Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
ОФС / 32. Микробиологическая чистота.doc
Скачиваний:
124
Добавлен:
18.04.2015
Размер:
1 Mб
Скачать

32. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ЧИСТОТА (ОФС 42-0067-07)

Нестерильные лекарственные средства (субстанции, различные формы препаратов – таблетки, капсулы, гранулы, растворы, суспензии, сиропы, мази, суппозитории и др., а также вспомогательные вещества) могут быть контаминированы микроорганизмами. В них допускается наличие лимитированного количества микроорганизмов, при отсутствии определенных видов бактерий, представляющих опасность для здоровья человека.

Приведенные ниже методы определения микробиологической чистоты распространяются на нестерильные лекарственные средства (субстанции и препараты), вспомогательные вещества и полупродукты, а также используются при определении эффективности антимикробных консервантов и мониторинге производственных помещений фармацевтических предприятий и лабораторий контрольных служб.

В табл. 32.1 и 32.2 приведены требования к лекарственным средствам (лекарственным препаратам и субстанциям), а также вспомогательным веществам, используемым в производстве лекарственных препаратов.

Таблица 32.

Категория

Препараты

Рекомендуемые требования

1

2

3

1

Препараты, к которым предъявля-

ется требование

«стерильность»

Препараты должны быть

стерильными

2

● Для применения местно, на-

ружно, интравагинально

● Для введения в полости уха, носа

● Респираторно

● Трансдермальные пластыри

За исключением тех лекарствен- ных препаратов, которые должны быть стерильными

● Общее число аэробных бактерий

и грибов (суммарно) не более

102 в 1 г или в 1 мл, или на

1 пластырь (включая клейкую сторону и основу)

● Отсутствие энтеробактерий и других грамотрицательных бак- терий на 1 пластырь (включая клейкую сторону и основу)

● Не более 101 энтеробактерий и других грамотрицательных бак- терий в 1 г или в 1 мл остальных препаратов

● Отсутствие Pseudomonas aerugi- nosa в 1 г или в 1 мл, или на

1 пластырь (включая клейкую сторону и основу)

● Отсутствие Staphylococcus au- reus в 1 г или в 1 мл, или на

1 пластырь (включая клейкую сторону и основу)

Микробиологическая чистота лекарственных препаратов 1

1

2

3

3

А. Для приема внутрь или введения

ректально

Б. Для приема внутрь – из сырья природного происхождения (живот- ного, растительного или минераль- ного), уровень микробной загрязненности которого невоз- можно снизить в процессе предва- рительной обработки и относительно которого федераль- ный орган контроля качества ле- карственных средств допускает уровень микробной загрязненности более 103 жизнеспособных микро- организмов в 1 г или в 1 мл.

Исключением являются лекарст- венные растительные средства, включенные в

Категорию 4

● Общее число аэробных бактерий

не более 103 в 1 г или в 1 мл

● Общее число грибов не более

102 в 1 г или в 1 мл

● Отсутствие Escherichia coli в 1 г или в 1 мл

● Общее число аэробных бактерий не более 104 в 1 г или в 1 мл

● Общее число грибов не более

102 в 1 г или в 1 мл

● Энтеробактерий и других грам- отрицательных бактерий не более 102 в 1 г или в 1 мл

● Отсутствие Escherichia coli в 1 г или в 1 мл

● Отсутствие Salmonella в 10 г или в 10 мл

● Отсутствие Staphylococcus au- reus в 1 г или в1 мл

4

Лекарственные растительные сред-

ства, состоящие из одного вида сырья (фасованная продукция) или нескольких (сборы), а также расти- тельное сырье «ангро»

А. Лекарственные растительные средства или лекарственное сырье

«ангро», применяемые в виде на- стоев и отваров, приготовленные с использованием кипящей воды

Б. Лекарственные растительные средства или растительное сырье

«ангро», приготовленные без ис- пользования кипящей воды

● Общее число аэробных бактерий

не более 107 в 1 г

● Общее число грибов не более

105 в 1г

● Escherichia coli не более 102 в 1 г

● Общее число аэробных бактерий не более 105 в 1 г

● Общее число грибов не более

104 в 1 г

● Энтеробактерий и других грам- отрицательных бактерий

не более 103 в 1 г

● Отсутствие Escherichia coli в 1 г

● Отсутствие Salmonella в 10 г

Таблица 32.2

Микробиологическая чистота субстанций и вспомогательных веществ для производства лекарственных препаратов

Катего- рия

Субстанции, вспомогательные вещества

Рекомендуемые нормы

1

2

3

1.2

Субстанции для производства:

А. Стерильных лекарственных пре- паратов, которые не подвер- гаются стерилизации

Б. Стерильных лекарственных пре- паратов, которые подвергаются стерилизации

В. Нестерильных лекарственных препаратов, относящихся к Кате- гории 2

Субстанции должны быть сте-

рильными

● Общее число аэробных бактерий и грибов (суммарно) не более

102 в 1 г или в 1 мл

● Отсутствие энтеробактерий в 1 г или в 1 мл

● Отсутствие Pseudomonas aerugi- nosa в 1 г или в 1 мл

● Отсутствие Staphylococcus au- reus в 1 г или в 1 мл

2.2

Субстанции синтетического

происхождения для производства нестерильных лекарственных пре- паратов

● Общее число аэробных бактерий

не более 103 в 1 г или в 1 мл

● Общее число грибов не более

102 в 1 г или в 1 мл

● Отсутствие Escherichia coli в 1 г или в 1 мл

3.2

Субстанции природного происхож-

дения (растительного, животного или минерального) для производ- ства нестерильных лекарственных препаратов

● Общее число аэробных бактерий

не более 104 в 1 г или в 1 мл

● Общее число грибов не более

102 в 1 г или в 1 мл

● Отсутствие Escherichia coli в 1 г или в 1 мл

● Отсутствие Salmonella в 10 г или в 10 мл

● Отсутствие Pseudomonas aerugi- nosa в 1 г или в 1 мл

● Отсутствие Staphylococcus au- reus в 1 г или в 1 мл

● Энтеробактерий не более

102 в 1 г или в 1 мл

4.2

Вспомогательные вещества (мука

пшеничная, крахмал, тальк и т.д.)

● Общее число аэробных бактерий

не более 103 в 1 г или в 1 мл

● Общее число грибов не более

102 в 1 г или в 1 мл

● Отсутствие Escherichia coli в 1 г или в 1 мл

● Отсутствие Salmonella в 10 г или в 10 мл

● Отсутствие Pseudomonas aerugi- nosa в 1 г или в 1 мл

● Отсутствие Staphylococcus au- reus в 1 г или в 1 мл

● Других энтеробактерий- не более 102 в 1 г или в 1 мл

Примечания к табл. 32.1 и 32.2

1. В нормативных документах могут быть указаны в виде исключения и другие нормы в зависимости от состава препарата и особенностей технологического процесса производства.

2. В нормативных документах на препараты для детей должны быть введены более жесткие нормы, а именно: количество аэробных бактерий в 1 г или в 1 мл – в пределах от 100 до 500, количество грибов – от 10 до 50, отсутствие бактерий семейства Enterobacteriaceae, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus.

3. При обнаружении во время проведения испытания других патогенных бактерий, кроме указанных выше, считают, что качество лекарственных средств, субстанций и вспомогательных веществ не соответствует требованиям по показателю «микробиологическая чистота».

Испытание на микробиологическую чистоту включает способы подготовки образцов различных лекарственных форм перед испытанием, отбор образцов для анализа, методы количественного определения жизнеспособных бактерий и грибов, выявление и идентификацию отдельных видов бактерий, наличие которых недопустимо или ограничено в нестерильных лекарственных средствах, а также питательные среды, растворы и реактивы.

Испытание проводят в асептических условиях, чтобы предотвратить контаминацию исследуемых образцов.

1. Определение антимикробного действия лекарственного средства

Перед проведением контроля необходимо определить, обладает ли исследуемое лекарственное средство в условиях испытания на микробиологическую чистоту антимикробным действием, подавляющим рост отдельных видов бактерий и грибов, так как это может привести к неправильной оценке результатов анализа.

Для определения антимикробного действия используют тест-микроорганизмы, представленные в табл. 32.3.

Таблица 32.3

Тест-микроорганизмы для определения антимикробного действия

Тест-штаммы

Источник получения

Bacillus subtilis ATCC 6633

Bacillus cereus АТСС 10702

Escherichia coli ATCC 25922

Salmonella abony IHE 103/39

Pseudomonas aeruginosa ATСС 9027 (или P. aeruginosa ГИСК 453) Staphylococcus aureus ATCC 6538-Р

Государственная коллекция патогенных микроорганизмов ГИСК им. Л.А. Тарасевича, Россия, г. Москва

Candida albicans NCTC 885-653

Candida albicans АТСС 10231

Всероссийский микологический Центр,

Россия, г. Санкт-Петербург

Aspergillus niger АТСС 9642

Всероссийская коллекция микроорганизмов

РАН, Россия, г. Москва

Кроме вышеперечисленных тест-штаммов можно использовать и другие микроорганизмы из различных коллекций, типичные по культурально-морфологическим, тинкториальным и биохимическим свойствам. Набор тест-микроорганизмов может быть уменьшен или увеличен в зависимости от способа применения или состава испытуемого лекарственного средства.

1.2. Работа с тест-микроорганизмами

Ампулы с лиофилизированными культурами бактерий и грибов вскрывают в асептических условиях и вносят в них около 0,5 мл соответствующей жидкой питательной среды (например, среда № 8 – для бактерий, жидкая среда Сабуро – для C.аlbicans). Полученную взвесь тест-культур переносят в пробирки с теми же жидкими питательными средами и инкубируют при соответствующей температуре в течение 24 ч (бактерии) или 48 ч (C.albicans). После 2-3-х пассажей с бульона на бульон культуру микроорганизмов пересевают с помощью бактериологической петли на питательный агар в чашках Петри для получения изолированных колоний. Выросшую культуру каждого тест-штамма проверяют визуально на чистоту роста, изучают культурально-морфологические, тинкториальные и биохимические свойства. Типичные колонии пересевают в пробирки на скошенный агар того же состава и инкубируют, как было указано выше, считая полученную культуру исходной.

Культуру A.niger пересевают на агар Сабуро и инкубируют при температуре (22,5 ± 2,5) ºС в течение 5-7 сут до появления конидий (экзогенных спор черного или темно-коричневого цвета).

Культуры бактерий пересевают каждый месяц, грибов – каждые 3 месяца, делая не более 5 пассажей с агара на агар, после чего используют новую ампулу или исходную культуру со среды хранения.

Тест-штаммы бактерий хранят при температуре (5 ± 1) ºС в лиофилизированном состоянии или под слоем стерильного вазелинового масла на среде Романова.

Тест-культуру С.albicans хранят под слоем стерильного вазелинового масла на среде № 2 (агар Сабуро), в которой количество агара уменьшено до 0,5 %. Тест-культуру A.niger хранят на среде № 2.

При пересеве культур со сред хранения предварительно удаляют слой масла над агаром, бактериологической петлей снимают верхний слой агара с выросшей культурой и переносят его в пробирки со средой № 8 для бактерий, жидкой средой Сабуро – для C.аlbicans. Посевы на среде № 8 инкубируют при температуре (32,5 ± 2,5) ºС в течение 18-24 ч, посевы на жидкой среде Сабуро – при температуре (22,5 ± 2,5) ºС в течение 48 ч для C.аlbicans. Для получения конидий культуру A.niger пересевают на среду № 2 и инкубируют при температуре (22,5 ± 2,5) ºС в течение 5-7 сут.

1.2.1. Приготовление спор B.subtilis

Если не удается получить гомогенную взвесь клеток B.subtilis, используют споры, получаемые следующим образом.

Культуру B.subtilis выращивают в пробирке на скошенном соево-казеиновом агаре или среде № 1 в течение 24 ч при температуре (32,5 ± 2,5) ºС. Смывают

5 мл стерильного 0,9 % изотонического раствора натрия хлорида со стерильными стеклянными бусами. Взвесь бактерий переносят в матрац с 300 мл скошенного питательного агара, содержащего для ускорения спорообразования марганца сульфат в количестве 1 мг/л среды. Посевы инкубируют в течение

7 сут. при температуре (32,5 ± 2,5) ºС. Для подтверждения достаточного образования спор выросшую культуру микроскопируют. Если в мазках, окрашенных по Граму, имеется в поле зрения 80-90 % спор, делают смыв культуры, внося в матрац 45 мл стерильного 0,9 % изотонического раствора натрия хлорида. Нагревают полученную взвесь 30 мин на водяной бане при температуре 65 ºС, центрифугируют при 4300 об/мин в течение 15 мин, отмывают не менее 3 раз стерильным 0,9 % изотоническим раствором натрия хлорида до полной прозрачности надосадочной жидкости. Снова нагревают на бане при температуре 65 ºС в течение 30 мин. Центрифугируют в течение 15 мин, ресуспендируют осадок (споры) в том же растворе, определяют количество спор в 1 мл чашечным агаровым методом. Хранят суспензию спор при (5 ± 1) ºС в запаянных ампулах или пробирках не менее 8 недель.

Тут вы можете оставить комментарий к выбранному абзацу или сообщить об ошибке.

Оставленные комментарии видны всем.