7.Метод ферментативного определения мочевины в сыворотке крови

Принцип метода: Уреаза гидролизует мочевину с образованием аммиака и СО₂. Выделенный аммиак с хромогеном и гипохлоритом натрия образует окрашенный продукт хим р-ции, интенсивность окраски которого определяют фотометрически.

Реактивы:

Реактив №1(ферментный реагент), реактив №2(хромоген), реактив №3(натрия гипохлорит)

Стандартный р-р мочевины

Исследуемая сыворотка крови.

Концентрация мочевины рассчитывается по формуле:

С_оп=(Е_оп*С_ст)/Е_ст

где С_оп – концентрация мочевины в исследуем пробе, Е_оп – оптическая плотность исследуемой пробы, С_ст – концентрация мочевины в стандартной пробе, Е_ст – оптическая плотность в стандартной пробы

нормальное содержание мочевины:

в сыворотке крови 2,5- 8,3 ммоль/л, в моче – 333,0- 587,7 ммоль/л.

Диагностическое значение: мочевина синтезир в печени,это проодукт общ обезвреживания аммиака. Ее выделение с мочой – главный путь экскреции азота.

Повышение ур мочевины в сыворотке крови наблюдается при заболевании почек: почечная недостаточность, нефрит, рефлекторная анурия, почечно-каменная болезнь.

Уменьшение содерж мочевины в крови наблюд при нарушении мочевинообразовательной ф-ции печени в результате паренхиматозной желтухи, острой дистрофии органа, декомпенсированного цирроза.

З- МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ АЛЬБУМИНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ С

БРОМКРЕЗОЛОВЫМ ЗЕЛЕНЫМ

Принцип метода состоит в том, что альбумин с бромкрезоловым зеленым в слабо кислой среде образует окрашенный комплекс синего цвета, интенсивность которого пропорциональна концентрации альбу­мина.

Реактивы, исследуемый материал:

1.Раствор бромкрезолового зеленого (рабочий реактив).

2.Стандартный раствор альбумина.

3.Исследуемая сыворотка.

Концентрация холестерина рассчитывается по формуле:

С_оп=(Е_оп*С_ст)/Е_ст,

где С_оп – концентрация альбумина в исследуемой пробе, Е_оп – оптическая плотность исследуемой пробы, С_ст – концентрация альбумина в стандартной пробе, Е_оп – оптическая плотность стандартной пробы

Нормальная концентрация альбумина крови - 35-52 г /л

Определение концентрации альбумина в крови имеет очень важное ди­агностическое значение. Это обусловлено тем, что:

1.альбумин является показателем, характеризующим тяжесть тех заболеваний, которые сопровождаются гипоальбуминемией;

2. альбумин является основным транспортным белком в организме. С альбумином транспортируются: половина всего кальция, свободные жирные кислоты, билирубин, гормоны, лекарственные препараты.

Диагностическое значение: Большее диагностическое значение имеет обнаружение гипоальбуминемии. Клинически проявляется:

-слабостью,

-отеками нижних конечностей. При содержании альбумина в сыворотке крови ниже 30 г/л онкотическое давление снижается настолько, что из сосудистого русла переходит во внесосудистое - образуются на нижних конечностях, скапливается жидкость в серозных полостях (брюшной - асцит, плевральной - плеврит, перикардиальной-перекардит

-судорогами, вследствие гипокальциемии. Комплекс альбумин-кальций является транспортной формой кальция. И возникает ситуация, когда при определении в крови нормальной концентрации кальция, на самом деле из-за гипоальбуминемии отмечается скрытый дефицит кальция

Причины гипоальбуминемии

I) снижение поступления и синтеза вследствие: недостаточного питания, дефектов пищеварения, нарушения абсорбции, заболеваниях печени. Печень является местом синтеза альбумина, поэтому снижение его концентрации может служить тестом для оценки ее функционального состояния, например: гипоальбуминемия при хроническом гепатите и циррозе имеет неблагоприятное прогностическое значение.

2.увеличение потери альбумина при кровотечениях, анафилакти­ческом шоке, альбуминурии (т.е. выделении с мочой), при образовании выпотов в серозные полости, при хронических поносах, при хрониче­ских заболеваниях почек (например, при нефротическом синдроме, ко­гда концентрация альбумина в крови может достигать 5 г/л при уровне общего белка 25-30 г/л). В хирургической практике это имеет место при так называемых болезнях оперированного желудка (после гастрэктомии или резекции 2/3 желудка), при кишечной непроходимости, остром пан­креатите, холецистите, острых флегмонах, абсцессах легких. Выражен­ная гипоальбуминемия или ее усугубление в динамике при тяжело про­текающих хирургических заболеваниях расценивается как крайне не­благоприятный прогностический фактор. Это объясняется двумя при­чинами:

Уровень альбумина служит показателем эндогенной интоксикации и чем выраженнее интоксикация, тем ниже уровень альбуминов

Гипоальбуминемия приводит к снижению биологической доступности и длительности нахождения фарм препаратов в часности антибиотиков

3. усиление катаболизма альбуминов наблюдается у больных гипертиреозом, гиперкортизолемией, длительной лихорадкой, обширны­ми травмами. .

Чаще всего изменения содержания альбумина в плазме бывают вторичными, т.е. причиной являются какие-либо заболевания. Первич­ные нарушения очень редки и представляют собой наследственные за­болевания. К ним относится анальбуминемия (т.е. отсутствие альбуми­на) и двойная альбуминемия (бисальбуминемия) - протекает бессим­птомно, при электрофорезе белков сыворотки крови выявляют две фракции альбуминов.

Гиперальбуминемия. Абсолютная гиперальбуминемия практически не встречается. Относительная связана с гипо- или дегидратацией т.е. со снижением объема циркулирующей жидкости