1.4. Учет и интерпретация результатов

Наличие такого же роста тест-микроорганизмов, как в контроле, обозначают знаком «+», отсутствие роста – знаком «–», слабый, замедленный или угнетенный рост – знаком «±». Если по сравнению с контролем на средах с препаратом наблюдают заметное уменьшение количества колоний на чашках (более 70 %) или отсутствие роста тест-микроорганизмов, делают заключение о наличии антимикробного действия.

Первое из последовательных разведений препарата, в котором отсутствует антимикробное действие, используют для посева на соответствующую питательную среду.

1.5. Способы устранения антимикробного действия лекарственных средств

Для устранения антимикробного действия препаратов применяют следующие методы:

● Используют соответствующие специфические инактиваторы (например, парааминобензойную кислоту (ПАБК) и β-лактамазу), нейтрализующие антимикробное действие препарата, но не угнетающие рост микроорганизмов, контаминирующих НЛС.

● Используют неспецифические инактиваторы, добавляя в буферный раствор и/или в питательные среды: твин-20 (П47), твин-80 (П48), соевый или яичный лецитин и др. Для разведения лекарственного средства перед испытанием на микробиологическую чистоту можно использовать стерильную нейтрализующую жидкость.

Если разведение в вышеприведенном растворе не инактивирует антимикробные свойства лекарственного средства, увеличивают концентрацию твина-80 ^{или лецитина. Альтернативно допускается добавление в буферный раствор дру}гих веществ, инактивирующих антимикробное действие лекарственных средств.

● Увеличивают разведение препарата, взяв больший объем растворителя в пределах норм допустимой микробной загрязненности.

● Применяют метод мембранной фильтрации с последующей промывкой фильтров, если позволяет природа исследуемого лекарственного средства, т.е. препарат растворим в воде или в изопропилмиристате (ИПМ) (И12).

1.5.1. Инактивация некоторых антибиотиков

Для инактивации пенициллинов и цефалоспоринов, независимо от их лекарственной формы, в буферный раствор, используемый для растворения, суспендирования или эмульгирования образца, а также в питательные среды перед их употреблением, асептически вносят стерильный раствор β-лактамазы в количестве, указанном в частной фармакопейной статье.

1.5.2. Инактивация сульфаниламидных препаратов

Для инактивации сульфаниламидных препаратов, независимо от их лекарственной формы, в буферный раствор, используемый для растворения, суспендирования или эмульгирования образца, а также в питательные среды до стерилизации вносят парааминобензойную кислоту (ПАБК) из расчета 0,05 г/л среды, если антимикробное действие не удается устранить путем разведения.

1.5.3. Инактивация консервантов, входящих в состав лекарственных средств

Для инактивации консервантов, входящих в состав ряда лекарственных препаратов, в буферный раствор, в котором эмульгируют образец, а также в питательные среды до стерилизации вносят следующие неспецифические инактиваторы: 3 % твина-80 (П48) или 0,3 % лецитина (яичного или соевого) от объема среды. В случае, если в препарате имеется более 2 консервантов различной химической структуры, в среду вносят 0,3 % лецитина; 3 % твина-80; 0,1 % L-гистидина и 0,5 % натрия тиосульфата (Н114) одновременно.

Инактиваторы антимикробного действия консервантов лекарственных средств указаны в табл. 32.4.

Таблица 32.4

Инактиваторы антимикробного действия консервантов лекарственных средств

Химические соединения	Инактиватор	Концентрация	Примечание
Фенолы	●Натрия лаурилсульфат (Н67) ●Твин-80 (П48) и лецитин ●Яичный желток	4,0 г/л 30,0 г/л и 3,0 г/л 5,0-50,0 мл/л	Добавляют в стериль- ный буферный раствор с натрия хлоридом и пептоном рН 7,0
Ртутно-органи- ческие соедине- ния	Натрия тиогликолят (Н113)	0,5-5,0 г/л
Галогены	Натрия тиосульфат (Н114)	5,0 г/л	—
Четвертичные соединения ам- мония	Яичный желток	5,0-50,0 мл/л	Добавляют в стериль- ный буферный раствор с натрия хлоридом и пептоном рН 7,0

^{В качестве растворителя для устранения антимикробного действия исполь}зуют также нейтрализующую жидкость лабораторного или промышленного изготовления следующего состава:

Твина-80 (П48) – 30,0 г Лецитина (яичного или соевого) – 3,0 г Гистидина гидрохлорида (Г37) – 1,0 г Пептона (мясного или казеинового) – 1,0 г Натрия хлорида (Н125) – 4,3 г Калия фосфата однозамещенного (К97) – 3,6 г Натрия фосфата двузамещенного (Д76) – 7,2 г Воды очищенной – 1000 мл Стерилизуют в автоклаве, валидируя

процесс стерилизации

рН после стерилизации – 7,6 ± 0,2

Если в связи с природой лекарственного средства, нерастворимого в воде или изопропилмиристате (И12), нельзя использовать метод мембранной фильтрации, а все вышеперечисленные методы устранения его антимикробного действия в отношении конкретного тест-микроорганизма неэффективны, этот вид испытания не проводят.