5.10. Основные компоненты системы первичных антикоагулянтов (антитромбин III, протеин с). Лабораторная диагностика

• Физиологические антикоагулянты разделяют на первичные и вторичные. Первичные антикоагулянты всегда присутствуют в крови, а вторичные образуются в результате коагуляционных реакций.

• К первичным антикоагулянтамотносятся:

• антитромбин III;

• протеин С;

• протеин S;

• ингибитор внешнего пути свертывания (TFPI);

• кофактор гепарина II

• Антитромбин III (АТ) обладает мощным антикоагулянтным действием только в комплексе с гепарином. Этот комплекс надежно блокирует коагуляционные факторы IIа, IXа, Xа, XIа, XIIа и калликреин.Дефицит АТ – серьезный фактор риска развития венозных тромбозов.

• Кофактор  гепарина II. Его действие усиливается во много раз при взаимодействии с гепарином. Однако клиническая значимость его невелика.

• Ингибитор внешнего пути свертывания (TFPI). Установлено, что он тормозит образование фактора Xа по внешнему механизму коагуляции.

• Антикоагулянтная система протеина С включает в себя цепь последовательных биохимических реакций. Образующийся в процессе коагуляции тромбин связывается на эндотелии с мембранным гликопротеином –тромбомодулином, и вследствие этого теряет всю свою коагуляционную активность, но сохраняет способность активировать протеин С. После этого активированныйпротеин Сспротеином S в качестве кофактора,  на фосфолипидной поверхности расщепляетфактор Vаифактор VIIIа. Этот механизмэффективно предупреждает дальнейшее образование тромбина и трансформирует его в активатор антикоагулянтного механизма.

• Вторичными антикоагулянтамиявляютсяпродукты деградации фибриногена и фибрина. Они тормозят конечный этап коагуляции.

Определение активности антитромбина III в плазме крови человека по U. Abildgaard (Абильгаард-АТ III тест)

• Реагенты: лиофилизированный тромбин, плазма-калибратор, лиофилизированная, буфер имидазоловый концентрированный, стабилизатор (этиленгликоль).

• Принцип метода: оценку активности антитромбина IIIв исследуемой плазме проводят по остаточной активности тромбина после его взаимодействия с антитромбиномIIIв дефибринированной плазме.

• Определение активности АТ IIIпроводят по калибровочному графику, в котором время образования сгустка фибрина прямо пропорционально активности АТIII. Процесс стандартизируется проведением реакции при постоянной температуре (37⁰С).

• В тесте участвуют 3 плазмы: исследуемая (дефибринируется), плазма-калибратор с аттестованной активностью АТ III(дефибринируется) и фибриноген-плазма (любая, донорская) – является источником фибриногена.

• В исследуемой плазме крови тепловой обработкой удаляют фибриноген, вносят стандартное количество тромбина, содержащего инактиватор гепарина, смесь инкубируют и затем определяют в ней остаточную (после взаимодействия с АТ III) активность тромбина.

• Активность тромбина определяют по времени свертывания стандартного раствора фибриногена.

• Чем активнее АТ IIIв исследуемой плазме, тем меньше остаточная активность тромбина, и тем медленнее происходит образование сгустка.

Протеин С

• Протеин С-скриниг-тест – набор для определения общей активности протеина С: АЧТВ-реагент, АЧТВ-реагент с активатором протеина С, плазма-калибратор, 0,025 М раствор кальция хлорида.

• Принцип метода: инкубация исследуемой плазмы с активатором вызывает активацию эндогенного протеина С и протеина S, что приводит к удлинению времени свертывания нормальной плазмы в тесте АЧТВ. Без добавления активатора АЧТВ в этой же плазме не изменено. В плазме с дефицитом активности системы протеина С это удлинение менее выражено, чем в норме.

• Результаты определения активности системы протеина С выражают в виде Нормализованного Отношения (НО):

• НО = [(АЧТВ актив/АЧТВ) больн/(АЧТВ актив/АЧТВ) калибр] х НО калибр

• Где: НО калибр – НО плазмы-калибратора, указанов паспорте на набор

• У здоровых лиц НО составляет 1,0 ± 0,3. Значения ниже 0,7 свидетельствуют о значительных нарушениях в системе протеина С.

• Определение активности протеина С оптическим методом (с применением хромогенного субстрата)

• Коагуляционным методом

• Иммунохимическим методом (выявляет только классическое снижение концентрации протеина С и не определяет его функциональную неполноценность)