31. СТЕРИЛЬНОСТЬ (ОФС 42-0066-07)

Лекарственные средства для инъекций и инфузий, глазные капли, мази, пленки и другие препараты и субстанции, в отношении которых имеются соответствующие указания в документации, должны быть стерильными, то есть не содержать микроорганизмов.

Методы контроля стерильности применяют для испытания всех лекарственных средств независимо от их природы и лекарственной формы.

1. Условия проведения испытания

Испытание на стерильность проводят в асептических условиях, чтобы избежать микробной контаминации во время посева, используя, например, ламинар-бокс класса А, расположенный в зоне класса В, или изолятор. Можно применять и другие меры, предотвращающие контаминацию, при условии, что они не оказывают пагубное влияние на микроорганизмы, которые могут содержаться в исследуемых образцах. Условия проведения испытания регулярно контролируют в соответствии с правилами GMP.

2. Определение антимикробного действия

До проведения испытания на стерильность следует определить, обладает ли исследуемый образец антимикробным действием, которое может существенно повлиять на результаты испытания.

Для этого готовят взвеси культур тест-микроорганизмов (табл. 31.4) с конечной концентрацией не более 100 колониеобразующих единиц (КОЕ) в 1 мл. Испытание проводят дважды с каждым микроорганизмом в отдельности.

В пробирки с 10 мл питательной среды, рекомендованной для испытания, вносят по 1 мл приготовленной взвеси тест-микроорганизма.

В две пробирки с инокулированной средой вносят по 1 мл исследуемого образца, в две другие вносят по 1 мл соответствующего растворителя – положительный контроль. Посевы на тиогликолевой среде инкубируют при температуре (32,5 ± 2,5) ºС в течение 3-х сут. Посевы на жидкой соево-казеиновой среде и среде Сабуро инкубируют при температуре (22,5 ± 2,5) ºС в течение 5 сут.

Сравнивают рост тест-микроорганизмов в контрольных и опытных посевах при визуальном просмотре. Если результаты неодинаковые, то есть, в контроле наблюдают рост тест-микроорганизма, а в опыте рост отсутствует, считают, что исследуемый образец обладает бактериостатическим или фунгистатическим действием.

2.1. Устранение антимикробного действия

При наличии антимикробного действия исследуемого образца используют специфические инактиваторы, указанные в нормативных документах. Например, парааминобензойная кислота для сульфаниламидов, β-лактамаза для пенициллинов и цефалоспоринов.

Неспецифические инактиваторы (твин-20, твин-80, яичный лецитин,

гистидина гидрохлорид, натрия тиосульфат и другие) добавляют в буферный раствор и (или) в питательные среды, как правило, до стерилизации.

Для разведения исследуемого образца перед испытанием на стерильность можно использовать нейтрализующую жидкость, приготовленную в лаборатории или промышленного производства, следующего состава:

Полисорбата-80 (твина-80) (П48)	–	30,0 г
Лецитина яичного (или соевого)	–	3,0 г
L-гистидина гидрохлорида (Г37)	–	1,0 г
Пептона (мясного или казеинового)	–	1,0 г
Натрия хлорида (Н125)	–	4,3 г
Калия фосфата однозамещенного (К97)	–	3,6 г
Натрия фосфата двузамещенного (Н121)	–	7,2 г
Воды	–	1000 мл

Стерилизуют в автоклаве, валидируя процесс стерилизации. рН после стерилизации 7,0 ± 0,2.

Если разведение в вышеприведенном растворе не устраняет антимикробное действие исследуемого образца, то увеличивают концентрацию твина-80 или лецитина. Альтернативно допускается добавление в буферный раствор специфических инактиваторов, устраняющих антимикробное действие лекарственных средств или консервантов (табл. 31.1).

Инактиваторы антимикробного действия консервантов

Таблица 31.1

Тип консерванта	Инактиватор	Концентрация в растворителе
Фенолы	Натрия лаурилсульфат (Н67) Твин-80 (П48) и лецитин Яичный желток	4 г/л 30 г/л и 3 г/л 5-50 мл/л
Органо-ртутные соединения	Натрия тиогликолят (Н113)	0,5-5 г/л
Галогены	Натрия тиосульфат (Н114)	5 г/л
Четвертичные соединения аммония	Яичный желток	5-50 мл/л

При отсутствии инактиватора исследуемый образец разводят, изменяя соотношение объемов посевного материала и питательной среды, или используют метод мембранной фильтрации.