Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
Гусейнов / Лекция 2.3 Рестриктазы.docx
Скачиваний:
122
Добавлен:
10.06.2015
Размер:
299.4 Кб
Скачать

Проведение расщепления днк рестриктазами

Реакционная смесь обычно содержит 0,2-1 мкг ДНК в объеме 20 мкл или менее.

1. Добавьте воду к раствору ДНК в стерильной пробирке фирмы Эппендорф до объема 18 мкл и перемешайте.

2. Добавьте 2 мкл соответствующего буфера 10-кратной концентрации и перемешайте, слегка постукивая по пробирке пальцем.

3. Добавьте 1 ед. рестриктазы и перемешайте, слегка постукивая по пробирке пальцем. (1 ед. Фермента – это количество фермента, необходимое для полного расщепления 1 мкг ДНК за 1 ч в определенном буфере и при определенной температуре в объеме 20 мкл. Как правило, расщепление рестриктазами, проводимое в течение более длительных периодов времени или при избытке фермента, не приводит к осложнениям, если в препарате фермента отсутствуют примеси ДНКазы или экзонуклеазы. В имеющихся в продаже препаратах рестриктаз такие примеси обнаруживаются редко.)

4. Инкубируйте смесь при подходящей температуре в течение необходимого времени.

5. Остановите реакцию добавлением 0,5 М ЭДТА, рН 7,5, до конечной концентрации 10 мМ.

Если ДНК анализируют сразу в геле, добавьте 6 мкл красителя в буфере для нанесения I, перемешайте смесь встряхиванием и нанесите расщепленную ДНК на гель.

Если обработанная рестриктазой ДНК нуждается в очистке, экстрагируйте ее один раз смесью фенол-хлороформ, один раз хлороформом и осадите этанолом.

Примечания

Рестриктазы – дорогие ферменты! Связанные с ними затраты могут быть

сведены к минимуму, если следовать приведенным ниже правилам.

А. Чтобы отобрать небольшое количество фермента из упаковки с концентрированным раствором рестриктазы, быстро коснитесь кончиком стеклянной микропипетки разового пользования (на 5 мкл) поверхности раствора фермента. Таким способом можно отобрать всего 0,1 мкл раствора фермента.

Б. Рестриктазы стабильны при хранении при –20оС в буфере, содержащем 50% глицерин. При проведении расщепления ДНК растриктазами приготовьте реакционную смесь, содержащую все компоненты, кроме фермента. Достаньте из морозильника фермент и сразу же поместите его в лед. Работайте как можно быстрее, чтобы фермент находился вне морозильника минимальное время. Сразу же после использования поместите фермент обратно в морозильник.

В. Используйте минимальные объемы реакционной смеси, уменьшая в ней

количество воды, насколько это возможно. Проверьте, однако, чтобы объем внесенной рестриктазы составлял менее 1/10 конечного объема реакционной смеси, иначе активность фермента может ингибироваться глицерином.

Г. Когда ДНК необходимо обработать двумя или более рестриктазами, реакцию можно проводить одновременно при условии, что оба фермента функционируют в одном и том же буфере. В противном случае первым следует использовать фермент, функционирующий в буфере с более низкой ионной силой. После этого в реакционную смесь можно добавить необходимое количество соли и второй фермент (ферменты) и продолжить инкубацию.

Краткое описание некоторых ферментов рестрикции

Название

Aat II

Сайт узнавания

GACGTC CTGCAG

Источник

Из штамма E.coli несущего клонированный ген Aat II из Acetobacter aceti

Субстрат для определения активности

ДНК фага лямбда

Единица активности

За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.

Оптимальный SE-буфер

Y (33 mM Tris-ацетат (pH 7.9 при 25°C); 10 mM магний-ацетат; 66 mM калий-ацетат; 1 mM DTT.)

Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:

B

G

O

W

Y

10 - 25

25 - 50

10 - 25

25 - 50

100

Оптимальная температура

37oC

Условия хранения

10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 1 mM DTT; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Срок хранения фермента 1 год с даты проверки, указанной на фасовке

Лигирование

После гидролиза 10-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.

Неспецифический гидролиз

Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.

Чувствительность к метилированию

не проверялось

Инактивация 20 мин при

65oC

Литература:

Sugisaki H., Maekawa Y., Kanazawa S., Takanami M. Nucleic Acid Res. 10:5747-5752(1982)

Теоретические электрофореграммы разделения фрагментов ДНК в 1%-ном агарозном геле 1хТБЕ для наиболее популярных плазмидных и вирусных ДНК:

Длины фрагментов на дорожке

13273, 10739, 9980, 1945

ДНК аденовируса-2

M

1

2

3

4

5

M

M - маркер, 1 - ДНК аденовируса-2, 2 - ДНК фага Лямбда, 3 - ДНК фага T7, 4 - pUC19, 5 - pBR322

Название

Hinf I

Сайт узнавания

GANTC CTNAG

Источник

Из штамма E.coli несущего клонированный ген HinfI из Haemophilus influenzae

Субстрат для определения активности

ДНК фага лямбда

Единица активности

За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.

Оптимальный SE-буфер

O (50 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 100 mM NaCl; 1 mM DTT.)

Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:

B

G

O

W

Y

25 - 50

75 - 100

100

75 - 100

75 - 100

Оптимальная температура

37oC

Условия хранения

10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 1 mM DTT; 200 μg/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Срок хранения фермента 1 год с даты проверки, указанной на фасовке

Лигирование

После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.

Неспецифический гидролиз

Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.

Чувствительность к метилированию

не проверялось

Инактивация 20 мин при

80oC

Примечание

С ферментом поставляется 10 Х SE-буфер O.

Название

Hind III

  

Сайт узнавания

AAGCTT TTCGAA

Источник

Из штамма E.coli несущего клонированный ген HindIII из Haemophilus influenzae Rd

Субстрат для определения активности

ДНК фага лямбда

Единица активности

За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.

Оптимальный SE-буфер

W (10 mM Tris-HCl (pH 8.5 при 25°C); 10 mM MgCl2; 100 mM NaCl; 1 mM DTT.) + BSA

Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:

B

G

O

W

Y

10 - 25

25 - 50

0 - 10

100

0 - 10

Оптимальная температура

37oC

Условия хранения

10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 250 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 200 μg/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Срок хранения фермента 1 год с даты проверки, указанной на фасовке

Лигирование

После гидролиза 50-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.

Неспецифический гидролиз

Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.

Чувствительность к метилированию

не проверялось

Инактивация 20 мин при

80oC

Примечание

Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. С ферментом поставляется 10 Х SE-буфер W, BSA.

Литература:

Old, R., Murray, K., Roizes, G. J. Mol. Biol. 92: 331-339 (1975). В.А. Чернухин, М.А. Абдурашитов, В.Н. Томилов, Д.А. Гончар, С.Х. Дегтярев Сравнительный рестрикционный анализ хромосомной ДНК крысы in vitro и in silico // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю. А. Овчинникова, 2006, т. 2, №3, с. 39-46

Теоретические электрофореграммы разделения фрагментов ДНК в 1%-ном агарозном геле 1хТБЕ для наиболее популярных плазмидных и вирусных ДНК:

Длины фрагментов на дорожке

15000, 10000, 9000, 8000, 7000, 6000, 5000, 4000, 3000, 2000, 1000

Маркер

M

1

2

3

4

5

M

M - маркер, 1 - ДНК аденовируса-2, 2 - ДНК фага Лямбда, 3 - ДНК фага T7, 4 - pUC19, 5 - pBR322

Название

EcoR I

Сайт узнавания

GAATTC CTTAAG

Источник

Из штамма E.coli несущего клонированный ген EcoR I из Escherichia coli

Субстрат для определения активности

ДНК фага лямбда

Единица активности

За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.

Оптимальный SE-буфер

SE-буфер EcoRI(100 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 50 mM NaCl; 1 mM DTT.) +BSA

Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:

B

G

O

W

Y

50 - 75

75 - 100

75 - 100

75 - 100

50 - 75

Оптимальная температура

37oC

Условия хранения

10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 μg/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Срок хранения фермента 1 год с даты проверки, указанной на фасовке

Лигирование

После гидролиза 40-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.

Неспецифический гидролиз

Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.

Чувствительность к метилированию

не проверялось

Инактивация 20 мин при

65oC

Примечание

При большом избытке фермента, при использовании неоптимального буфера возможно появление звездчатой активности. Длительная инкубация c BSA не рекомендуется из-за появления звездчатой активности. Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. С ферментом поставляется 10 Х SE-буфер EcoRI, BSA.

Литература:

Albertsen, H.M., Le Paslier, D., Abderrahim, H., Dausset, J., Cann, H., Cohen, D. Nucleiv Acids Res. 17: 808 (1989). В.А. Чернухин, М.А. Абдурашитов, В.Н. Томилов, Д.А. Гончар, С.Х. Дегтярев Сравнительный рестрикционный анализ хромосомной ДНК мыши in vitro и in silico// Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю. А. Овчинникова, 2007, 3, №4, с. 19-27.В.А. Чернухин, М.А. Абдурашитов, В.Н. Томилов, Д.А. Гончар, С.Х. Дегтярев Сравнительный рестрикционный анализ хромосомной ДНК крысы in vitro и in silico// Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю. А. Овчинникова, 2006, т. 2, №3, с. 39-46

Теоретические электрофореграммы разделения фрагментов ДНК в 1%-ном агарозном геле 1хТБЕ для наиболее популярных плазмидных и вирусных ДНК:

Длины фрагментов на дорожке

15000, 10000, 9000, 8000, 7000, 6000, 5000, 4000, 3000, 2000, 1000

Маркер

M

1

2

3

4

5

M

M- маркер,1- ДНК аденовируса-2,2- ДНК фага Лямбда,3- ДНК фага T7,4- pUC19,5- pBR322

Название

BamH I

Сайт узнавания

GGATCC CCTAGG

Источник

Из штамма E.coli несущего клонированный ген BamHI из Bacillus amyloliquefaciens H

Субстрат для определения активности

ДНК фага лямбда

Единица активности

За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.

Оптимальный SE-буфер

G (10 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 50 mM NaCl; 1 mM DTT.) +BSA

Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:

B

G

O

W

Y

25 - 50

100

75 - 100

75 - 100

25 - 50

Оптимальная температура

37oC

Условия хранения

10 mM Tris-HCl (pH 7.6); 50 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 100 μg/ml BSA; 1mM DTT; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Срок хранения фермента 1 год с даты проверки, указанной на фасовке

Лигирование

После гидролиза 50-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.

Неспецифический гидролиз

Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.

Чувствительность к метилированию

Не блокируется при перекрывании dam-метилированием (GmATC) :GGATCC.

Инактивация 20 мин при

65oC

Примечание

Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности. Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. С ферментом поставляется 10 Х SE-буфер G, BSA.

Литература:

Wilson, G.A. and Young, F.E. J. Mol. Biol. 97: 123-125 (1975). Roberts, R.J., Wilson, G.A., Young, F.E. Nature 265: 82-84 (1977)

Теоретические электрофореграммы разделения фрагментов ДНК в 1%-ном агарозном геле 1хТБЕ для наиболее популярных плазмидных и вирусных ДНК:

Длины фрагментов на дорожке

15000, 10000, 9000, 8000, 7000, 6000, 5000, 4000, 3000, 2000, 1000

Маркер

M

1

2

3

4

5

M

M- маркер,1- ДНК аденовируса-2,2- ДНК фага Лямбда,3- ДНК фага T7,4- pUC19,5- pBR322

Теоретические электрофореграммы разделения фрагментов ДНК в 1%-ном агарозном геле 1хТБЕ для наиболее популярных плазмидных и вирусных ДНК:Длины фрагментов на дорожке

16841, 7233, 6771, 6527, 5626, 5504

ДНК фага Лямбда

M

1

2

3

4

5

M

M- маркер,1- ДНК аденовируса-2,2- ДНК фага Лямбда,3- ДНК фага T7,4- pUC19,5- pBR322

Теоретические электрофореграммы разделения фрагментов ДНК в 1%-ном агарозном геле 1хТБЕ для наиболее популярных плазмидных и вирусных ДНК:Длины фрагментов на дорожке

14332, 10679, 6203, 4723

ДНК аденовируса-2

M

1

2

3

4

5

M

M- маркер,1- ДНК аденовируса-2,2- ДНК фага Лямбда,3- ДНК фага T7,4- pUC19,5- pBR322

Теоретические электрофореграммы разделения фрагментов ДНК в 1%-ном агарозном геле 1хТБЕ для наиболее популярных плазмидных и вирусных ДНК:Длины фрагментов на дорожке

2686

PUC19

M

1

2

3

4

5

M

M- маркер,1- ДНК аденовируса-2,2- ДНК фага Лямбда,3- ДНК фага T7,4- pUC19,5- pBR322

Теоретические электрофореграммы разделения фрагментов ДНК в 1%-ном агарозном геле 1хТБЕ для наиболее популярных плазмидных и вирусных ДНК:Длины фрагментов на дорожке

4361

PBR322

M

1

2

3

4

5

M

M- маркер,1- ДНК аденовируса-2,2- ДНК фага Лямбда,3- ДНК фага T7,4- pUC19,5- pBR322

Название

Kpn I

Сайт узнавания

GGTACC CCATGG

Источник

Из штамма E.coli несущего клонированный ген KpnI из Klebsiella pneumonia

Субстрат для определения активности

ДНК фага лямбда

Единица активности

За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси.

Оптимальный SE-буфер

B (10 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 1 mM DTT.) +BSA

Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной:

B

G

O

W

Y

100

25 - 50

25 - 50

25 - 50

75 - 100

Оптимальная температура

37oC

Условия хранения

10 mM Tris-HCl(pH 7.5); 50 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 200 μg/ml BSA; 1 mM DTT; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Срок хранения фермента 1 год с даты проверки, указанной на фасовке

Лигирование

После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены.

Неспецифический гидролиз

Картина cпецифического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 37°С.

Чувствительность к метилированию

Не блокируется при перекрывании Dсm-метилированием (CmCWGG):GGTACCWGG.

Инактивация 20 мин при

80oC

Примечание

Длительная инкубация с BSA не рекомендуется . Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. С ферментом поставляется 10 Х SE-буфер B, BSA.

Литература:

Smith, D.I., Blattner, F.R., Davies, J. Nucleic Acids Res. 3: 343-353 (1976). Абдурашитов М. А, Чернухин В. А., Томилов В. Н., Гончар Д. А., Дегтярев С. Х. Рестрикционный анализ ДНК человека – новые возможности в ДНК-диагностике// Медицинская генетика, Т.6, № 8, с 29-36, 2007

Теоретические электрофореграммы разделения фрагментов ДНК в 1%-ном агарозном геле 1хТБЕ для наиболее популярных плазмидных и вирусных ДНК:Длины фрагментов на дорожке

15000, 10000, 9000, 8000, 7000, 6000, 5000, 4000, 3000, 2000, 1000

Маркер

M

1

2

3

4

5

M

M- маркер,1- ДНК аденовируса-2,2- ДНК фага Лямбда,3- ДНК фага T7,4- pUC19,5- pBR322

Краткое описание наиболее часто используемых стандартных препаратов ДНК

Название

ДНК фага лямбда

Источник

Выделена из бактериофага Лямбда cI857S7 который был индуцирован температурой из лизогенного штамма E.coli несущего системы метилирования Dam, Dcm

Описание

Двухцепочечная линейная ДНК длиной 48502 пары оснований. Молекулярный вес - 31.5х106 дальтон

Условия хранения

10 mM Tris-HCl (pH 7.8); 1 mM EDTA. Хранить при - 20°С.

Название

ДНК фага T7

Источник

Выделена из бактериофага Т7 который получен из инфицированого штамма E.coli с неактивными системами метилирования Dam, Dcm

Описание

Двухцепочечная линейная ДНК длиной 39936 пар оснований. Молекулярный вес 26х106 дальтон.

Условия хранения

10 mM Tris-HCl; (pH 7.8); 1 mM EDTA. Хранить при - 20°С.

Название

ДНК pUC19

Источник

Выделена из штамма E.coli XL1-Blue несущего системы метилирования Dam, Dcm

Описание

Плазмида широко используется в качестве вектора для клонирования в E.coli, представляет собой кольцевую двухцепочечную молекулу ДНК длиной 2686 пар оснований. pUC19 несет полилинкер длиной 54 пары оснований и состоящий из сайтов 13ти рестриктаз узнающих гексануклеотидные палиндромные последовательности. Молекулярный вес - 1.75х106 дальтон

Условия хранения

10 mM Tris-HCl (pH 7.8); 1 mM EDTA. Хранить при - 20°С.

1.4% TAE агарозный гель 1 дорожка ДНК pUC19 (0.3 мкг) 2 дорожка ДНК pUC19 гидролизованная HindIII (0.3мкг) 3 дорожка 1 Kb ДНК маркер a Кольцевая форма b Линейная форма c Суперскрученная форма

Название

ДНК pBR322

Источник

Выделена из штамма E.coli XL1-Blue несущего системы метилировная Dam, Dcm

Описание

Плазмида широко используется в качестве вектора для клонирования в E.coli, представляет собой кольцевую двухцепочечную молекулу ДНК длиной 4361 пар оснований. pBR322 содержит гены устойчивости к ампицилину и тетрациклину. Молекулярный вес - 2.83х106 дальтон.

Условия хранения

10 mM Tris-HCl (pH 7.8); 1 mM EDTA. Хранить при - 20°С.

1.4% TAE агарозный гель 1 дорожка ДНК pBR322 (0.3 мкг) 2 дорожка ДНК pBR322 гидролизованная FauNDI(0.3мкг) 3 дорожка 1 Kb ДНК маркер a Кольцевая форма b Линейная форма c Суперскрученная форма

Название

ДНК pHspAI2/GsaI

Источник

pHspAI2 выделена из штамма E.coli (dam+, dcm+) с использованием стандартной методики

Описание

Субстрат pHspAI2/GsaI представляет собой ДНК плазмиды pHspAI2, линеаризованной эндонуклеазой рестрикции GsaI.   pHspAI2 (4118 п.о.) является модификацией плазмиды pHspAI1. Помимо фрагмента геномной ДНК бактериального штаммаHaemophilus speciesA1, включающего ген ДНК-метилтрансферазы M.HspAI, pHspAI2 содержит единственный канонический сайт узнавания GlaI.

Условия хранения

10 mM Tris-HCl (pH 7.8); 1 mM EDTA. Хранить при - 20°С

Краткое описание наиболее часто используемых стандартных маркеров ДНК

Название

ДНК-маркеры 100 bp + 50 bp (11 фрагментов от 50 до 1000 bp)

Описание

Представляет собой смесь специальных плазмид, гидролизованных определенными ферментами с образованием 11 фрагментов, пригодных для использования в качестве стандарта молекулярных весов в агарозном гель-электрофорезе.

Условия хранения

10 mM Tris-HCl (pH 8.0); 1 mM EDTA; 50mM NaCl. Хранить при - 20°С.

Примечание

ДНК маркер не предназначен для определения количества ДНК, однако может быть использован для приблизительной оценки путем сравнения интенсивности фрагментов одинакового размера. Мы рекомендуем наносить 0,5-1 мкг ДНК маркера на дорожку.

1 мкг 100bp+50bp ДНК маркера в 1,7 % ТАЕ агарозном геле.

Название

ДНК-маркеры 100 bp (10 фрагментов от 100 до 1000 bp)

Описание

Представляет собой смесь специальных плазмид гидролизованных определенными ферментами с образованием 10 фрагментов пригодных для использования в качестве стандарта молекулярных весов в агарозном гель-электрофорезе.

Условия хранения

10 mM Tris-HCl (pH 7.8); 1 mM EDTA; 50 mM NaCl. Хранить при - 20°С.

Примечание

ДНК маркер не предназначен для определения количества ДНК, однако может быть использован для приблизительной оценки путем сравнения интенсивности фрагментов одинакового размера. Мы рекомендуем наносить 1 мкг ДНК маркера на дорожку.

1 мкг 100bp ДНК маркера в 1,7 % ТАЕ агарозном геле.

Название

ДНК-маркеры 100 bp + 1.5 Kb (11 фрагментов от 100 до 1500 bp)

Описание

Представляет собой смесь специальных плазмид гидролизованных определенными ферментами с образованием 11 фрагментов пригодных для использования в качестве стандарта молекулярных весов в агарозном гель-электрофорезе.

Условия хранения

10 mM Tris-HCl (pH 7.8); 1 mM EDTA; 50mM NaCl. Хранить при - 20°С.

Примечание

ДНК маркер не предназначен для определения количества ДНК, однако может быть использован для приблизительной оценки путем сравнения интенсивности фрагментов одинакового размера. Мы рекомендуем наносить 1 мкг ДНК маркера на дорожку.

1 мкг 100bp+ 1,5Kb ДНК маркера в 1,7% ТАЕ агарозном геле.

Название

ДНК-маркеры 100 bp+1.5 Kb+3 Kb (12 фрагментов от 100 до 3000 bp)

Описание

Представляет собой смесь специальных плазмид гидролизованных определенными ферментами с образованием 12 фрагментов пригодных для использования в качестве стандарта молекулярных весов в агарозном гель-электрофорезе.

Условия хранения

10 mM Tris-HCl (pH 7.8); 1 mM EDTA; 50mM NaCl. Хранить при - 20°С.

Примечание

ДНК маркер не предназначен для определения количества ДНК, однако может быть использован для приблизительной оценки путем сравнения интенсивности фрагментов одинакового размера. Мы рекомендуем наносить 1 мкг ДНК маркера на дорожку.

1 мкг 100bp+ 1,5Kb+ 3Kb ДНК маркера в 1,7% ТАЕ агарозном геле

Название

ДНК-маркеры 1 Kb (13 фрагментов от 0.25 до 10 Kb)

Описание

Представляет собой смесь специальных плазмид гидролизованных определенными ферментами с образованием 13 фрагментов пригодных для использования в качестве стандарта молекулярных весов в агарозном гель-электрофорезе.

Условия хранения

10 mM Tris-HCl (pH 7.8); 1 mM EDTA; 50 mM NaCl. Хранить при - 20°С.

Примечание

ДНК маркер не предназначен для определения количества ДНК, однако может быть использован для приблизительной оценки путем сравнения интенсивности фрагментов одинакового размера. Мы рекомендуем наносить 0,5-1 мкг ДНК маркера на дорожку.

1 мкг 1Kb ДНК маркера в 1 % ТАЕ агарозном геле

Название

pUC19/Msp I

Описание

Представляет собой плазмиду pUC19 гидролизованную ферментом Msp I с образованием 12 фрагментов пригодных для использования в качестве стандарта молекулярных весов в агарозном гель-электрофорезе.

Условия хранения

10 mM Tris-HCl (pH 7.8); 1 mM EDTA; 50 mM NaCl. Хранить при - 20°С.

Примечание

Рекомендуется наносить 1 мкг ДНК маркера на 1 дорожку.

1 мкг pUC19/MspI ДНК маркера в 1,7% ТАЕ агарозном геле.

Название

pUC19/Kzo9 I (Sau3AI)

Описание

Представляет собой плазмиду pUC19 гидролизованную ферментом Kzo9 I с образованием 15 фрагментов пригодных для использования в качестве стандарта молекулярных весов в агарозном гель-электрофорезе.

Длины фрагментов

Длина фрагмента, п.н.

Длина фрагмента, п.н.

Длина фрагмента, п.н.

Длина фрагмента, п.н.

955

141

46

12

585

105

36

11

341

78

18

8

258

75

17

 

Условия хранения

10 mM Tris-HCl (pH 7.8); 1 mM EDTA; 50 mM NaCl. Хранить при - 20°С.

Примечание

Рекомендуется наносить 1 мкг ДНК маркера на 1 дорожку.

1 мкг pUC19/Kzo9I ДНК маркера в 1,7% ТАЕ агарозном геле.

Название

pBR322/BsuR I (HaeIII)

Описание

Представляет собой плазмиду pBR322 гидролизованную ферментом BsuR I с образованием 22 фрагментов пригодных для использования в качестве стандарта молекулярных весов в агарозном гель-электрофорезе.

Длины фрагментов

Длина фрагмента, п.н.

Длина фрагмента, п.н.

Длина фрагмента, п.н.

Длина фрагмента, п.н.

587

234

104

21

540

213

89

18

502

192

80

11

458

184

64

8

434

124

57

 

267

123

51

 

Условия хранения

10 mM Tris-HCl(pH 7.8); 1 mM EDTA; 50 mM NaCl. Хранить при - 20°С.

Примечание

Рекомендуется наносить 1 мкг ДНК маркера на 1 дорожку.

Название

pBR322/Alu I

Описание

Представляет собой плазмиду pBR322 гидролизованную ферментом Alu I с образованием 9 фрагментов пригодных для использования в качестве стандарта молекулярных весов в агарозном гель-электрофорезе.

Длины фрагментов

Длина фрагмента, п.н.

Длина фрагмента, п.н.

Длина фрагмента, п.н.

908

521

257

659

403

226

656

281

100

Условия хранения

10 mM Tris-HCl (pH 7.8); 1 mM EDTA; 50 mM NaCl.. Хранить при - 20°С.

Примечание

Рекомендуется наносить 1 мкг ДНК маркера на 1 дорожку.

1 мкг pBR322/AluI ДНК маркера в 1,7% ТАЕ агарозном геле

Название

pUC19/Msp I

Описание

Представляет собой плазмиду pUC19 гидролизованную ферментом Msp I с образованием 12 фрагментов пригодных для использования в качестве стандарта молекулярных весов в агарозном гель-электрофорезе.

Длины фрагментов

Длина фрагмента, п.н.

Длина фрагмента, п.н.

Длина фрагмента, п.н.

Длина фрагмента, п.н.

501

331

147

67

489

242

111

34

404

190

110

26

49