- •1. Определение антимикробного действия лекарственного средства
- •1.2. Работа с тест-микроорганизмами
- •1.3. Проведение испытания
- •1.4. Учет и интерпретация результатов
- •1.5. Способы устранения антимикробного действия лекарственных средств
- •2. Особенности отбора и подготовки образцов для анализа
- •2.1. Твердые лекарственные формы
- •2.2. Мягкие лекарственные формы
- •2.3. Жидкие лекарственные формы
- •2.4. Аэрозоли
- •2.5. Трансдермальные пластыри
- •2.6. Лекарственные растительные средства
- •3. Методы количественного определения аэробных бактерий и грибов
- •3.2. Количественное определение микроорганизмов
- •3.2.2. Метод мембранной фильтрации
- •3.2.3. Метод наиболее вероятных чисел (нвч)
- •4. Определение отдельных видов бактерий
- •4.1. Энтеробактерии и подобные им грамотрицательные микроорганизмы
- •4.2. Выявление Escherichia coli
- •4.3. Выявление бактерий рода Salmonella
- •4.4. Выявление Pseudomonas aeruginosa
- •4.5. Выявление Staphylococcus aureus
- •5. Биохимические тесты для идентификации микроорганизмов
- •5.1. Тест на наличие цитохромоксидазы
- •5.2. Тест на наличие индола
- •5.3. Тест на наличие коагулазы (реакция плазмокоагуляции)
- •6. Питательные среды. Определение ростовых и селективных свойств
- •6.1. Рекомендуемые растворы и питательные среды
- •6.2. Ростовые и селективные свойства питательных сред
2.3. Жидкие лекарственные формы
2.3.1. Образец для анализа
При анализе препарата используют 10 мл образца для определения общего числа бактерий и грибов в 1 мл препарата, для испытания на наличие P.aeruginosa, S.aureus и E.coli, 10 мл образца – для количественного и качественного определения E.coli и других энтеробактерий, 10 мл – для определения Salmonella.
2.3.2. Растворы, суспензии, сиропы, микстуры
10 мл образца переносят в 90 мл буферного раствора, перемешивают и проводят количественное и качественное определение микроорганизмов.
2.3.3. Растворы в маслах, эмульсии
10 мл образца помещают в стерильную колбу, содержащую 90 мл буферного раствора с твином-80 (П48) в количестве не более 5 % и стеклянные бусы диаметром
5-6 мм. Смесь нагревают на водяной бане до температуры не выше 40 ºС и энергично встряхивают до получения гомогенной эмульсии, которую используют для количественного и качественного определения микроорганизмов.
2.4. Аэрозоли
2.4.1. Образец для анализа
При анализе препарата используют 3 г образца для определения общего числа аэробных бактерий и грибов в 1 г препарата и испытания на наличие P.aeruginosa, S.aureus, 3 г образца – для испытания на наличие бактерий семей-
ства Enterobacteriaceae. Образец отбирают путем многократных нажатий на шток клапана (насадку).
2.4.2. Аэрозоли на основе спиртов
3 г образца (после испарения пропеллента) переносят в 30 мл буферного раствора, перемешивают и проводят количественное и качественное определение микроорганизмов.
2.4.3. Аэрозоли на основе масел
3 г образца (после испарения пропеллента) переносят в 30 мл буферного раствора с твином-80 в количестве не более 5 % и стеклянные бусы диаметром
5-6 мм. Смесь нагревают на водяной бане до температуры не выше 40 ºС и энергично встряхивают до получения гомогенной эмульсии, которую используют для количественного и качественного определения микроорганизмов.
2.4.4. Аэрозоли на основе твердых веществ
3 г образца (после испарения пропеллента) переносят в 30 мл буферного раствора, перемешивают и проводят количественное и качественное определение микроорганизмов.
2.5. Трансдермальные пластыри
2.5.1. Образец для анализа
При отборе трансдермальных пластырей используют образец, состоящий из
20 единиц.
2.5.2. С каждого из 10 пластырей снимают защитную пленку, пользуясь стерильными инструментами. При необходимости разрезают пластырь стерильными ножницами на более мелкие фрагменты, которые переносят в колбу емкостью 1000 мл, содержащую 500 мл стерильного буферного раствора и стеклянные бусы диаметром 5-6 мм, нагревают на водяной бане до температуры не выше 40 ºС, энергично встряхивают в течение 30 мин.
50 мл полученного смыва используют для количественного определения микроорганизмов методом мембранной фильтрации, а также для выделения P.aeruginosa, S.aureus.
Для выделения и количественного определения энтеробактерий используют следующие 10 пластырей, которые вносят в лактозный бульон (среду № 11).
Если известно, что пластырь обладает антимикробным действием, в разбавитель добавляют подходящий инактиватор (твин-80 (П48) и/или лецитин).
Если смыв с трансдермальных пластырей нерастворим и нельзя использовать метод мембранной фильтрации, применяют метод прямого посева на питательные среды.