Проведение анализа

Добавить в кювету	Опытная проба	Холостая проба	Стандартная проба
1. Сыворотка	10 мкл	--	--
2. Стандарт	--	--	10 мкл
3. Дистиллиро-ванная вода	--	10 мкл	--
4. Реагент	1 мл	1 мл	1 мл

Перемешать содержимое каждой пробирки. Инкубировать 20 мин при температуре 37С. Измерить оптическую плотность опытной и стандартной проб против холостой пробы при длине волны 500-650 нм.

Расчет

Расчет по стандарту концентрации мочевины в сыворотке крови проводят по формуле:

Аоп С (ммоль/л) = -----------  Сст, Аст

где А_{оп / ст} – оптическая плотность опытной и стандартной проб,

соответственно;

С_ст – концентрация стандарта (ммоль/л).

Если концентрация мочевины превышает 26,8 ммоль/л (точка вне зоны линейности калибровочного графика), анализируемый образец (сыворотка или моча) следует развести 1:1 физиологическим раствором и повторить измерение, а полученный результат расчета умножить на 2.

Клинико-диагностическое значение: Отклонения от нормы содержания мочевины в сыворотке крови зависят от скорости ее биосинтеза и выделения.

Увеличение концентрации мочевины в сыворотке крови – один из главных признаков нарушения функции почек. Из фракций остаточного азота раньше всего повышается уровень мочевины и может достигать 90% от всего остаточного азота.

Повышение концентрации мочевины в сыворотке крови может носить и внепочечный характер: при потере жидкости организмом, при усиленном распаде белков (острая желтая атрофия печени, тяжелые заболевания).

Уменьшение содержания мочевины в сыворотке крови наблюдается при заболеваниях печени (паренхиматозная желтуха, цирроз) по причине нарушенного синтеза мочевины в гепатоцитах.

Лабораторная работа № 14.

Определение концентрации креатинина в биологических жидкостях кинетическим методом

Принцип метода: Кинетический метод без депротеинирования (осаждения белка) основан на цветной реакции Яффе (Jaffe). Креатинин в щелочной среде образует с пикриновой кислотой окрашенный (оранжевый) комплекс.

Изменение оптической плотности пробы за фиксированное время при длине волны 490-510 нм прямо пропорционально концентрации креатинина в ней.

Линейность метода: до 1,33 ммоль/л.

Норма:

Сыворотка крови – мужчины – 53-97 мкмоль/л (25-37С);

женщины – 44-80 мкмоль/л (25-37С).

Суточная моча – 88,5-133 ммоль/л.

Концентрация креатинина сохраняется стабильной в образцах при температуре хранения 2-8С в течение 24 часов.

Оборудование и реагенты:

1. Спектрофотометр с термостатированной кюветой, длина волны 490-510 нм, длина оптического пути 1 см; температура реакции 25-37С;

2. Секундомер;

3. Автоматические пипетки на 50 мкл, 250 мкл и 1000 мкл;

4. Сыворотка крови/ суточная моча. Мочу предварительно развести деионизированной водой в соотношении 1:50. Кроме сыворотки можно использовать гепаринизированную плазму;

5. Реагент 1 (гидроксид натрия 160 ммоль/л);

6. Реагент 2 ( пикриновая кислота 4,0 ммоль/л);

7. Стандарт (раствор креатинина 177 мкмоль/л);

8. Дистиллированная вода.