- •5. Исследование системы гемостаза
- •5.1. Принципы лабораторной диагностики вторичных тромбофилических состояний
- •I. Гемореологические формы тромбофилии
- •5.2. Клинико-диагностическое значение гипергомоцистеинемии в развитии тромбофилических состояний
- •5.3. Лабораторная диагностика наследственных нарушений фибринолиза и дисфибриногенемий
- •5.4. Лабораторные методы диагностики двс-синдрома
- •5.5. Маркеры активации сосудисто-тромбоцитарного гемостаза
- •5.6. Фибринолитическая (плазминовая) система. Современные методы изучения
- •Вопрос 5.3.
- •5.7. Лабораторные методы оценки факторов внешнего и внутреннего пути свертывания (ачтв, птв/мно, микст-тесты, ядовые тесты)
- •5.8. Принципы лабораторной диагностики дефицита отдельных факторов свертывания (диагностика гемофилии)
- •5.9. Основные лабораторные тесты для характеристики конечных этапов системы свертывания (тромбиновое время, фибриноген)
- •5.10. Основные компоненты системы первичных антикоагулянтов (антитромбин III, протеин с). Лабораторная диагностика
5.10. Основные компоненты системы первичных антикоагулянтов (антитромбин III, протеин с). Лабораторная диагностика
Физиологические антикоагулянты разделяют на первичные и вторичные. Первичные антикоагулянты всегда присутствуют в крови, а вторичные образуются в результате коагуляционных реакций.
К первичным антикоагулянтамотносятся:
антитромбин III;
протеин С;
протеин S;
ингибитор внешнего пути свертывания (TFPI);
кофактор гепарина II
Антитромбин III (АТ) обладает мощным антикоагулянтным действием только в комплексе с гепарином. Этот комплекс надежно блокирует коагуляционные факторы IIа, IXа, Xа, XIа, XIIа и калликреин.Дефицит АТ – серьезный фактор риска развития венозных тромбозов.
Кофактор гепарина II. Его действие усиливается во много раз при взаимодействии с гепарином. Однако клиническая значимость его невелика.
Ингибитор внешнего пути свертывания (TFPI). Установлено, что он тормозит образование фактора Xа по внешнему механизму коагуляции.
Антикоагулянтная система протеина С включает в себя цепь последовательных биохимических реакций. Образующийся в процессе коагуляции тромбин связывается на эндотелии с мембранным гликопротеином –тромбомодулином, и вследствие этого теряет всю свою коагуляционную активность, но сохраняет способность активировать протеин С. После этого активированныйпротеин Сспротеином S в качестве кофактора, на фосфолипидной поверхности расщепляетфактор Vаифактор VIIIа. Этот механизмэффективно предупреждает дальнейшее образование тромбина и трансформирует его в активатор антикоагулянтного механизма.
Вторичными антикоагулянтамиявляютсяпродукты деградации фибриногена и фибрина. Они тормозят конечный этап коагуляции.
Определение активности антитромбина III в плазме крови человека по U. Abildgaard (Абильгаард-АТ III тест)
Реагенты: лиофилизированный тромбин, плазма-калибратор, лиофилизированная, буфер имидазоловый концентрированный, стабилизатор (этиленгликоль).
Принцип метода: оценку активности антитромбина IIIв исследуемой плазме проводят по остаточной активности тромбина после его взаимодействия с антитромбиномIIIв дефибринированной плазме.
Определение активности АТ IIIпроводят по калибровочному графику, в котором время образования сгустка фибрина прямо пропорционально активности АТIII. Процесс стандартизируется проведением реакции при постоянной температуре (370С).
В тесте участвуют 3 плазмы: исследуемая (дефибринируется), плазма-калибратор с аттестованной активностью АТ III(дефибринируется) и фибриноген-плазма (любая, донорская) – является источником фибриногена.
В исследуемой плазме крови тепловой обработкой удаляют фибриноген, вносят стандартное количество тромбина, содержащего инактиватор гепарина, смесь инкубируют и затем определяют в ней остаточную (после взаимодействия с АТ III) активность тромбина.
Активность тромбина определяют по времени свертывания стандартного раствора фибриногена.
Чем активнее АТ IIIв исследуемой плазме, тем меньше остаточная активность тромбина, и тем медленнее происходит образование сгустка.
Протеин С
Протеин С-скриниг-тест – набор для определения общей активности протеина С: АЧТВ-реагент, АЧТВ-реагент с активатором протеина С, плазма-калибратор, 0,025 М раствор кальция хлорида.
Принцип метода: инкубация исследуемой плазмы с активатором вызывает активацию эндогенного протеина С и протеина S, что приводит к удлинению времени свертывания нормальной плазмы в тесте АЧТВ. Без добавления активатора АЧТВ в этой же плазме не изменено. В плазме с дефицитом активности системы протеина С это удлинение менее выражено, чем в норме.
Результаты определения активности системы протеина С выражают в виде Нормализованного Отношения (НО):
НО = [(АЧТВ актив/АЧТВ) больн/(АЧТВ актив/АЧТВ) калибр] х НО калибр
Где: НО калибр – НО плазмы-калибратора, указанов паспорте на набор
У здоровых лиц НО составляет 1,0 ± 0,3. Значения ниже 0,7 свидетельствуют о значительных нарушениях в системе протеина С.
Определение активности протеина С оптическим методом (с применением хромогенного субстрата)
Коагуляционным методом
Иммунохимическим методом (выявляет только классическое снижение концентрации протеина С и не определяет его функциональную неполноценность)