4. Питательные среды

4.1. Состав и приготовление питательных сред

Для испытания используют жидкую тиогликолевую среду, жидкую соево- казеиновую среду или жидкую среду Сабуро. Жидкую тиогликолевую среду применяют для выявления аэробных и анаэробных бактерий. Жидкую соево- казеиновую среду или жидкую среду Сабуро применяют для выявления грибов.

Используют питательные среды, приготовленные в лаборатории, или сухие питательные среды промышленного производства. В этом случае следует строго придерживаться методики приготовления, рекомендованной производителем.

Если нет других указаний в частной фармакопейной статье, среды стерилизуют в автоклаве в течение 15 мин при температуре 121 ºС, при условии валидации процесса стерилизации.

Все среды проверяют на стерильность и определяют их ростовые свойства.

Жидкая тиогликолевая среда:

L-цистина (Ц35) – 0,5 г

Натрия хлорида (Н125) – 2,5 г

Глюкозы моногидрата (Г49) – 5,5 г

Агара гранулированного (влажность не более 15 %) – 0,75 г

Дрожжевого экстракта (водорастворимого) – 5,0 г

Панкреатического гидролизата казеина – 15,0 г

Натрия тиогликолята (Н113) – 0,5 г

или кислоты тиогликолевой (Т58) – 0,3 г

Раствора резазурина натрия (1:1000) – 1,0 мл

свежеприготовленного

Воды – 1000,0 мл

рН после стерилизации – 7,1 ± 0,2

Добавляют в воду L-цистин, агар, натрия хлорид, глюкозу, водорастворимый дрожжевой экстракт и панкреатический гидролизат казеина и нагревают до полного растворения. Добавляют натрия тиогликолят или тиогликолевую кислоту и, если необходимо, доводят рН среды 1 М раствором натра едкого. Добавляют раствор резазурина, перемешивают и разливают в пробирки соответствующего объема. Стерилизуют в автоклаве, валидируя процесс стерилизации.

Жидкая соево-казеиновая среда:

Панкреатического гидролизата казеина – 17,0 г

Папаинового гидролизата соевой муки – 3,0 г

Натрия хлорида (Н125) – 5,0 г

Калия фосфата двузамещенного (К95) – 2,5 г

Глюкозы (Г48) – 2,5 г

Воды – 1000,0 мл

рН после стерилизации – 7,3 ± 0,2

Компоненты растворяют в воде, если необходимо при нагревании. Охлаждают при комнатной температуре. Если требуется, добавляют 1 М раствор натра едкого (Н33), чтобы после стерилизации рН среды был 7,3 ± 0,2. Фильтруют для получения прозрачной среды, разливают по пробиркам и стерилизуют в автоклаве.

Жидкая среда Сабуро:

Пептона ферментативного – 10,0 г

Глюкозы моногидрата (Г49) – 40,0 г

Воды – 1000,0 мл

рН после стерилизации – 5,6 ± 0,2

Пептон и глюкозу добавляют в воду и полностью растворяют при слабом нагревании. Охлаждают до комнатной температуры и доводят рН до требуемого значения. Фильтруют, если необходимо, и разливают в пробирки. Стерилизуют в автоклаве, валидируя процесс стерилизации.

Для определения стерильности некоторых антибиотиков (пенициллинов, цефалоспоринов) методом прямого посева асептически вносят в питательные среды определенное количество β-лактамазы, указанное в частной фармакопейной статье, для инактивации антибиотика.

4.2. Стерильность питательных сред

После стерилизации не менее 5 % пробирок от каждой партии питательной среды помещают в термостат и инкубируют в течение как минимум 14 сут. параллельно с посевом на стерильность.