- •1. Определение антимикробного действия лекарственного средства
- •1.2. Работа с тест-микроорганизмами
- •1.3. Проведение испытания
- •1.4. Учет и интерпретация результатов
- •1.5. Способы устранения антимикробного действия лекарственных средств
- •2. Особенности отбора и подготовки образцов для анализа
- •2.1. Твердые лекарственные формы
- •2.2. Мягкие лекарственные формы
- •2.3. Жидкие лекарственные формы
- •2.4. Аэрозоли
- •2.5. Трансдермальные пластыри
- •2.6. Лекарственные растительные средства
- •3. Методы количественного определения аэробных бактерий и грибов
- •3.2. Количественное определение микроорганизмов
- •3.2.2. Метод мембранной фильтрации
- •3.2.3. Метод наиболее вероятных чисел (нвч)
- •4. Определение отдельных видов бактерий
- •4.1. Энтеробактерии и подобные им грамотрицательные микроорганизмы
- •4.2. Выявление Escherichia coli
- •4.3. Выявление бактерий рода Salmonella
- •4.4. Выявление Pseudomonas aeruginosa
- •4.5. Выявление Staphylococcus aureus
- •5. Биохимические тесты для идентификации микроорганизмов
- •5.1. Тест на наличие цитохромоксидазы
- •5.2. Тест на наличие индола
- •5.3. Тест на наличие коагулазы (реакция плазмокоагуляции)
- •6. Питательные среды. Определение ростовых и селективных свойств
- •6.1. Рекомендуемые растворы и питательные среды
- •6.2. Ростовые и селективные свойства питательных сред
2. Особенности отбора и подготовки образцов для анализа
От каждой исследуемой серии лекарственного средства, независимо от ее объема, отбирают образец для анализа из достаточного количества разных упаковок препарата (не менее 3-5).
2.1. Твердые лекарственные формы
2.1.1. Образец для анализа
При анализе препарата используют 10 г образца для определения общего числа бактерий и грибов в 1 г препарата, для испытания на наличие P.aeruginosa, S.aureus и E.coli, 10 г образца – для определения Salmonella, 10 г – для количественного определения других энтеробактерий, если нет других указаний в частной фармакопейной статье.
2.1.2. Таблетки, драже, гранулы, порошки и др.
10 г образца (если другое количество не указано в частной фармакопейной статье) измельчают (в случае необходимости) в стерильных фарфоровых ступках или с помощью специального оборудования и переносят в 100 мл буферного раствора. Далее проводят количественное и качественное определение микроорганизмов.
2.1.3. Капсулы
10 г образца переносят в 100 мл буферного раствора, содержащего не более
5 % твина-80 и нагретого до температуры не выше 40 ºС. После суспендирования капсул в буферном растворе проводят количественное и качественное определение микроорганизмов.
2.2. Мягкие лекарственные формы
2.2.1. Образец для анализа
При анализе используют 10 г препарата для определения общего числа бактерий и грибов, для испытания на наличие P.aeruginosa, S.aureus, E.coli в 1 г препарата, 10 г образца – для испытания на наличие бактерий сем. Enterobacteriaceae в 1 г препарата, если нет других указаний в частной фармакопейной статье.
2.2.2. Мази, линименты, кремы, суппозитории, легко смешиваемые с водой
10 г образца помещают в стерильную колбу, содержащую 100 мл буферного раствора и стеклянные бусы диаметром 5-6 мм. Смесь нагревают на водяной бане до температуры не выше 40 ºС и энергично встряхивают до получения гомогенной эмульсии, которую используют для количественного и качественного определения микроорганизмов.
2.2.3. Мази, линименты, кремы, суппозитории, трудно смешиваемые с водой
10,0 г образца смешивают со стерильным твином-80, количество которого не должно быть более 1/2 объема образца (в данном случае 5 г). Смесь нагревают на водяной бане или в термостате до температуры не выше 40 ºС (в исключительных случаях – до 45 ºС) и осторожно перемешивают. При этом время нагревания не должно превышать 30 мин. Добавляют необходимое количество предварительно нагретого до соответствующей температуры стерильного фосфатного буферного раствора и стеклянные бусы диаметром 5-6 мм. Смесь осторожно перемешивают для получения гомогенной эмульсии в разведении 1:10, которую используют для количественного и качественного определения микроорганизмов.
При необходимости готовят последующие десятикратные разведения, используя фосфатный буферный раствор, содержащий соответствующую концентрацию стерильного твина-80 (П48).