VET_1-2004

Характеристики мазков крови при бабезиозе у собак

Бабезиоз собак - это протозойное заболевание,

возбудитель которого передается при укусе собак клещами.

Данный возбудитель вызывает бабезиоз собак, который также называют пироплазмозом.

Окончательный диагноз основан на обнаружении паразитов в мазках крови. Для мерозоитов наиболее характерно парное присутствие внутри эритроцитов, они имеют форму груши и их размер достигает 4 - 5 мкм (фото 1). В данной статье мы будем говорить только о Babesia canis, которые встречаются в Европе (а также и у нас), и о Babesia gibsoni (они более мелкие и имеют круглую или овальную форму). Все способы обычной окраски позволяют визуализировать паразитов, но наиболее быстрые из них (например, Diff-Quick или RAL) намного лучше адаптированы для постановки диагноза в условиях клиники во время проведения консультации. Отмечено, что Babesia canis можно обнаружить в неокрашенных мазках крови, но, несмотря на это, наиболее достоверным и информативным является способ быстрой окраски. В основном мерозоиты в достаточно больших количествах находятся по краям мазка и в его косичках (самой тонкой части мазка, образующейся в форме косичек при нанесении его на предметное стекло), что позволяет провести анализ в течение нескольких минут. Взятие крови из капилляров осуществляют путём надреза в области ушной раковины, так как периферическая венозная кровь в большей степени, чем центральная поражена паразитами.

Помимо обнаружения наиболее типичных грушевидных форм паразитов, представленных парами, встречаются и другие варианты Babesia canis: в фазе деления; в виде нескольких пар (по 4 и 8 мерозоитов в одном эритроците), которые обнаруживают обычно при остром течении заболевания (фото 1 и 2); в форме амёбы или аннулярные (фото 3), выявляемые, в основном, в случаях хронического течения заболевания. Значительно реже мерозоиты обнаруживают в свободном состоянии вне эритроцитов: в данном случае они часто имеют форму кораблика, иногда кольца (фото 4). Все варьирующиеся формы паразита позволяют поставить окончательный диагноз. Несмотря на это, всегда следует быть очень осторожным, если удалось обнаружить только один мерозоит в мазке, и он не имеет соответствующей формы и/или типичной локализации. Некоторые артефакты могут привести к ошибке при постановке диагноза на бабезиоз (например: наслоение тромбоцита на эритроцит, плохая фиксация или наличие «пузырьков» внутри эри-

21

Фото 1. Характерные двойные грушевидные пары, персистирующие в эритроцитах. Эритроциты содержат 4 мерозоита (окраска крови по Diff Quik, х 1000).

троцитов после окраски мазка, попадание на поверхность эритроцитов и предметное стекло мелких кусочков краски).

Если исследование мазка крови не позволяет быстро выявить паразитов, то следует искать косвенные признаки, указывающие на их персистенцию в крови. Косвенные признаки проявляются в отношении эритроцитов (полихроматофилияанизоцитоз), лейкоцитов (лейкопения, мононуклеоз) и тромбоцитов (тромбоцитопения).

Несмотря на то, что картина данного заболевания характеризуется такими классическими признаками, как гипертермия, гемолиз с элементами гемоглобинурии и регенеративная анемия (полихроматофильный анизоцитоз эритроцитов, присутствие эритробластов), она не всегда имеет четкое проявление во время первого исследования (из семи иллюстраций наиболее характерная картина представлена на фото 5). Следовательно, отсутствие признаков регенерации в мазках крови не дает повода для прекращения поиска бабезий (пироплазм). Форма заболевания с выражен-

Фото 2. Babesia canis в эритроцитах: много парных форм (толстая стрелка), и формы в состоянии деления (тонкие стрелки) (окраска крови по Diff Quik, х1000).

22

Фото 3. Babesia canis в эритроцитах: аннулярная форма (окраска крови по Diff Quik, х 1000).

Фото 5. Эритрофагоцитоз при Babesia canis: мерозоиты визуализируются внутри фагоцитированных эритроцитов, отмечается полихроматофилия и анизоцитоз эритроцитов (окраска крови по Diff Quik, х1000).

Фото 6. Эритрофагоцитоз при бабезиозе собак. Мерозоиты не визуализируются и дифференциальная диагностика должна быть осуществлена по наличию морулы Еhrlichia canis (окраска крови по Diff Quik, х1000).

Фото 4. Восемь мерозоитов Babesia canis в свободном состоянии (окраска крови по Diff Quik, х1000).

Фото 7. Мононуклеоз с множеством макрофагов в случае бабезиоза собаки (окраска крови по Diff Quik, х1000).

Исследование прогрессирующей атрофии сетчатки глаза у бордер-колли: результаты 213 клинических исследований 161 собаки

Офтальмоскопическое исследование бордерколли, проводимое, по возможности, многократно, начиная

с 3-х месячного возраста до 15 лет, позволило определить значимость электроретинографии (ЭРГ) в ранней диагностике заболевания. Метод флуоресцентной ангиографии (ФА) также важен для подтверждения природы заболевания сетчатки глаз.

Бордер-колли - это рабочая порода собак, которую раньше использовали для пастьбы стада (преимущественно овец, а также КРС). Владельцы, желающие определить их работоспособность, получают контрольное свидетельство, которое, при необходимости, предоставляют судебным экспертам (приложение 1).

Оценка состояния зрения необходима также для того, чтобы во французской ассоциации бордер-колли ответственные лица могли осуществлять контроль за наследственной передачей нарушений сетчатки глаза.

После ознакомления с наследуемыми аномалиями наружного слоя сетчатки, которые встречаются у бордер-кол- ли, проводится поэтапное изучение:

-дна здорового глаза;

-дна больного глаза с дегенеративными нарушениями сетчатки, ориентируясь на данные 213 исследований, которые были проведены на 161 собаке;

-изучение родословных.

Результаты исследований были проанализированы с учетом данных научной литературы и собственных наблюдений.

1. НАСЛЕДСТВЕННЫЕ АНОМАЛИИ НАРУЖНЫХ СЛОЕВ СЕТЧАТКИ У БОРДЕР-КОЛЛИ

1.1 Дистрофия пигментного эпителия сетчатки глаза (ДПЭС, атрофия центральной части сетчатки)

В1954 году Parry H.B. впервые в Великобритании описал данную породу собак.

В1965, согласно Barnett K.C. (Англия), появление билатерального нарушения в популяции молодых собак (1-2 года) составило 12% по данным офтальмоскопических исследований. Автор уточняет, что данную аномалию удалось снизить до 2 % при систематическом применении схемы офтальмоскопического контроля (выявление и иррадикация).

По данным Parry H.B. (1954), трансмиссия этой патологии объясняется полигенетической природой; по Barnett K.C. она имеет аутосомный доминантный признак. Согласно информации, полученной от американского Коллед-

жа Ветеринарной Офтальмологии (ACVO) (1992), способ передачи указанной аномалии в данной породе собак не установлен.

Симптомы, выявляемые с помощью офтальмоскопа, имеют форму «мушек» темно-коричневого цвета, которые локализуются в ковровой зоне сетчатки глаза (фото 1). Они варьируются по плотности, количеству и локализации, иногда распределяются равномерно по всей длине сосудов сетчатки, иногда - нерегулярно, образуя пигментированную сеть в ее ковровой зоне (ACVO, 1969). Уменьшение диаметра сосудов и сероватая картина в области зрительного сосочка визуализируются в стадии развития заболевания; они обладают повышенной отражательной способностью в ковровой зоне. По данным Barnett K.C. (1990, 1996), у бордер-колли, в отличие от других пород собак, эти нарушения располагаются достаточно симметрично. Большая часть животных не утрачивают полностью способности видеть (остается периферическое зрение), и острота зрения, вероятно, улучшается по отношению менее освещенным и неподвижным объектам.

1.2. Дистрофия фоторецепторов сетчатки (прогрессирующая генерализованная атрофия сетчатки, ПГАС)

Билатеральное и часто симметричное нарушение, описанное Rubin L.F. (1989) у молодых (половозрелых) бор- дер-колли и взрослых особей, проявляется клинически в возрасте двух лет.

Это нарушение, как отмечает автор, характеризуется повышенной отражательной способностью, проявляющейся в виде полоски, располагающейся вблизи или на границе сочленения ковровой и не ковровой зон сетчатки (фото 2). Повышенная отражаемость в виде полоски характеризуется постепенно нарастающим центростремительным усилением от частей ковровой и не ковровой зон сетчатки, где начало ее определяют путем сравнения с параллельной нормально отражающейся частью ковровой зоны (фото 3). В этом случае говорят о «туннельном зрении», которое может сохраняться в течение определенного времени, до наступления слепоты свидетельствует о завершении патологического процесса. Способ передачи ПГАС, что имеет большое значение, у бордерколли не расшифрован, несмотря на предполагаемую взаимосвязь с аутосомным рецессивным признаком, как это встречается у многих пород.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Материалы

Исследования проводились на 161 собаке (87 самцов и 74 самки) в возрасте от 3 месяцев до 13 лет. Однократно или в первый раз было обследовано 115 особей в возрасте до 2 лет.

По кратности исследований было задействовано следующее количество собак: один раз - 128; два раза - 24; три раза - 3; четыре раза - 3; пять раз - 2; 6 раз - 1. До этого было обследовано 2 собаки: один раз - 1 самец; один раз - 1 самка, которая затем была обследована другим ветеринарным врачом. Повторные исследования, имели следующие интервалы: минимальный срок - шесть месяцев; в возрасте 2,5 и более лет было два последующих исследования. Большинство животных подвергались данной процедуре с интервалом в один год.

2.2. Методы

2.2.1. Клиническое обследование

Все животные были обследованы по следующей схеме:

•выявление фотомоторных рефлексов и моргание на опасность;

•биомикроскопическое исследование с помощью портативного прибора до и после расширения зрачка, чего добивались путем применения тропикамида (Mydriaticum-R);

•непрямое офтальмоскопическое исследование (линзы - 30D и 20D) после расширения зрачков с помощью мидриатикума (Mydriaticum-R).

2.2.2. Дополнительные методы исследования

Среди собак с повреждением сетчатки глаза 13 были подвержены ЭРГ и 10 - ФА. ЭРГ проводили во время дилатации зрачков после введения лекарственного препарата (Mydriaticum-R) и адаптации их минимум 15 минут в темноте под общей анестезией: ксилазин (Rompun-R) - кетамин (Imalgene 1000- R) в равных пропорциях из расчета 1 мл смеси на 10 кг веса в/в. Аппарат Seremspectral, предназначенный для проведения ЭРГ, был оснащен игольчатыми электродами (нижние веки, наружная поверхность ушных раковин, окципитальный гребень). Его использовали следующим образом:

•стимуляция голубым коротковолновым светом (450 нм) в скотопической* обстановке (10 стимуляций, частота = 1 Гц);

•стимуляция белым ахроматическим светом в скотопической обстановке (10 стимуляций, частота = 1 Гц).

Полученные графические кривые сравнивали с показателями самца бор- дер-колли (не включен в список обследуемых собак) в возрасте двух лет (рис. 1А и 2А), у которого в сетчатке при офтальмоскопическом исследовании не выявлено каких-либо повреждений.

Четырнадцатая по счету ЭРГ, выполненная на собаке номер 24, также свидетельствует о нормальном состоянии сетчатки глаза.

ФА также была проведена во время дилатации зрачка после назначения мидриатикума, но данный метод применяли на собаке без поведения анестезии с помощью портативного ретинографа Kowa RC2, оснащенного фильтрами и генератором, которые были адаптированы к ФА, снабженного черной и белой пленками Ilford ISO 400.

* Скотопия (гр. scotos, темнота; ops, opos, зрение), [англ. scotopic]. Метод определения чувствительности сетчатки глаза при освещении слабой интенсивности. Vision s. Син. Vision nocturn. Способность видеть в темноте (нет цветового ощущения).

Руководство для освидетельствования

Перечень «действий», предназначенный для экспертов, выполняющих освидетельствование, по каждому пункту.

1.Выверка данных собаки: возраст, татуировка, кличка.

2.Обследование физических данных.

3.Экзамен на характер.

4.Начало испытания. Условия для работы: десять овец на поляне, огороженной решетчатым забором, в виде круга диаметром 6 метров.

5.Подход к стаду, собака на поводке, остановка в 10 метрах. Вход.

6.Собака спущенна с поводка. Хозяин постоянно находится в неподвижном состоянии, Следит за ее реакцией («подчинение-послушание»?).

7.Хозяин делает поворот на 180 градусов, удаляется на 20 метров. Если собака не шевелится - позвать. Изучение ее реакции.

9.Собака управляется экспертом. Хозяин открывает загон и закрывает. Эксперт отпускает собаку и изучает ее поведение.

10.Хозяин перемещается вначале по кругу вокруг стада. Затем он руководствуется правилом поиска, чтобы выбрать для себя животных. Все это осуществляется на расстоянии 1,3 метра по возможности придерживаясь правил.

11.«Свободное поведение». Хозяин следит за качеством работы эксперта с собакой.

В пунктах 10 и 11: исследование реакции собаки: зрительная способность, мощность, терпение. В данном случае, способность собаки определяется ее возможностью вести поиск на установленной дистанции.

Приложение 1. Документ «руководство» которым должны пользоваться эксперты, освидетельствующие породу Бордер Колли.

2.2.3. Исследование родословных

Осуществляют исследования всех больных собак, за исключением тех особей, которые фигурируют в начале родословной. Для некоторых собак полученную конкретную информацию (обследование) или косвенную (учет общего обследования) по восходящей, нисходящей и боковым ветвям родословных дополнительно включают в исследование.

Если восходящие линии больных животных не указывали, то пользовались схемой предложенной Lasley J.F. (1978):

•выявление аномалии в четырех поколениях по восходящим ветвям (счет ведут от больных собак);

•выявление общего предка для больных собак, если в данном исследовании одна или несколько особей имеют высокую вероятность наследуемости (аутосомный рецессивный признак, если каждая больная собака исходит от общего предка по двум восходящим ветвям, тогда как аутосомным доминантным признаком считают обнаружение порока в одной восходящей ветви).

Если больные собаки были отнесены к восходящим ветвям, где заболевание проявляется через несколько генераций, то пользовались правилами Fraser Roberts J.A., Pembrey M.E. (1983), которые установили, что если больное животное имело хотя бы одного из двух родителей с тем же пороком, то вязка, осуществляемая между здоровой и больной особями (как это было доказано методом статистического анализа) дает 50% здоровых и 50% больных собак; но, если здоровое животное, которое произошло от больных родителей,

30 вступает в вязку со здоровым партнером, то будет рождаться клинически здоровый помет. Такой способ передачи аномалии связывают с аутосомным доминантным признаком.

Если больные собаки рождаются от здоровых родителей (теоретически это равняется 25%), если вязки, осуществляемые между здоровыми и больными особями, преимущественно дают физиологически нормальное поколение (здоровый родитель - носитель этих генов, имеет статистически достоверную вероятность получения 50% больного потомства), если от больных производителей получают неблагополучных по состоянию здоровья животных, если аномалию наблюдают в основном в некоторых линиях, и если частота встречаемости аномалий возрастает в результате близкородственного скрещивания, то следует считать, что заболевание передается по аутосомному рецессивному признаку.

По данным Acland G. et coll. (1994), на практике можно иногда наблюдать наследуемость рецессивного признака, связанного с полом, как, например, при заболевании ПГАС у сибирской хаски, где только у самцов, рожденных в семь- ях-носителях, проявляется данная аномалия. Это объясняется тем, что гомозиготные самки с рецессивным набором генов встречаются крайне редко: они рождаются при совокуплении больных самца и самки, или последние являются носительницами этого гена. Такой альянс, при всем желании не иметь в потомстве больных самцов, исключить невозможно.

3.РЕЗУЛЬТАТЫ

3.1.Клиническое исследование

3.1.1. Здоровое дно глаза

Как и у других пород, глазное дно у бордер-колли может варьироваться в зависимости от изменения окраса шерстного покрова. Здесь мы представляем варианты цветовой гаммы, которые, как мы думаем, связаны с частотой проявления патологии и, следовательно, могут быть использованы для оценки данной породы.

Окраска ковровой зоны сетчатки глаза колеблется от жёлтого цвета до зелёного. Часто она представлена смесью с преобладанием жёлтого цвета в центре и зелёного на периферии. Выраженную доминанту жёлтого цвета наблюдают у собак коричневого окраса с белыми отметинами, менее выраженную у собак чёрного окраса с рыжими и белыми отметинами, тогда как зелёный цвет ковровой зоны сетчатки глаз преобладает у особей чёрного окраса с белыми отметинами (фото 4, 5, 6).

Часто приходится обнаруживать «островки» пигментного эпителия, пигментированного в ковровой зоне сетчатки (фото 4, 5).

У собак мраморного окраса или блю мерль (персистенция гена, размывающего цвет шерстного покрова) мы констатируем разную степень нарушения ковровой зоны сетчатки (фото 7В) и пигментацию эпителия (часто серого цвета) (фото 7Ф), что позволяет видеть сосуды в области хороидного сплетения (фото 7В). Если пигментный эпителий изменен таким образом, то ковровая зона сетчатки приобретает жёлтозелёную окраску, граница между ковровой и не ковровой зонами сетчатки становится менее выраженной (наблюдают у собак чёрного окраса с рыжими и белыми отметинами).

Дно глаза у молодых особей имеет голубоватый оттенок в ковровой зоне (фото 7А). Ковровая зона, начиная с 2,5 месячного возраста, постепенно приобретает свойственную ей жёлто-зелё- ную окраску.

Зрительный сосочек у взрослых особей имеет круглую форму или вид толстоватого треугольника (фото 4, 5, 6), с наличием или нет по краю в виде чёрной или серой каймы (волокна не миелинизированные). Значительно труднее идентифицировать у собак глазное дно, лишённое ковровой зоны и пигментации сетчатки (фото 7В). Оно, как и у других пород собак, круглое и зна-

чительно меньше у молодых, чем у взрослых особей (фото 7А). В отличие от колли, извилистость сосудов редко присутствует в глазном дне у бордерколли. Если мы это наблюдаем, то, как следует из нашего опыта, речь в основном идет о нарушении в периферической зоне сетчатки (фото 8).

3.1.2. Больное глазное дно

Повреждение глазного дна мы наблюдали у 33 собак. Собаки N 4 и 8 (табл.1) были обследованы коллегой 1,5 года назад и имели здоровую сетчатку. Собака № 2 была обследована за два года до поступления к нам, и у нее была обнаружена атрофия сетчатки глаза. У собаки № 24 в возрасте двух лет по просьбе владельцев проводили ЭРГ (предполагаемые причины), так как при клиническом обследовании не удалось выявить данной патологии. Мы также наблюдали 34 собаки (табл. 1) с нарушением сетчатки глаза, которое у 33 особей было выявлено методом офтальмоскопического исследования.

Собаки с нарушением сетчатки глаза, которое было идентифицировано методом офтальмоскопии, имели возраст от 6 месяцев до 9 лет (в среднем 3,5 года); в данном случае было исследовано тридцать самцов и две самки (третью самку выявили с помощью ЭРГ). У 10 особей обнаружили унилатеральное нарушение, у 23 - билатеральное (табл. 1) в возрасте от одного до трех лет, у 12 особей патологию выявили во время повторного исследования.

Унилатеральные нарушения (собаки N: 4, 11, 17, 19, 22, 23, 25, 29, 31, 33) имели следующие свойства:

•в виде небольших очагов с повышенной отражаемостью или сероватого оттенка, изолированные в периферической части ковровой зоны сетчатки, хорошо разделяющиеся, с отсутствием каких-либо других изменений в области глазного дна (фото 9А и 9В). Эти собаки (N: 11, 23, 25, 29) могли видеть, отвечать морганием на угрозу, у них также присутствовал хорошо выраженный фотомоторный рефлекс на оба глаза. У животных, подверженных многократному обследованию в разные периоды жизни от года (собаки N 23 и 25) до 4-х лет (собака N 11), не удавалось обнаружить развития заболевания, но с другой стороны очаги поражения часто локализовались вблизи траектории сосудов;

•изолированные с повышенной отражаемостью (собаки N: 17, 19, 22, 31 и 33, фото 10), сероватые (собака N 31), с двумя повреждениями одновременно (собака N 17, фото 11), расположенны-