в результате дети отстают в умственном развитии, развивается фенилпировиноградная олигофрения. Современное выявление этой ферментопатии позволяет изменить характер питания (ограничение поступления фенилаланина, в том числе и с молоком матери) и предупредить развитие олигофрении.
Проба Фелинга до недавнего времени была обязательным элементом скрининга. Однако, для того, чтобы фенилпируват в моче присутствовал в обнаруживаемых этим методом количествах, необходимо длительное время (не ранее 2-х месячного возраста ребенка), к этому времени уже развивается стадия выраженного заболевания, а терапевтические мероприятия необходимо проводить с первых жизни. К 2 месяцам жизни у ребенка с фенилкетонурией уже имеется развернутая клиническая картина заболевания. Особенно это заметно у смуглокожих и темноволосых детей: наступает гипопигментация кожи, начинают заметно светлеть волосы и глаза. К 4-х месячному возрасту уже видны проявления энцефалопатии: у ребенка исчезает «комплекс оживления», возникающий в норме на обращение к нему взрослого.
В настоящее время для ранней диагностики фенилкетонурии проявляют пробу Гатри. Она заключается в том, что диск с кровью новорожденного, помещают на питательную среду с бактериями, нуждающимися для роста в фенилаланине. При наличии этой аминокислоты в крови при фенилкетонурии идет рост этих микроорганизмов.
Реактивы, исследуемый материал: 1. Р-р хлорного железа, 100 г/л. 2. Моча. 3. Фильтровальная бумага.
Ход работы: На фильтровальную бумагу нанести несколько капель мочи, добавить 8-10 капель р-ра хлорного железа. Оценить результат.